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三阴性乳腺癌细胞对磷脂酰肌醇3激酶抑制剂产生抗药性的分子机制
目的：探讨三阴性乳腺癌（ TNBC）细胞对磷脂酰肌醇3激酶（ PI3K）抑制剂产生抗药性的分子机制。方法运用脂质体2000试剂盒将 siFZD7、siWANT5B 或 siGSK3转染 TNBC 细胞HCC70，Western blot法测定WNT／β?连环蛋白（ WNT／β?catenin）和磷脂酰肌醇3激酶／苏氨酸激酶／雷帕霉素靶蛋白（ PI3K／AKT／mTOR）信号通路关键蛋白的表达。将PI3K／AKT／mTOR通路抑制剂作用TNBC细胞HCC70、雌激素受体（ER）阳性乳腺癌细胞MCF?7和人表皮生长因子受体2（HER2）阳性乳腺癌细胞SK?BR3，采用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法检测细胞增殖抑制率，并计算半数抑制浓度（ IC50）；Western blot和荧光素酶报告基因实验检测WNT／β?catenin和PI3K／AKT／mTOR信号通路的活性变化对乳腺癌细胞增殖的影响；免疫荧光实验检测β?catenin蛋白核转位。将BKM120处理的乳腺癌细胞皮下注入裸鼠体内，观察其致瘤能力，采用免疫组化法检测肿瘤组织中磷酸化肺耐药相关蛋白6（p?LRP6）、磷酸化eIF4E结合蛋白1（p?4EBP1）和β?catenin蛋白的表达。结果 siRNA转染的HCC70细胞中，卷曲蛋白7（FZD7）、细胞外因子5B （WANT5B）、糖原合成酶激酶3（GSK3）表达显著降低，WNT／β?catenin活性升高，PI3K／AKT／mTOR活性降低。 PI3K／AKT／mTOR通路抑制剂能抑制MCF?7和SK?BR3细胞的增殖， GDC?094、BKM120、XL147、perifosine、everolimus、BEZ235对MCF?7细胞的IC50分别为0．46 mmol／L、1．44 mmol／L、4．34 mmol／L、11．35μmol／L、53．71μmol／L和12．87μmol／L，对SK?BR3细胞的IC50分别为0．63 mmol／L、0．58 mmol／L、3．74 mmol／L、13．22μmol／L、60．00μmol／L和11．38μmol／L。荧光素酶报告基因检测显示，经BKM120处理后，HCC70、MCF?7和SK?BR3细胞中的荧光素酶活性分别为1．75±0．05、1．13±0．02和0．43±0．01，对照组的荧光素酶活性为1．00±0．02， HCC70、SK?BR3细胞中的荧光素酶活性与对照组差异有统计学意义（ P＜0．05）。 BKM120能抑制mTOR的活性，提高 WNT／β?catenin 活性能解除 BKM120对 mTOR 活性的抑制。 BKM120能抑制MCF?7和SK?BR3细胞的体内致瘤能力，但对HCC70细胞的致瘤能力无影响。免疫组化检测显示， BKM120处理的HCC70细胞接种于裸鼠后，肿瘤组织中β?catenin蛋白发生核转位，p?LRP6蛋白表达增加，p?4EBP1蛋白表达无变化；BKM120处理的MCF?7细胞接种于裸鼠后，肿瘤组织中β?catenin蛋白未发生核转位，p?LRP6和p?4EBP1蛋白表达降低。结论 HCC70细胞对PI3K抑制剂具有抗药性， WNT／β?catenin信号通路可调节PI3K／AKT／mTOR信号通路，从而诱导TNBC细胞对PI3K抑制剂的抗药性。
关键词： 乳腺肿瘤 WNT/β-连环蛋白通路 磷脂酰肌醇3激酶抑制剂 磷酸化 抗药性 -
通路抑制剂LY294002对子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用
目的:观察磷脂酰肌醇3激酶通路抑制剂LY294002对子宫内膜癌裸鼠移植瘤细胞增殖、凋亡及p-AKT表达的影响.方法:体外培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞,12只裸鼠皮下接种Ishikawa细胞后建立子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型,随机分为2组,每组6只,分别给予腹腔注射生理盐水和LY294002干预,观察2组移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算移植瘤体积、抑瘤率等,观察药物对移植瘤的抑制作用,移植瘤组织标本进行HE染色镜下观察移植瘤的坏死程度、范围及细胞凋亡情况,并用免疫组织化学方法检测移植瘤组织内p-AKT的表达.结果:1)用药组裸鼠移植瘤体积增长相对缓慢(2 027.30±251.16)mm3,对照组肿瘤体积增长明显(3 110.60±599.66)mm3,差异有统计学意义(t=4.082,P=0.005),且抑瘤率为(32.49±16.39)%.2)HE染色见用药组较对照组移植瘤细胞凋亡及坏死面积显著增加;免疫组化结果显示用药组p-AKT的表达低于对照组(χ2=6.133,P<0.05).结论:PI3K通路抑制剂LY294002能够抑制子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长,促进其凋亡.
关键词： 裸鼠 子宫内膜癌 磷脂酰肌醇3激酶抑制剂 磷酸化蛋白激酶B -
磷脂酰肌醇3激酶抑制剂体外对弱精子症患者精子运动参数的影响
目的: 研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的特异性抑制剂LY294002在体外对弱精子症患者精子运动参数的影响,并探讨其可能的作用机制. 方法: 弱精子症患者和精液参数正常男性各10例,手淫法留取精液,经上游优化处理后的精子与不同浓度的LY294002孵育10、30、60 min后,采用计算机辅助精液分析系统检测精子的运动参数.结果: LY294002在体外能显著提高弱精子症患者精子的活动率、前向性运动精子百分率和直线运动速度、平均路径运动速度. 结论: LY294002在体外显著增强弱精子症患者精子的运动功能.
关键词： 弱精子症 磷脂酰肌醇3激酶抑制剂 LY294002 精子运动参数 体外研究 -
磷脂酰肌醇3激酶抑制剂对17β-雌二醇作用下Ishikawa、HEC-1A细胞增殖和凋亡的影响
目的:观察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002 对17β-雌二醇(E2)作用下子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨阻断PI3K/Akt通路治疗子宫内膜癌的可能性. 方法:应用MTT法(10-10 mol/L、10-8 mol/L、10-6 mol/L、10-4 mol/L的E2或10-6 mol/L E2及0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L的LY294002)、流式细胞技术(0 mol/L、10-8 mol/L、10-6 mol/L E2或10-6 mol/L E2及0 μmol/L、1 μmol/L、50 μmol/L LY294002)观察LY294002对E2作用下子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A增殖、凋亡和细胞周期的影响.结果:随着E2浓度的增加,Ishikawa细胞A(570 nm)值逐渐升高并呈时间依赖性(F=3.915,P=0.043),G0-G1期比例下降(F=50.926,P≤0.001),S期比例升高(F=17.836,P=0.001);而HEC-1A细胞周期各期比例无变化(P＞0.05).随着 LY294002浓度的增加,2种细胞A(570 nm)值逐渐下降并呈现时间依赖性(F=10.398,P=0.001;F=5.542,P=0.043),而且G0-G1期比例(F=32.024, P≤0.005;F=14.725,P≤0.017)升高,S期(F=30.132, P≤0.001;F=24.72,P≤0.01)比例下降.50 μmol/L和100 μmol/L LY294002作用2种细胞48 h后,凋亡细胞百分比均增加(P＜0.001).结论:LY294002可以抑制E2对子宫内膜癌细胞的增殖,促使其发生凋亡,抑制细胞周期进展,使细胞周期停滞在G1期.PI3K/Akt信号传导通路可作为治疗子宫内膜癌的新靶点.
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磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002诱导人胚胎干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞的研究
目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶抑制剂 LY294002对人胚胎干细胞定向分化为成熟胰岛素分泌细胞的影响。方法：体外通过5个阶段诱导人胚胎干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞。分别给予尼克酰胺＋B27（B27组）为对照组和尼克酰胺＋ LY294002（LY组）为实验组诱导胰岛素分泌细胞的成熟。显微镜下观察各阶段细胞形态变化，免疫荧光染色鉴定胰岛素、c－肽、生长抑素和胰高血糖素的表达。结果：第5阶段诱导14 d LY组胰岛素单染阳性率与B27组无统计学差别（P﹥0．05），但生长抑素和胰高血糖素单染阳性率，胰岛素／生长抑素共染率均低于B27组（P﹤0．05）。结论：在无血清培养体系下，磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002能够诱导人胚胎干细胞分化为更加成熟的胰岛素分泌细胞。
关键词： 人胚胎干细胞 细胞分化 胰岛素 磷脂酰肌醇3激酶抑制剂 -
LY294002与Exendin-4体外诱导人胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞
目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002与胰升血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)拟似物Exendin-4体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,HESc)分化为成熟胰岛素分泌细胞的影响.方法:利用“五步法”包括:HESc体外培养;拟胚体(embryoid bodies,EBs)形成;筛选巢蛋白阳性细胞;扩增巢蛋白阳性细胞;第5阶段分别加入PI3K抑制剂LY294002为实验组(LY组)和GLP-1拟似物Exendin-4为对照组(Ex组)诱导HESc定向分化.光镜下观察各阶段细胞分化特点,细胞免疫荧光染色鉴定胰岛样细胞特异蛋白表达.结果:C肽、胰高血糖素、生长抑素单染细胞阳性率及胰岛素/生长抑素、胰岛素/C肽双染细胞阳性率Ex组均高于LY组:C肽(85.7±2.1)％vs.(74.5±2.7)％,P=0.005;胰高血糖素(38.1±3.4)％ vs.(27.2±2.4)％,P=0.018;生长抑素(75.4±3.7)％vs.(31.3±4.7)％,P=0.000;胰岛素/生长抑素(21.5±2.2)％vs.(3.5±0.9)％,P=0.000;胰岛素/C肽(87.5±2.4)％vs.(76.7±3.1)％,P=0.013.结论:在无血清培养体系下,LY294002较Exendin-4诱导HESc分化的胰岛素分泌细胞更加成熟.
关键词： 人胚胎干细胞 胰岛素 胰升血糖素样肽-1 磷脂酰肌醇3激酶抑制剂 -
转移性激素受体阳性乳腺癌内分泌治疗耐药及治疗决策进展
内分泌治疗已成为转移性激素受体(hormone receptor,HR)阳性乳腺癌的治疗基础.内分泌耐药的发生使得很多新型内分泌治疗药物或药物组合被研发出来.细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent protein kinase,CDK) 4/6抑制剂的应用可显著延长内分泌耐药患者的无进展生存时间.有多项关于使用磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)抑制剂作为后续治疗方案的研究,特别是针对内分泌耐药的情况,应基于合并症、既往辅助治疗、患者的生活质量、不良反应及无病间隔期的情况,选择治疗方案的佳顺序.对转移性乳腺癌的特定生物标志物检测以及新型基因检测对预测治疗效果、耐药性以及预后均具有重要意义,有助于进一步推动精准治疗的发展.
