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转化生长因子对同种带瓣大动脉植入后的保护作用
我们实验探讨外源性治疗基因转化生长因子能否在植入后的同种带瓣大动脉中表达、其表达的时限和产生的保护作用.现报告如下.
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同种带瓣大动脉灭菌实验研究
目的探讨不同抗生素水浴灭菌方法对同种带瓣大动脉组织活性的影响.方法取带瓣大动脉30只,随机分为A、B、C实验组,每组10只,并从中随机选择10只剪取部分内膜组织作为对照组(D组),实验组用不同抗生素水浴灭菌方法处理并做细菌培养.各组测定葡萄糖代谢率和台盼蓝拒染率.结果实验组细菌培养无阳性且葡萄糖代谢率和台盼蓝拒染率均低于对照组(P＜0.05),B、C两组葡萄糖代谢率和台盼蓝拒染率均高于A组(P＜0.05),而B、C两组间葡萄糖代谢率和台盼蓝据染率差别无显著性(P＞0.05).结论同种带瓣大动脉在抗生素溶液中37℃水浴6h可达到满意的灭菌效果且对组织细胞活性损伤较轻.
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同种带瓣大动脉的制备及保存经验
同种带瓣管道移植治疗复杂先天性心脏病是一种较为理想的替代材料,逐渐获得广泛的临床应用[1],我院从1997年12月～2000年12月共制作同种带瓣大动脉55根,其中主动脉30根,肺动脉25根,现将同种带瓣大动脉的制备及保存方法介绍如下.
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外源性基因在新鲜同种带瓣大动脉中的表达
本实验旨在探讨新鲜同种带瓣大动脉转基因的可行性及植入后外源性基因表达时限和表达量的差异,为防止同种带瓣大动脉的退变进行转基因治疗奠定基础.一、材料与方法1.腺病毒载体:本组所用重组腺病毒(Ad5CMVLacZ)滴度为1×109 pfu/ml,携带有报告基因LacZ,能表达半乳糖苷酶,此酶可通过免疫组织化学染色进行鉴定.每个要转染重组腺病毒的同种带瓣血管须用半乳糖苷酶300 μl.
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同种带瓣大动脉的取材、灭菌及保存
目的报告50个同种带瓣大动脉的取材、灭菌及液氮保存方法。方法供者为年龄20～39岁的脑死亡患者，均在死亡后2小时取材。修剪后48个同种带瓣大动脉用抗生素灭菌24小时放入含8%二甲基亚砜的RPMI 1640液中液氮保存。结果抗生素灭菌后48个同种带瓣大动脉细菌和霉菌培养均为阴性。解冻11个有10个用于临床，解冻后的同种带瓣大动脉可基本保持正常功能，其细菌和霉菌培养均为阴性。结论无菌取材加抗生素灭菌效果可靠，经液氮保存的同种带瓣大动脉解冻后可满足临床应用的要求。
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同种带瓣大动脉超低温保存糖代谢测定及病理改变
目的:探讨同种带瓣大动脉管道超低温(液氮)保存前、保存后不同时期血管的病理改变及糖代谢率变化.同时为能快捷、简便检测超低温(液氮)保存后同种带瓣大动脉管道生物活性,提供方法.方法:对13根同种带瓣大动脉根据保存时间不同分为3组:A组保存前、B组保存时间半年内、C组保存半年至1年.分别对3组进行病理切片检查、糖代谢率测定.病理学检查采用HE、PAS、Actin(SM)、Weigert氏法弹力纤维、Foot网状纤维染色以及吖啶橙内膜荧光染色等方法.其中HE染色(×400)采用微标卡尺测量内膜单位长度内内皮细胞剥脱长度.糖代谢率测定采用37℃孵化24小时,以Beckman全自动生化分析仪(过氧化物酶法)测定孵化前后培养液的糖浓度,求得组织糖代谢率(mM/g/ml/24h).保存液为加入抗菌素的RPMI1640小牛血清组织培养液.结果:1.同种带瓣大动脉保存前后糖代谢率(mM/g/ml/24h)结果:A组6.35±1.59、B组6.04±1.09、C组6.81±2.29,经统计学分析,差异无显著性(p＞0.05);2.HE染色(×400)显示保存前后内皮细胞均有不同程度剥脱,采用微标卡尺测量单位长度内膜内皮细胞剥脱(um/cm):A组369±134.36、B组701±417.20、C组350.14±298.09,经统计学分析,差异无显著性(p＞0.05).3.PAS、Actin(SM)、Weigert氏法弹力纤维、Foot网状纤维染色显示中膜细胞结构及网状纤维完整;吖啶橙染色标本发出绿色荧光.结论:1.通过HE、PAS、Actin(SM)、Weigert's弹力纤维、Foot网状纤维染色、吖啶橙荧光染色等病理学检查,证实超低温液氮保存前后,同种带瓣大动脉管道血管结构上无显著性改变.2.通过糖代谢率监测,证实超低温液氮保存前后,同种带瓣大动脉管道的糖代谢无显著性改变.3.HE、PAS、Actin(SM)、Weigert's弹力纤维、Foot网状纤维染色等组织学检查及糖代谢检测可作为评价同种带瓣大动脉细胞活性有效方法之一.
