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以S-腺苷同型半胱氨酸水解酶为潜在靶点的新药研究进展
S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)是细胞内广泛存在的一种酶,它催化S-腺苷同型半胱氨酸(AdoHcy) 水解生成腺苷和同型半胱氨酸.抑制SAHH将导致细胞内甲基化抑制物AdoHcy的堆积,从而对转甲基反应产生反馈性抑制作用.而甲基化对于维持细胞的活性是必需的.鉴于SAHH在调节生物体转甲基化反应中的核心地位,它已被选择作为多种新药研发的重要靶点,包括免疫抑制剂、抗病毒药、防治动脉粥样硬化和阿尔茨海默病药物.SAHH抑制剂全新的化学结构、良好的作用效果和独特的作用靶点已引起国内外研究者广泛的兴趣.
关键词： S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 自身免疫性疾病 病毒 动脉粥样硬化 阿尔茨海默病 -
殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化
目的:对殊异韦荣菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(sahH)基因进行克隆、鉴定、表达和纯化,为研究龋病的微生物致病机制提供理论依据.方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,采用PCR方法扩增sahH基因序列,构建pET28a-sahH重组质粒,转化到大肠杆菌(E.coli) BL21(DE3)感受态细胞中,酶切、PCR鉴定和测序后,IPTG诱导蛋白表达,并进行分离纯化.结果:PCR扩增产物全长为l 410 bp.测序结果经BLAST软件分析,与GenBank中所报道的绿脓假单胞菌sahH基因序列进行对比分析,其同源性为99％.该基因序列已登陆GenBank,序列号为KC477409.SDS-PAGE分析,重组质粒在E.coli JM109中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为50 000,诱导5h蛋白表达量高,浓缩后蛋白浓度为5.4g·L-1.Western blotting法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符.结论:成功克隆了殊异韦荣菌sahH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架,且重组载体表达出融合蛋白,分离纯化得到目的蛋白.
关键词： 殊异韦荣菌 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 基因克隆 基因表达 纯化 -
南极嗜冷假单胞菌7197 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)基因的克隆与序列分析
从南极普利兹湾深海沉积物中筛选到一株耐冷菌株7197,其16S rDNA序列分析表明该菌株属于假单胞菌属 (Pseudomonas).作者通过设计引物,从该菌的全基因组DNA中克隆到编码S-腺苷-L-高半胱氨酸(SAHH)的完整ORF,全长为1424bp.使用DNAMAN(5.1)软件对全长ORF为1424bp的SAHH基因进行分析,SAHH基因编码一个由474AA残基组成、分子量预计为52523 Da的SAHH蛋白质,与Psychrobacter sp. 273-4 的SAHH有96.84%的相似性;与Acinetobacter sp. ADP1的SAHH有79%的相似性;与Pseudomonas fluorescens Pf-5的SAHH有75%的相似性.
关键词： 嗜冷假单胞菌 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 克隆 序列分析 -
Sirt1对糖尿病心肌病大鼠早期心肌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的调节作用及其机制研究
目的:通过建立糖尿病大鼠模型,探讨沉默信息调节因子(Sirt1)对S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)糖尿病心肌病早期的调节作用及其机制. 方法:采用高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,分为对照组、早期糖尿病模型组(DM组)和白藜芦醇处理组(RES组),RES组给予白藜芦醇2.5 mg/(kg·d)灌胃2周处理.HE染色法观察心肌组织病理结构变化,超声心动图检测心功能相关指标,高效液相色谱法检测同型半胱氨酸(Hcy)、S-腺苷甲硫氨酸(SAM)及S-腺苷同型半胱氨酸(SAH),Western blot检测各组心肌组织SAHH、Srit1等蛋白表达变化. 结果:显微镜下DM组大鼠心肌组织可见不同程度炎细胞浸润、甚至变性,而RES组心肌组织可见少量炎性细胞浸润,少量心肌细胞呈长杆状,坏死灶不明显,嗜酸性变较DM组轻.HPLC检测结果显示对照组、DM组和RES组的Hcy分别为(45.37±7.99)、(101.78±16.77)和(86.33±10.09) μmol/L,DM组和RES组较对照组升高,但RES组低于DM组;SAH分别为(50.33±7.34)、(22.92±4.32)和(33.45±7.88) μmol/L,DM组和RES组较对照组降低,但RES组高于DM组;SAM分别为(66.34±9.99)、(69.56±9.01)和(70.89±11.33) μmol/L,各组间无显著差异;SAHH分别为(44.11±5.17)、(92.33±17.56)和(19.73±4.07) μmol/L,DM组较对照组升高,RES组较对照组降低;Srit1分别为(80.12±10.09)、(29.11±3.91)和(107.32±13.24) μmol/L,DM组较对照组降低,RES组较对照组升高. 结论:SAHH及下游Hcy等的表达可能是早期糖尿病心肌病发生发展的重要作用机制,而Sirt1对SAHH的表达调控作用可能起重要作用.
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S-腺苷同型半胱氨酸水解酶在同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖中作用机制的研究
目的 探讨S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosyl homocysteine；SAH)水解酶(SAHH)在同型半胱氨酸(Homocysteine；Hcy)致平滑肌细胞增殖中的作用机制。方法 原代培养平滑肌细胞(VSMCs)，用0、50、100、200、500μM浓度Hcy干预VSMCs，高效液相色谱法(HPLC)检测S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine，SAM)和SAH含量的变化；实时RT-PcR和Western blot检测SAHH表达的变化；MTT法检测Hcy对VSMCs增殖的影响。结果 HPLC结果表明，VSMCs与0、50、100、200、500μM Hcy培养72h后，细胞中SAH的含量明显增加，而细胞中SAM的含量和SAM/SAH的比值下降，与对照组比较，差异均有显著性(P<0.05)，实时RT-PCR．和Western blot结果显示，SAHH mRNA和蛋白水平下降，与对照组比较差异有显著性(P<0.05)，MTT显示，在50μM Hcy组，VSMCs数量明显增加，而100、200、500μM Hcy组VSMCs数量反较对照组减少。结论 SAHH表达下调致使SAM/SAH的比值下降可能是Hcy引起VSMCs增殖的重要机制之一。
关键词： S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 同型半胱氨酸 平滑肌细胞 -
非马沙坦对2型糖尿病大鼠早期心肌S-腺苷同型 半胱氨酸水解酶的调节作用
目的:探讨非马沙坦(FIM)在糖尿病心肌病(DCM)早期发生发展过程中的干预作用及对S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)的调节作用.方法:健康雄性SD大鼠,高脂饮食5周后,腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,实验将大鼠分为正常对照(control)组、早期糖尿病模型(DM)组和DM+FIM组,DM+FIM组在造模成功后给予FIM灌胃处理.4周后,对各组动物进行血清学检测,包括空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和空腹胰岛素(FINS)的水平,超声心动图检测心功能相关指标,高效液相色谱法(HPLC)检测同型半胱氨酸(Hcy)、S-腺苷甲硫氨酸(SAM)及S-腺苷半胱氨酸(SAH)的含量,Western blot检测各组大鼠心肌组织中SAHH等蛋白表达变化.结果:2型糖尿病大鼠模型造模成功率为84％,与DM组相比,DM+FIM组动物体重增加显著(P<0.05),心脏指数、左心室指数、FBG和LDL-C明显降低(P<0.05);超声心动图检测显示,与DM组相比,DM+FIM组大鼠射血分数明显升高(P<0.05);HPLC检测结果显示,Hcy水平和SAM/SAH显著降低(P<0.05);Western blot检测结果显示,相对于control组,DM组心肌组织中SAHH的表达显著升高,而DM+FIM处理组则下降.结论:SAHH及下游Hcy等因子的表达可能是早期糖尿病心肌病发生发展的重要作用机制,而非马沙坦可能通过抑制SAHH表达而减轻DCM.
关键词： 糖尿病心肌病 非马沙坦 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶
