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不同电融合和激活参数对猪体细胞核移植胚胎发育的影响
目的:摸索猪体细胞核移植佳的融合和激活条件.方法:利用体外成熟的去核猪卵母细胞为受体,颗粒细胞为供核细胞,透明带间隙注射法构建重构胚,对电融合和激活的参数(电场强度、脉冲宽度、脉冲次数、融合液中Ca2+浓度、联合激活参数)进行摸索.结果:发现在电场强度1.5 kV/cm,脉冲宽度30 μs,2次脉冲(间隔3 s),电融合液中0.1 mmol/L的Ca2+浓度下进行电激活,进而用(CB,7.5 μg/ml)+(6-DMAP,2 mmol/L)激活3.5 h发育率高,48 h卵裂率为72.5%,第6天桑葚胚率为35.1%;初次尝试了在胚胎培养前48 h加入0.05 mol/L的甘露醇来增加渗透压以减少电激活后重构胚的碎片化程度,但发现卵裂率及桑葚胚发育率与对照组差异不显著.结论:初步得到了适宜的猪体细胞核移植的融合和激活条件,为随后克隆胚早期发育基因的研究打下了基础.
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声动力学疗法的研究进展
声动力学疗法(sonodynamic therapy,SDT)是近10年在日本兴起的一种以超声为动力激活血卟啉(hematoporphyrin,Hp)及其衍生物治疗癌症的新方法, 它利用超声具有深部穿透并能聚焦于肿瘤局部的能力,化学激活相对无毒的声敏剂分子,产生氧自由基,有针对性地杀伤肿瘤细胞;加之超声装置简单,价格低廉,操作方便,可重复使用,因而SDT被认为是一种很有推广前景的物理疗法,尤其对深部和中晚期癌症的治疗[1].
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辅助激活联合补救单精子胞浆注射在常规受精失败卵母细胞中的应用
目的:探讨辅助激活联合单精子胞浆注射(ICSI)技术在常规IVF受精失败周期中的应用.方法:15例常规IVF受精失败患者卵母细胞接受辅助激活联合ICSI处理(激活组),另15例常规IVF受精失败患者卵母细胞直接行补救ICSI处理(非激活组),记录和分析未受精卵母细胞经辅助激活联合ICSI处理后所获受精率、优质胚胎率、囊胚形成率及妊娠结局.结果:激活组(15周期,220枚未受精卵母细胞)正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、囊胚形成率分别为50%(110/220)、90.9%(100/110)、33%(33/100)及15%(15/100),其中妊娠1例;非激活组(15周期,200枚未受精卵母细胞)正常受精率、卵裂率、优质胚胎率及囊胚形成率分别为85%(170/200)、92.9%(158/170)、9.5%(15/158)及0,无妊娠发生.在正常受精率上非激活组高于激活组,且存在显著性差异(P<0.05),而在优质胚胎率和囊胚形成率方面,激活组显著高于非激活组(P<0.05).结论:辅助激活联合ICSI可以提高常规IVF受精失败周期的优质胚胎率及囊胚形成率进而改善妊娠结局.
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小型猪克隆胚的构建及胚胎移植研究
目的 建立小型猪的体细胞核移植技术,为开展转基因小型猪动物模型研究提供技术支撑.方法 应用体细胞核移植技术,以小型猪胎儿成纤维细胞和枫泾猪耳成纤维细胞作为供体细胞进行体细胞核移植,并将两种重构胚混合后进行胚胎移植.结果 两种供体细胞在体外发育能力上无显著差异(P＞0.05)；电融合后进行化学激活能部分提高囊胚发育率,但差异不显著(P＞0.05).两种方法生产的小型猪和枫泾猪克隆胚胎混合后,经胚胎移植均能顺利产下4只健康后代.经微卫星亲缘关系鉴定,克隆猪100％与供体细胞相同,与代孕母猪无关.结论 建立的克隆平台能够用于克隆猪的生产.
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化学激活在小鼠圆形精子细胞体外受精中的应用
目的:通过对生精细胞体外培养所获圆形精子细胞显微注射(ROSI)后的小鼠卵母细胞进行单一和联合化学激活,寻找小鼠圆形精子细胞体外受精的佳激活方案. 方法:采用不同浓度的乙醇(EH)、离子霉素(Ion)、钙离子载体A23187(CIA)、氯化锶(SrCl2)、6-二甲基苯胺嘌呤(6-DMAP)及放线菌酮(CHX)对ROSI后的卵母细胞进行不同作用时间的激活,并根据不同的激活途径,联合两种佳激活浓度和时间的激活剂对ROSI后的卵母细胞行联合激活,以受精率、卵裂率和桑囊胚形成率为观察指标,比较单一及联合方案对卵母细胞的激活效果.结果:①单一激活时,各激活剂的佳方案分别为7％ EH作用6 min,5μmol/L CIA作用5 min,5μmol/L Ion作用5 min,2 mmol/L 6-DMAP作用2h,10 mmol/L SrCl2作用1.5h,10 μg/ml CHX作用1.5h,其中10 mmol/L SrCl2作用1.5h桑囊胚率高,显著优于CHX方案(P＜0.05),但与其它各组无显著性差异;②EH+ 6-DMAP组桑囊胚率(29.63％)显著高于其它联合激活组以及除SrCl2以外所有单一激活方案(P＜0.05),且正常受精率、卵裂率及桑囊胚率均高于(S)rCl2组,但无显著性差异. 结论:单一激活方案中10 mmol/L SrCl2作用1.5h,联合方案中7％ EH作用6 min+2 mmol/L 6-DMAP作用2h对体外培养所获圆形精子细胞ROSI后的卵母细胞激活效果佳.EH +6-DMAP的联合激活方案优于单一激活.
