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骨髓间充质干细胞、肌样细胞藻酸钙复合凝胶在压力性尿失禁大鼠尿道周围的成肌效应研究
目的 探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)藻酸钙复合凝胶与经5-氮杂胞苷诱导的肌样细胞藻酸钙复合凝胶在压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)大鼠尿道周围的成肌效应.方法 SD大鼠BMSC体外分离、培养、鉴定；用5-氮杂胞苷诱导生成肌样细胞；2％藻酸钠与1％氯化钙溶液以5∶1体积比配制藻酸钙凝胶,分别与BMSC和肌样细胞复合用于微量注射.72只6周龄雌性SD大鼠建立SUI模型后分为BMSC凝胶组、肌样细胞凝胶组、单纯凝胶组和空白对照4组,每组再分为3小组,于膀胱颈尿道移行部黏膜下肌层注射相应的复合凝胶.4周、8周时取各组大鼠尿道横截面进行HE染色、荧光示踪照相以及结蛋白、α-横纹肌动蛋白(α-SMA)染色检查. 结果 获得的BMSC第3代细胞表面细胞因子抗体CD29阳性率为89.4％、CD34为3.3％、CD45为2.5％、CD105为46.0％,荧光示踪照相见第3代培养细胞表达强绿色荧光.BMSC凝胶组和肌样细胞凝胶组4周、8周时,凝胶边缘血管长入并逐渐增多,荧光示踪BMSC聚集于新生血管周围,肌样细胞呈长梭形样生长,结蛋白、d-SMA明显阳性表达. 结论 BMSC、肌样细胞藻酸钙复合凝胶在大鼠SUI实验模型的微环境中具有向肌细胞分化的潜力.BMSC直接体内微环境诱导分化与5-氮杂胞苷体外诱导形成肌样细胞后植入体内微环境继续分化,短期结果无明显差异.
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5-氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化的研究
目的:探讨应用5-氮杂胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)向肌样细胞分化的可能性.方法:从1周龄SD大鼠骨髓提取分离BMSCs,在体外培养增殖,并采用流式细胞仪鉴定.以5-氮杂胞苷作用于BMSCs,诱导其向肌样细胞分化,继续培养3周后,采用苏木精-伊红、结蛋白、α-横纹肌动蛋白(α-sarcomeric actin,α-SMA)免疫组织化学染色观察BMSCs的分化情况.结果:从1周龄大鼠四肢长骨中提取骨髓,经贴壁法分离,传代后用流式细胞仪检测细胞表面抗体,结果显示CD29、CD105呈阳性,CD34、CD45呈阴性反应,P2、P3代BMSCs的比例明显提高.经诱导的细胞结蛋白、α-SMA染色呈强阳性.结论:在体外经5-氮杂胞苷诱导的BMSCs可向肌样细胞分化.
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心包液诱导骨髓间充质干细胞体外分化为肌样细胞的实验研究
目的 本研究拟通过体外分离和纯化大鼠骨髓间充质干细胞,并体外定向诱导肌样细胞,探讨为心肌细胞移植提供种子细胞的可能性.方法 收集骨髓血,提取单个核细胞进行体外培养扩增,用含自体心包液的培养液培养诱导,连续观察21d.利用免疫组织化学、流式细胞仪技术和电镜技术鉴定和观察细胞特性.结果 本实验分析了6个标本,每个标本体外扩增11代可获细胞数为8×1010个左右;诱导12d后细胞呈Myo强阳性表达;透射电镜显示胞浆内肌丝形成.结论 利用本实验方法,可以获得足够量较为单一、具有较强增殖能力的骨髓间充质干细胞.骨髓间充质干细胞可以在体外定向分化为具有肌细胞特性的细胞.
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支持细胞与其周围细胞之间的相互作用
支持细胞为生精细胞提供结构支架和营养,支持细胞分泌的细胞因子(如IL-1α和IL-6)可能涉及精子发生的局部调控.生精细胞分泌蛋白抑制因子或刺激因子来调节支持细胞的功能.生精细胞的分化,抑制支持细胞分泌睾丸素.支持细胞对间质细胞有营养作用,支持细胞释放的类黄体生成素释放激素(LH-RH)作用于间质细胞上的LH-RH受体,进而调节间质细胞的功能.间质细胞产生的β-内啡肽和黑素细胞刺激素可分别抑制和促进支持细胞的分泌.肌样细胞旁分泌因子(PModS)促进支持细胞合成雄激素结合蛋白(ABP)和转铁蛋白,而支持细胞可抑制肌样细胞增殖.
