首页 > 文献资料
-
mTORC1/2信号通路在肿瘤治疗中的应用
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是PI3K-Akt信号传导通路的重要下游蛋白激酶.真核生物的mTOR被体内的生长因子、营养及能量等信号激活后,能加速细胞内蛋白质的合成,为肿瘤细胞的生长提供物质基础,所以mTOR通路是治疗癌症的重要靶点.雷帕霉素(西罗莫司)及其衍生物对mTOR具有特异性抑制作用,在临床上被用于多种癌症的治疗.由于肿瘤的高度异质性和复杂性,一些肿瘤对mTOR抑制剂具有耐药性.因此,充分了解mTOR通路对肿瘤增殖和生存的作用机制,对进一步提高肿瘤疗效具有重要意义.
关键词： 西罗莫司 肿瘤 治疗学 哺乳动物 雷帕霉素靶蛋白复合物1 雷帕霉素靶蛋白复合物2 -
抑制雷帕霉素靶蛋白复合物1信号通路可改善孤独症谱系障碍模型BTBR小鼠的症状
目的 探讨抑制孤独症谱系障碍模型BTBR小鼠的中枢雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)信号通路能否改善其交流和社交障碍.方法 选择6只6周龄C57BL/6J (B6)小鼠和18只6周龄BTBR小鼠,每笼3只小鼠,自由进食和饮水.将6只B6小鼠(B6组)和6只BTBR(BTBR组)小鼠适应性饲养1周后,进行交流障碍实验和社交行为实验,实验结束后处死两组小鼠,提取其大脑额叶皮层组织抽提蛋白进行后续Western免疫印迹实验.将余12只6周龄BTBR小鼠分成干预组和对照组,每组6只,分别于第三脑室注射2 μL带有短发夹RNA(shRna)-Raptor的慢病毒和带有shRna阴性对照的慢病毒[滴度为1×1010空斑形成单位(PFU)/mL],注射2周后进行前述的行为实验和Western免疫印迹实验.观察并记录每只小鼠10 min内吸嗅蘸有鼠尿、乙醇和0.9％氯化钠溶液的棉签所用的时间,以及社交行为(身体接触和跟随同伴)和非社交行为(自我理毛和区域探索)的发生次数;检测小鼠前额叶皮层Raptor蛋白或RNA,以及磷酸化蛋白S6(pS6)的蛋白表达情况.结果 交流障碍实验结果显示,BTBR组小鼠吸嗅鼠尿的时间显著短于B6组小鼠(P＜0.05),两组小鼠吸嗅0.9％氯化钠溶液和乙醇的时间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).社交行为实验结果显示,BTBR组小鼠的身体接触和跟随同伴的次数均显著少于B6组小鼠(P值均＜0.05),自我理毛的次数显著多于B6组小鼠(P＜0.05);两组小鼠区域探索次数的差异无统计学意义(P＞0.05).Western免疫印迹实验结果显示,BTBR组小鼠前额叶皮层mTORC1信号通路下游pS6的蛋白相对表达量显著高于B6组(P＜0.05).经慢病毒干预后,实时定量PCR结果显示,干预组小鼠前额叶皮层Raptor mRNA的相对表达量显著低于对照组(P＜0.05);Western免疫印迹实验结果显示,干预组小鼠前额叶皮层Raptor蛋白和mTORC1信号下游pS6的蛋白相对表达量均显著低于对照组(P值均＜0.05);交流障碍实验结果显示,干预组小鼠吸嗅鼠尿的时间显著长于对照组(P＜0.05),两组小鼠吸嗅0.9％氯化钠溶液和乙醇的时间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05);社交行为实验结果显示,干预组小鼠的身体接触次数显著多于对照组(P＜0.05),自我理毛次数显著少于对照组(P＜0.05),两组小鼠跟随同伴和区域探索次数的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 抑制孤独症谱系障碍模型BTBR小鼠的中枢mTORC1信号通路能明显改善其社交障碍和刻板动作,该小鼠的孤独症谱系障碍样表现与其中枢异常激活的mTORC1信号通路明显相关.
关键词： 孤独症谱系障碍 雷帕霉素靶蛋白复合物1 BTBR -
翼状胬肉中核糖体S6蛋白磷酸化、细胞周期蛋白D1的表达及意义
目的 研究核糖体S6蛋白磷酸化(ribosomal S6 protein phosphorylation,P-S6)和细胞周期蛋白D1(CyclinDl)在翼状胬肉中的表达及相关性,探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)信号通路在翼状胬肉发病机制中的作用.方法 收集翼状胬肉组织31例,正常结膜组织17例,利用免疫组织化学和Western blot进行P-S6和CyclinD1的检测及比较.结果 Western blot检测6例翼状胬肉组织中P-S6蛋白/S6蛋白表达(1.196±0.101)显著高于正常结膜组织(0.295 ±0.056),差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学染色结果显示:翼状胬肉中P-S6、CyclinD1的阳性表达率均为100％(25/25),正常结膜组织中P-S6阳性表达率为18.2％(2/11)、CyclinDl阳性表达率为9.1％(1/11),正常结膜组织与翼状胬肉组织中P-S6与CyclinD1表达差异均有统计学意义(均为P＜0.05).翼状胬肉组织中P-S6与CyclinD1的表达呈正相关(r=0.752,P＜0.05).结论 mTORC1信号通路在翼状胬肉发病过程中起重要作用,并可能通过调控CyclinD1的表达来实现
-
低密度脂蛋白受体表达失调在高糖腹膜透析液诱导腹膜纤维化中的作用
目的 观察低密度脂蛋白受体(LDLr)表达失调在高糖腹膜透析液(PDS)诱导腹膜纤维化中的作用及可能机制.方法 以人腹膜间皮细胞(PMC)为研究对象.分别在含1.50％、2.50％及4.25％葡萄糖的PDS中培养PMC 6、12、24 h以筛选高糖PDS组的干扰条件.以4.25％甘露醇作为高渗对照.细胞分为对照组(PBS干预)和高糖PDS组(含4.25％葡萄糖的PDS干预24 h).倒置显微镜观察细胞形态变化;实时定量PCR和Western印迹分别检测平滑肌肌动蛋白0(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)、胶原Ⅰ的mRNA和蛋白表达;油红0染色及Filipin染色观察PMC中脂质沉积情况,高效液相色谱测定细胞内胆固醇酯含量;免疫荧光双重染色观察胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)裂解激活蛋白(SCAP)与高尔基体共表达情况,实时定量PCR和Western印迹分别检测LDLr、SREBP-2及SCAP的mRNA和蛋白表达;实时定量PCR和Western印迹分别检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)、效应子核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)的mRNA和蛋白表达.结果 (1)与1.50％PDS干预组比较,4.25％PDS刺激PMC 24 h后,细胞内LDLr表达明显升高(P＜0.05);各时间点高渗对照组细胞内LDLr表达无明显改变(P＞0.05).(2)与对照组比较,高糖PDS组细胞形态由圆形铺路石样向长梭形转变,而且胞外基质蛋白α-SMA、FSP-1及胶原Ⅰ的表达均增加(均P＜ 0.05),细胞内脂质沉积增多(P＜0.05),细胞内SCAP与高尔基的共表达明显增多,LDLr、SREBP-2及SCAP的mRNA和蛋白表达随之升高(均P＜0.05),mTOR、4EBP1及S6K1的mRNA和磷酸化蛋白表达升高(均P＜0.05).结论 高糖PDS可能通过激活PMC细胞内雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)通路,破坏LDLr负反馈调节,从而导致细胞内脂质沉积增加,胞外基质积聚,促进腹膜纤维化发生.
关键词： 腹膜透析 受体 LDL 细胞内信号肽和蛋白质类 腹膜后纤维化 雷帕霉素靶蛋白复合物1 -
热量限制与小肠干细胞的研究进展
小肠是消化和吸收的主要部位,其上皮由多种细胞组成,绒毛部上皮含吸收细胞、杯状细胞和少量的内分泌细胞;小肠腺除上述细胞外,还有潘氏细胞和小肠干细胞(intestinal stemcell,ISC).潘氏细胞是小肠腺的特征性细胞,常三五成群位于小肠腺底部,与ISC相邻,并且能够影响ISC的增殖和分化,其分泌防御素、溶菌酶,对肠道微生物有杀灭作用.
关键词： 热量限制 小肠干细胞 Paneth细胞 雷帕霉素靶蛋白复合物1
