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琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳及高分辨熔解曲线技术在α-地中海贫血新生儿筛查中的应用
目的 比较毛细管电泳与琼脂糖凝胶电泳2种方法在α-地中海贫血(α-地贫)新生儿筛查中的应用价值；探讨新生儿脐血Hb Bart's水平与α-地贫基因型的关系；探讨高分辨熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术用于筛查非缺失型α-地贫的可行性.方法 对1442例新生儿脐血样本同时采用琼脂糖凝胶电泳及毛细管电泳技术进行血红蛋白定量分析,将其中任意一种方法检出Hb Bart's区带(其中毛细管电泳技术Hb Bart's定量低为0.1％)的样本全部挑出进行Gap-PCR,若样本未检出异常则进一步行HRM分析,随后进行反向点杂交和基因测序.同时对2种电泳Hb Bart'ss均为阴性的样本进行2种常见静止型α地贫基因(-α3.7、-α4.2)的分子筛查.结果 1442例样本中,2种电泳方法HbBart's均为阳性的样本为151例,基因确诊150例.4例琼脂糖凝胶电泳检测Hb Bart's阳性而毛细管电泳检测Hb Bart's阴性的样本,基因检测未见异常.7例琼脂糖凝胶电泳检测Hb Bart't' s阴性而毛细管电泳检测Hb Bart's阳性的样本,基因检测均为静止型α-地贫.1280例两种电泳Hb Bart's均为阴性的样本检出10例静止型α-地贫.HRM技术将3种常见非缺失型α-地贫全部检出.结论 与琼脂糖凝胶电泳相比,毛细管电泳技术定量分析Hb Bart' s更为简便、准确.脐血Hb Bart's的含量随着α-基因缺陷的个数的增加而升高,其中α+-地贫中不同基因型的Hb Bart's水平亦存在差异.新生儿脐血毛细管电泳Hb Bart's含量0.1％应作为区分正常人与α-地贫携带者的指标.HRM技术可作为非缺失型α-地贫(尤其是αCSα和αQSα)的一种筛查方法.
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GSTM1、GSTT1及GSTP1（rs1695）基因多态性与乳腺癌蒽环和（或）紫杉类药物化疗血液毒性关系的研究
目的：研究乳腺癌外周血中谷胱甘肽转硫酶（GST）M1、GSTT1和GSTP1（rs1695）基因多态性与乳腺癌患者采用蒽环类和（或）紫杉类药物化疗发生血液毒性的关系。方法应用多重PCR技术（M-PCR）和高分辨熔解曲线技术（HRM）检测3个基因在252例女性乳腺癌患者外周血中的基因多态性。结果采用紫杉类、蒽环联合紫杉类药物化疗，携带GSTP1(rs1695)AG/GG的患者是发生Ⅲ~Ⅳ度中性粒细胞减低的危险因素(OR=6.111,95%CI 1.526~24.469, P＜0.05和OR=9.257,95%CI 2.903~29.522, P<0.01)，而GSTM1(+)与GSTM1(-)、GSTT1(+)与GSTT1(-)患者Ⅲ~Ⅳ度血液毒性的发生率差异均无统计学意义；采用蒽环类药物化疗，GSTM1(+)和GSTM1(-)、GSTT1(+)和GSTT1(-)、GSTP1AA和GSTP1AG/GG患者Ⅲ~Ⅳ度血液毒性发生率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 GSTP1(rs1695)基因多态性可作为预测乳腺癌患者采用紫杉类药物化疗发生中性粒细胞毒性的标志。
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C1236T、G2677T/A和C3435T基因多态性与乳腺癌分子分型的关系及意义
目的：观察多药耐药基因1（MDR1）第12、21及26外显子C1236T、G2677T/A和C3435T基因多态性在乳腺癌患者外周血中的分布，分析其与分子分型的关系。方法应用高分辨熔解曲线（HRM）技术检测400例乳腺癌患者C1236T、G2677T/A及C3435T基因多态性。采用Hardy-Weinberg遗传平衡检验进行基因型分布遗传平衡吻合度检验。参照2013年St.Gallen国际专家乳腺癌分子分型共识。分析乳腺癌患者中C1236T、G2677T/A和C3435T基因型分布特点，并探讨其与分子分型的关系。结果（1）400例乳腺癌患者中C1236T、G2677T/A和C3435T中分别有2例、3例和2例标本未得出基因分型结果，C1236T位点CC、CT和TT基因型分别占16.08%（64/398）、44.22%（176/398）和39.70%（158/398）；G2677T/A位点GG、GT、GA、TT和AT基因型分别占16.62%（66/397）、44.33%（176/397）、7.05%（28/397）、27.46%（109/397）和4.54%（18/397）；C3435T位点CC、CT和TT基因型分别占21.11%（84/398）、56.03%（223/398）和22.86%（91/398）。经Hardy-Weinberg遗传平衡检验，认为C1236T、G2677T/A和C3435T基因多态性具有群体代表性（P>0.05）。（2）分子分型显示，11例人类表皮生长因子受体2（HER-2，2+）患者未行荧光原位杂交（FISH）检测予以剔除，其中Luminal A型占41.90%（163/389），Luminal B型占32.65%（127/389），HER-2过表达型占13.62%（53/389），三阴型占11.83%（46/389）。（3）C3435T位点CT/TT基因型在Luminal A型患者中的频率高于其在HER-2过表达型和三阴型患者中的频率（χ2=12.011，P=0.001；χ2=13.976，P<0.001），C1236T和G2677T/A基因多态性在不同分子分型中的分布差异无统计学意义（P>0.05）。结论 MDR1基因C3435T位点多态性可以为乳腺癌异质性提供更合理的补充，不同乳腺癌分子分型患者中CT/TT基因表型可能对药物治疗更敏感。
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高分辨率熔解曲线分析技术在非缺失型α-地中海贫血新生儿筛查中的前瞻性应用
目的:验证高分辨率熔解曲线分析技术(HRM技术)用于筛查非缺失型α-地中海贫血的可行性.方法:应用全自动毛细管电泳技术对6 525例新生儿脐血进行血红蛋白定量分析,将Hb Bart's含量在0.1％ ～2.5％的样本挑出,排除3种常见缺失型α-地贫基因(--SEA、-α 3.7、-α4.2)后剩下的样本,用HRM技术分别对α-基因的3个外显子进行扫描后对这些样本进行基因确诊.结果:所有28例非缺失型α-地中海贫血全部被检出.结论:HRM技术可作为非缺失型α-地中海贫血的一种筛查方法,且具有准确、高效、低成本的优点.
关键词： 非缺失型α-地中海贫血 Hb Bart's 高分辨熔解曲线技术 突变 -
高分辨熔解曲线技术检测HLA-G 14 bp插入/缺失突变方法的建立及初步应用
目的 建立高分辨率熔解(HRM)技术检测人类白细胞抗原G(HLA-G) 14 bp插入/缺失突变的方法,并初步探讨其临床应用价值.方法 对HRM进行方法学评价.对100例EV71感染重症手足口病(HFMD)患儿、80例EBV感染传染性单核细胞增多症(IM)患儿和100例对照组进行HLA-G 14 bp插入/缺失突变的检测;用聚合酶链反应结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)法和产物测序法验证HRM分型.结果 不同基因型HRM检测的批内、批间熔解温度(Tm)值的变异系数(CV)均＜0.1％;HRM与PAGE及直接测序所得基因型相符.100份EV71感染HFMD患儿DNA样本经检测,10份为14 bp+/+纯合子基因型,42份为14 bp+/-杂合子基因型,48份为14 bp-/-纯合子基因型,与对照组比较差别有统计学意义(x2=6.181,P＜0.05),80份EBV感染IM患儿DNA样本与对照组比较差别亦有统计学意义(x2=8.531,P＜0.05).结论 本研究建立的HRM技术可用于HLA-G 14 bp插入/缺失基因突变的检测.
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应用高分辨熔解曲线技术检测经典型苯丙酮尿症患者PAH基因第7外显子基因突变
目的 建立操作简便、快速,使用成本低,结果准确的鉴定PAH基因第7外显子c.728G>A突变热点的基因诊断方法.方法 应用高分辨熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术,对山西省临床确诊的88例经典型苯丙酮尿症患儿第7外显子c.728G>A突变热点进行检测,并将检测结果进行测序验证.结果 受检患儿PAH基因第7外显子c.728G>A突变位点HRM技术检测结果和测序结果完全相符.结论 高分辨熔解曲线技术操作简便、快速,使用成本低,结果准确,可作为PAH基因第7外显子热点突变的快速、灵敏检测方法.
