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小鼠小肠干细胞谱系追踪方法的建立及其在放射损伤中的应用
目的 利用Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠建立谱系追踪方法,用于观察Lgr5+小肠干细胞在小肠组织更新中的作用,并研究辐射对小肠干细胞组织重建的影响.方法 通过基因型分析鉴定Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠.他莫西芬诱导小鼠体内的荧光蛋白表达,激光共聚焦显微镜观察诱导后小肠干细胞的分化.采用60Co γ射线(15Gy)照射Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠,观察辐射对小肠干细胞组织重建的影响.结果 提取鼠尾DNA通过PCR方法鉴定Lgr5基因(174bp),获得双阳性小鼠.他莫西芬(100mg/kg)单次诱导后,激光共聚焦观察到Lgr5+小肠干细胞在诱导后5d开始分裂,7d已到达绒毛顶端,14d少量绒毛全部带有荧光,45d更多的小肠绒毛中存在荧光细胞,而且更加稠密.但在15Gy照射后小鼠小肠绒毛脱落严重,隐窝处没有荧光出现.结论 成功建立了小肠干细胞谱系追踪模型,并初步观察了辐射对小肠干细胞损伤的影响.
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放射性肠损伤后小肠干细胞再生的研究与进展
背景:放射性肠损伤造成小肠干细胞数量急剧减少和功能减退,导致损伤后的肠上皮修复非常困难,促进小肠干细胞数量和功能的恢复是当前治疗放射性肠损伤、修复受损肠上皮的研究热点.目的:综述放射性肠损伤后小肠干细胞补充来源及调控机制的新研究进展.方法:分别以“小肠干细胞,放射性肠损伤;intestinal stem cell,radiation-induced intestinal injury”为检索词,由第一作者检索2010年1月至2016年6月中国期刊全文数据库、PubMed数据库及万方数据库相关文章,进行归纳总结.结果与结论:小肠干细胞的命运受多种信号通路的调控,研究比较明确的有Wnt/β-catenin、BMP、Notch和EGF信号通路.早期分泌型祖细胞在正常稳态下增殖缓慢,对放射性损伤不敏感,并且在一定条件下可重新逆转分化成为小肠干细胞,是“储备干细胞”的良好来源,而巢在早期分泌型祖细胞逆转分化为小肠干细胞的过程中发挥着重要作用.探究上述逆转分化过程的具体调控机制对于深入理解放射性肠损伤后肠上皮的修复过程,从而确立主动调控肠损伤修复的理念具有重要科学意义.
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小肠干细胞与其微环境
人类和啮齿类动物的小肠上皮终生更新不断,这种更新是由位于小肠隐窝底部的多潜能干细胞驱动的.小肠上皮细胞的凋亡脱落及受损坏死与干细胞增殖、分化之间的动态平衡,在维持肠道屏障结构和功能的完整以及损伤后的修复中扮演着重要角色.
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肾气丸对衰老大鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的调节作用
目的:探讨肾气丸对衰老大鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的调节作用.方法:使用SD大鼠,根据不同发育阶段分为6月龄成年对照组、22月龄衰老模型组及肾气丸低、高剂量组.采用HE染色观察小肠基本形态及测量相应指标,采用免疫组织化学法检测各组大鼠小肠PCNA、Bmi 1、β-catenin、GSK-3β的表达情况.结果:与成年组比较,衰老模型组绒毛长度、绒毛宽度、隐窝深度、绒毛/隐窝值(V/C值)均显著降低,PCNA、Bmi 1 、β-catenin表达显著降低,而GSK-3β表达显著升高.与衰老模型组比较,肾气丸各组绒毛长度、绒毛宽度、隐窝深度、绒毛/隐窝值(V/C值)均显著升高,PCNA、Bmi 1、-catenin表达显著均升高,GSK-3β表达显著降低.结论:肾气丸可改善衰老大鼠小肠干细胞增殖功能并上调Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达.
关键词： 肾气丸 衰老 小肠干细胞 Wnt/β-catenin信号通路 -
竹节参皂苷Ⅳa对高脂饮食小鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的:探讨竹节参皂苷Ⅳa对高脂饮食小鼠小肠干细胞及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法:C57 BL小鼠雌雄各半随机分成4组,每组10只,即正常对照组、模型组及竹节参皂苷Ⅳa低、高剂量组.HE染色观察小肠形态学变化,免疫组化检测各组小肠干细胞数量、PCNA表达及其微环境Wnt/β-catenin信号通路的变化.结果:与正常对照组比较,模型组小肠绒毛长度、V/C值、PCNA表达量及杯状细胞数量、Bmi1阳性表达的小肠干细胞数量显著升高,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin信号显著上调(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,竹节参皂苷Ⅳa组绒毛长度、V/C值、PCNA表达量、杯状细胞数量、Bmi1阳性表达的小肠干细胞数量显著降低,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin信号显著下调(P＜0.05或P＜0.01).结论:竹节参皂苷Ⅳa可通过Wnt/β-catenin信号通路调控小肠干细胞微环境,改善其过度增殖分化状态和抑制小肠干细胞增多,调节小肠干细胞功能.
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淫羊藿总黄酮对衰老大鼠小肠干细胞及其微环境的调节作用
目的:探讨淫羊藿总黄酮对衰老大鼠小肠干细胞及其微环境变化的调节作用.方法:SD大鼠按其不同发育阶段分为6月龄成年组、24月龄衰老组及淫羊藿总黄酮低、中、高剂量组.采用常规HE染色,高碘酸-Schiff试剂(PAS)染色,免疫组化(荧光),Western bolt检测各组别小肠干细胞数量,增殖分化功能及其微环境相关信号的变化.结果:与成年组比较,衰老组小肠绒毛长度、隐窝深度、V/C值、杯状细胞数量及PCNA表达量降低,小肠干细胞数量显著减少,干细胞微环境Wnt/β-catenin和BMP信号均呈下调趋势.给予淫羊藿总黄酮后,与衰老组比较,小肠隐窝干细胞数量有所增加,增殖分化功能有所提升,表现为绒毛长度、隐窝深度、V/C值、杯状细胞数量及PCNA表达量增加,小肠干细胞微环境Wnt/β-catenin和BMP信号均呈上调趋势.结论:衰老过程中,小肠干细胞数量减少,增殖分化功能降低,干细胞微环境信号通路的蛋白表达减少;淫羊藿总黄酮可改善小肠干细胞的增殖分化功能,上调干细胞微环境Wnt/β-catenin和BMP信号通路相关蛋白表达.
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脱氧胆酸对C57BL/6小鼠回肠类器官生长的影响
目的：建立小鼠小肠类器官培养系统，探讨脱氧胆酸（DCA）对小肠类器官生长的影响。方法取8周龄C57BL/6小鼠末段回肠，EDTA法分离，收集隐窝后Matrigel基质胶包埋，于完整培养基中培养。以无水酒精和正常小肠类器官为对照，予100μmol/L高浓度DCA短期干预2 d，10μmol/L DCA长期干预10 d，并去除DCA后再长期培养10 d，观察类器官的生长和出芽情况。结果高浓度DCA短期干预类器官，肠道类器官球形结构形成率、肠道类器官结构[形成率、类器官演化率和出芽数量均明显减少（P<0.05），短期去除DCA四项指标仍减少（P<0.05），长期去除DCA后仅肠道类器官结构形成率和出芽数量减少（P<0.05）。低浓度DCA短期干预肠道类器官结构形成率和出芽数量减小（P<0.05），长期干预肠道类器官球形结构形成率、肠道类器官结构形成率和出芽数量明显减少（P<0.05），去除DCA后仅肠道类器官结构形成率和出芽数量低于正常（P<0.05）。结论本研究成功建立小鼠小肠类器官培养技术，DCA损伤小肠类器官并影响其生长，长期去除DCA后可部分恢复其功能。
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热量限制与小肠干细胞的研究进展
小肠是消化和吸收的主要部位,其上皮由多种细胞组成,绒毛部上皮含吸收细胞、杯状细胞和少量的内分泌细胞;小肠腺除上述细胞外,还有潘氏细胞和小肠干细胞(intestinal stemcell,ISC).潘氏细胞是小肠腺的特征性细胞,常三五成群位于小肠腺底部,与ISC相邻,并且能够影响ISC的增殖和分化,其分泌防御素、溶菌酶,对肠道微生物有杀灭作用.
关键词： 热量限制 小肠干细胞 Paneth细胞 雷帕霉素靶蛋白复合物1
