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大肠癌负相关基因ST13的研究进展
ST13基因是近几年中国医学研究者新发现的一种与大肠癌发病有关的负相关基因.已被NCBI作为新基因接受.其序列与伴侣分子p48完全相同,如ORT为1.1kb,编码氨基酸369个,蛋白质计算分子量为41.324,SDS-PAGE表现相对分子质量约4.8×104,故被认为是同一蛋白.ST13/p48还称Hip或热休克蛋白结合蛋白.ST13基因定位于人染色体22q13,cDNA全长3 145 bp.就ST13基因的历史、属性、染色体定位、蛋白表达、实验室检测方法和基因的功能研究方法作一综述.
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大肠癌相关基因ST13的原核表达及鉴定
目的: 原核表达大肠癌相关基因ST13,并予以鉴定.方法:将ST13 cDNA经PCR扩增和亚克隆,与GST原核表达载体pGEX-4T-2重组,转化E.coli INVαF′菌表达,经Gluta th ione Sepharose 4B亲和层析GST-ST13融合蛋白,再以凝血酶切得到ST13蛋白.结果:限制性酶切和DNA测序表明,ST13cDNA ORF正确克隆于pGEX-4T-2多克隆位点 .经IPTG诱导表达的GST-ST13融合蛋白主要存在于可溶性上清,表达量占大肠杆菌总蛋白2 0%.经亲和层析,每升诱导菌回收融合蛋白2.5 mg,纯度为91.3%.Western-blot证实, 原核表达的ST13蛋白、细胞中天然ST13蛋白的10%SDS-PAGE表观分子量,约50 kD.结论:成功构建了ST13基因原核表达质粒,并大量表达和纯化了ST13蛋白.
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大肠癌相关基因ST13转录启动区的增强子研究
目的:探讨大肠癌相关基因ST13上游5'近端调控区(-595～+74)中增强子碱基序列.方法:设计系列缺失PCR引物,扩增ST13基因5'近端碱基序列片段,pGEMT-EASY克隆、测序,再亚克隆到pGL2系列瞬间报告载体上,等量转染SW620细胞,检测荧光酶活性.结果:系列扩增碱基序列片段669 bp、263 bp、163 bp对pGL2-Basic中的荧光素酶基因均具有较强的启动表达作用,片段101 bp、47 bp则几乎没有启动下游基因表达的作用.而101 bp片段与系列报告载体pGL2重组的分子,在其中含有启动子的报告基因表达载体中具有明显的增强作用(P＜0.01),但作用强度小于阳性对照pGL2-Control(P＜0.05).结论:位于ST13基因上游5'近端调控区的碱基序列101 bp片段(-595～-494),是一个基因转录调控增强子.
关键词： ST13基因 增强子元件(遗传学) 碱基序列 -
应用套式PCR克隆ST13基因cDNA的5′端序列
目的 获得ST13基因cDNA5′端的未知序列.方法 应用套式PCR方法直接从cDNA文库中扩增该基因的5′端序列,然后将扩增的片段克隆到pGEM-T.easy载体,并进行序列分析.结果 第1次PCR后得到1条约550bp的片段,经套式PCR后获得1条约480bp的片段,经序列分析证实该扩增的片段是ST13基因cDNA的5′端未知序列.结论 套式PCR技术是克隆基因cDNA的5′端未知序列较简捷、有效的方法.
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ST13基因与肿瘤关系的研究进展
肿瘤抑制基因13(ST13)是上世纪末中国科研工作者发现的一种结肠癌负相关基因,其蛋白与热休克蛋白70(Hsp70)相互作用的蛋白(Hip)为同一蛋白,作为Hsp70的分子共伴侣,参与Hsp70在蛋白质折叠、修复等过程中的分子伴侣作用,随着近年来的研究深入,发现ST13基因在结肠、胃、乳腺、子宫、卵巢等组织及相应的肿瘤中都有不同程度的表达,不同组织及其相应的的肿瘤中的表达存在差异,文章就ST13基因及其编码蛋白的结构、功能及与肿瘤的关系进行综述.
