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殊异韦荣菌文献资料
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殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化
目的:对殊异韦荣菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(sahH)基因进行克隆、鉴定、表达和纯化,为研究龋病的微生物致病机制提供理论依据.方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,采用PCR方法扩增sahH基因序列,构建pET28a-sahH重组质粒,转化到大肠杆菌(E.coli) BL21(DE3)感受态细胞中,酶切、PCR鉴定和测序后,IPTG诱导蛋白表达,并进行分离纯化.结果:PCR扩增产物全长为l 410 bp.测序结果经BLAST软件分析,与GenBank中所报道的绿脓假单胞菌sahH基因序列进行对比分析,其同源性为99％.该基因序列已登陆GenBank,序列号为KC477409.SDS-PAGE分析,重组质粒在E.coli JM109中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为50 000,诱导5h蛋白表达量高,浓缩后蛋白浓度为5.4g·L-1.Western blotting法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符.结论:成功克隆了殊异韦荣菌sahH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架,且重组载体表达出融合蛋白,分离纯化得到目的蛋白.
关键词： 殊异韦荣菌 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 基因克隆 基因表达 纯化
