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黑色素瘤缺乏因子2炎性体在抗微生物感染中的研究进展
固有免疫是机体抵抗病原微生物入侵的第一道防线。黑色素瘤缺乏因子2（ Absent in melanoma 2，AIM2）作为DNA感受器，是固有免疫系统非常重要的一员，它识别病原微生物双链DNA形成AIM2炎性体，激活Caspase-1依赖的细胞焦亡且促进IL-18和IL-1β的成熟与释放，有助于宿主抑制和清除病原微生物。 AIM2炎性体在抵抗李斯特菌、土拉弗朗西斯菌、肺炎链球菌、结核分枝杆菌、烟曲霉、牛痘病毒、小鼠巨细胞病毒及乙型肝炎病毒等感染中发挥重要作用。该文就AIM2炎性体各组分构成及其在抗微生物感染中的作用进行综述。
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NLRP3炎性小体在器官缺血再灌注损伤中的作用
缺血再灌注损伤是器官移植、缺血性休克、器官切除手术中常见的病理生理过程,也是导致器官功能障碍和术后严重并发症的重要影响因素,如何避免和减轻器官缺血再灌注损伤一直是研究的热点.NLRP3炎性小体被认为是触发机体炎症反应的重要环节,在IL-1β和IL-18炎性因子成熟活化过程中具有不可或缺的作用.本文就近年来对NLRP3炎性小体在器官缺血再灌注损伤中的研究做一综述.
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急性痛风性关节炎患者治疗前后外周血单核细胞NLRP3炎性体mRNA表达及血清IL-1β水平的研究
目的：检测急性痛风性关节炎（acute gouty arthritis，AGA）患者治疗前后外周血单核细胞（peripheral blood monocytes，PBMCs）中NLRP3炎性体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、半胱天冬酶-1（caspase-1）]mRNA表达水平及血清白介素-1β（IL-1β）水平的变化，探讨该炎性体及IL-1β在AGA发病中可能的作用机制。方法：用RT-PCR法检测100名健康查体者（对照组）和100例AGA患者（观察组）治疗前（D0）及应用药物治疗后第3天（D3）、第7天（D7）、第14天（D14）NLRP3炎性体mRNA表达水平，同时用ELISA法测定相应IL-1β水平。比较两组患者生理指标和血生化指标的差异。结果：观察组NLRP3 mRNA表达水平D0、D3及D7与对照组比较均降低，差异均有统计学意义（P<0.01）；观察组各阶段ASC mRNA表达水平与对照组比较均升高，差异均有统计学意义（P<0.05）；观察组caspase-1 mRNA表达水平，D0和D3与对照组比较均降低，差异均有统计学意义（P<0.01）。观察组血清IL-1β水平在D0、D3、D7与对照组比较均升高，差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：NLRP3炎性体及IL-1β在AGA患者治疗过程中水平异常，提示其在AGA发病中参与了炎症反应过程，在炎症机制中可能发挥了重要作用。
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急性痛风性关节炎患者治疗前后外周血单核细胞NLRP3炎性体mRNA表达及血清TNF-α水平的研究
目的 检测急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者治疗前后外周血单核细胞(peripheral blood monocytes,PBMCs)中NLRP3炎性体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶-1(caspase-1)]mRNA表达水平及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平的变化,探讨该炎性体及TNF-α在AGA发病中可能的作用机制.方法 用RT-PCR法检测100名健康查体者(对照组,C)和100例AGA患者(观察组,T)治疗前(D0)及应用药物治疗后第3天(D3)、第7天(D7)、第14 (D14)天NLRP3炎性体mRNA表达水平,同时用ELISA法测定相应TNF-α水平.观察组与对照组比较采用独立样本t检验,一般生理指标及血生化指标用独立样本t检验,计数资料采用x2检验.计量资料用((x)±s)表示.采用IBM SPSS 19.0软件包对所有数据进行统计学分析.结果 观察组NLRP3 mRNA表达水平D0、D3及D7vs C显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01),D14 vs C差异无统计学意义(P＞0.05);观察组各阶段ASC mRNA表达水平与对照组相比显著升高,差异均有统计学意义,其中D0、D3及D7 vs C (P＜0.01)、D14 vs C(P＜0.05);观察组caspase-1 mRNA表达水平,D0及D3 vs C显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01),D7及D14 vs C差异无统计学意义(P＞0.05).观察组D0、D3、D7血清TNF-α水平与对照组相比显著升高,差异有统计学意义(均为P＜0.01).D14与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NLRP3炎性体及TNF-α在AGA患者治疗过程中水平异常,提示它们在AGA发病中参与了炎性反应过程,在炎症机制中可能发挥了重要作用.
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急性痛风性关节炎患者治疗前后外周血单核细胞NLRP3炎性体mRNA表达及血清IL-18水平的研究
目的：检测急性痛风性关节炎（acute gouty arthritis，AGA）患者治疗前后外周血单核细胞（peripheral blood monocytes，PBMCs）中NLRP3炎性体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、半胱天冬酶-1（caspase-1）]mRNA表达水平及血清白细胞介素（IL）-18水平的变化，探讨该炎性体及IL-18在AGA发病中可能的作用机制。方法用RT-PCR法检测100名健康查体者（对照组，C）和100例AGA患者（观察组，T）治疗前（D0）及应用药物治疗后第3天（D3）、第7天（D7）、第14（D14）天NLRP3炎性体mRNA表达水平，同时用ELISA法测定相应IL-18水平。观察组与对照组比较采用独立样本t检验，一般生理指标及血生化指标用独立样本t检验，计数资料采用χ2检验。计量资料用（x-±s）表示。采用IBM SPSS 19.0软件包对所有数据进行统计学分析。结果观察组NLRP3 mRNA表达水平D0、D3及D7vs C显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01），D14 vs C差异无统计学意义（P＞0.05）；观察组各阶段ASC mRNA表达水平与对照组相比显著升高，差异均有统计学意义，其中D0、D3及D7 vs C（P＜0.01）、D14 vs C（P＜0.05）；观察组caspase-1 mRNA表达水平，D0及D3 vs C显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01），D7及D14 vs C差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组D0、D3、D7、D14血清IL-18水平与对照组相比显著升高，差异有统计学意义（均为P＜0.01）。结论 NLRP3炎性体及IL-18在AGA患者治疗过程中水平异常，提示它们在AGA发病中参与了炎性反应过程，在炎症机制中可能发挥了重要作用。
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外周血单核细胞NLRP3炎性体mRNA表达在急性痛风性关节炎镇痛治疗不同时间动态变化的研究
目的：检测急性痛风性关节炎（acute gouty arthritis，AGA）患者镇痛治疗不同时间外周血单核细胞（peripheral blood monocytes， PBMCs）中NLRP3炎性体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、半胱天冬酶-1（caspase-1）]mRNA表达水平的变化，探讨该炎性体在AGA发病中可能的作用机制。方法用RT-PCR法检测100名健康查体者（对照组，C）和100例AGA患者（观察组，T）治疗前（D0）及应用药物治疗后第3天（D3）、第7天（D7）、第14（D14）天NLRP3炎性体mRNA表达水平。观察组与对照组比较采用独立样本t检验，观察组内不同时间对比采用配对样本t检验，一般生理指标及血生化指标用独立样本t检验，计数资料采用χ2检验。计量资料用（x-±s）表示。采用IBM SPSS 19.0软件包对所有数据进行统计学分析。结果 AGA镇痛治疗不同时间观察组内比较，D0与D3相比，NLRP3 mRNA、ASC mRNA及csapase-1 mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）；D0与D7、D14相比，NLRP3 mRNA及csapase-1 mRNA表达水平明显降低，ASC mRNA表达水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。D3与D7、D14相比，NLRP3 mRNA及csapase-1 mRNA表达水平明显降低，ASC mRNA表达水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。D7与D14相比，NLRP3 mRNA表达水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；ASC mRNA表达水平明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；csapase-1 mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论NLRP3炎性体在AGA患者镇痛治疗过程中表达水平异常，提示它们在AGA发病中参与了炎性反应过程，在炎症机制中可能发挥了重要作用。
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甘草酸对幼鼠实验性结肠炎的治疗作用及其机制研究
目的 探究甘草酸对幼鼠实验性结肠炎的治疗作用及其作用机制.方法 将75只SD大鼠幼鼠随机分为对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.5 g/kg)和甘草酸40、160 mg/kg组,每组各15只,制备实验性结肠炎模型的同时分别灌肠给药,连续7 d.观察大鼠一般情况,HE染色法观察大鼠结肠组织病理学变化并进行疾病活动指数(DAI)评分、黏膜损伤指数(CMDI)评定,酶联免疫法测定血清中白介素-4(IL-4)、白介素-17(IL-17)、白介素-1β(IL-1β)水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting法检测大鼠结肠组织中NLRP3、白介素-1β(IL-1β)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶(caspase-1)表达.结果 与模型组比较,甘草酸组幼鼠体质量逐渐增加,症状改善;炎症细胞浸润有所减少,腺体破坏程度降低;DAI评分、CMDI评分均降低,呈剂量相关性(P<0.05);IL-4水平升高,IL-17、IL-1β 水平降低,呈剂量相关性(P<0.05);NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1βmRNA表达和蛋白表达均降低,呈剂量相关性(P<0.05).结论 甘草酸能够治疗大鼠实验性结肠炎,可能与抑制NLRP3通路蛋白表达、降低炎症因子水平有关.
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NLRP3炎性体在痛风性关节炎患者炎症反应中的机制研究
目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性体在痛风性关节炎(GA)患者发病机制中的作用.方法:用RT-PCR法检测44例急性痛风性关节炎(AGA)患者、52例非急性痛风性关节炎(NAGA)患者和50名健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(PYCARD)、半胱天冬酶-1(CASP1)的mRNA表达水平,用Westernblot法检测AGA、NAGA患者和健康体检者PBMCs中NLRP3、PYCARD、CASP1、NF-κB (p105/p50)蛋白表达水平,用ELISA法检测AGA、NAGA患者和健康体检者血清IL-1β、IL-2、IL4、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β1表达水平.结果:NAGA组患者NLRP3的mRNA表达显著低于健康对照组与AGA组(P＜0.01),AGA、NAGA组患者PYCARD的mRNA表达均显著高于健康对照组(P＜0.01叭),AGA组患者CASP1的mRNA表达显著高于健康对照组与NAGA组(P ＜0.01); AGA、NAGA组患者NLRP3、CASP1蛋白表达均显著低于健康对照组(P＜0.05),AGA、NAGA组患者PYCARD、NF-κB (p105/p50)蛋白表达均显著高于健康对照组(P＜0.05);AGA、NAGA组患者血清IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β1表达均显著高于健康对照组(P＜0.01),NAGA组患者IL-1β、IL-6表达均显著高于AGA组(P＜0.01).结论:NLRP3炎性体各基因mRNA、蛋白表达及与其相关联的致炎与抗炎性因子在GA患者中表达异常,提示NLRP3炎性体在GA患者的炎症反应中发挥重要的作用.
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ASC在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的表达
目的:探讨凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein,ASC)在ONO-AE-248所诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的作用及意义.方法:TUNEL法标记凋亡细胞,结合激光共聚焦扫描显微镜观察细胞核形态以及DNA片段化发生的情况;Western blot法检测不同药物刺激组(LPS延迟凋亡组、TNF-α促进凋亡组、ONO-AE-248刺激组以及自发性凋亡组)的ASC蛋白的表达差异性.结果:TUNEL法检测ONO-AE-248培养12小时后的中性粒细胞,未见TUNEL阳性细胞.Western blot结果显示ONO-AE-248刺激后中性粒细胞ASC蛋白的表达一直处于下调状态.结论:ONO-AE-248诱导人中性粒细胞死亡过程中细胞核DNA断裂方式明显不同于自发性凋亡组,核内染色体可能只发生DNA较大片段的断裂,而没有发生小片段化.ONO-AE-248引起的ASC表达的下调可能是这种新型细胞死亡方式区别于自发性凋亡的重要差异点.
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ASC在ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中的作用
目的:探讨接受ONO-AE-248刺激后重要的差异表达蛋白--凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)的表达及意义.方法:Ficoll法新鲜分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞(Polymorpho-nuclear neutrophils,PMN),与 ONO-AE-248 共同培养,2小时提取总RNA,并行反转录-PCR检测ASC mRNA的表达;12 小时提取总蛋白,双向电泳分离后,采用PDQest 2-DE软件分析找出差异表达的蛋白质斑点,并用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定.结果:ONO-AE-248刺激2小时中性粒细胞ASC mRNA的表达明显下调(P＜0.01);12小时通过双向电泳和蛋白质质谱分析发现ASC为重要的差异表达蛋白且ONO-AE-248 刺激后的表达量明显低于自发性凋亡组.结论:ONO-AE-248引起的ASC表达的下调可能是中性粒细胞凋亡和ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的关键性差异点.ONO-AE-248 显著下调 ASC 的表达,可能是ONO-AE-248诱使中性粒细胞发生非凋亡性程序化死亡的根本原因之一.
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维甲酸调控线粒体途径对甲状腺滤泡状癌ASC的影响
目的:研究维甲酸(retinoic acid,RA)对甲状腺滤泡状癌细胞FIE-133ASC调控的影响,并探讨线粒体作用机制与凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated specklike protein containing a CARD,ASC)的关系.方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法检测RA在不同时间(12、24、36、48h)下对甲状腺滤泡状癌细胞FIE-133存活率的影响,透射电镜观察细胞线粒体超微形态结构的改变,蛋白印迹法检测经RA作用前后ASC蛋白的表达.结果:RA对FIE-133细胞生长的抑制有时间依赖性,电镜下甲状腺滤泡状癌细胞线粒体结果发生剧烈改变,ASC表达明显增加.结论:RA对甲状腺滤泡状癌细胞FIE-133的生长具有抑制作用,这一抑制作用是由于线粒体凋亡通路调节ASC表达的影响使细胞凋亡功能得以恢复.
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痛风性关节炎患者外周血单个核细胞中ASC 及其亚型的表达和意义
目的：观察痛风性关节炎（GA）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中凋亡相关斑点样蛋白（ASC）及其亚型（ ASC-b）的表达变化，并探讨其临床意义。方法选择急性痛风性关节炎（ AGA组）、痛风性关节炎间歇期（ IGA组）和正常体检者（对照组）各48例采用实时荧光定量PCR及Western blot方法分别检测PBMCs中ASC mRNA和蛋白及核因子（NF）-κB p65蛋白表达。结果 AGA组ASC mRNA表达显著高于IGA组及对照组（P均＜0．01）， IGA与对照组比较差异无统计学意义；AGA组与IGA组ASC蛋白表达显著低于对照组（P均＜0．01），且IGA组低（P＜0．01），AGA组ASC-b蛋白表达显著高于IGA组和对照组（P均＜0．01），IGA组低（P＜0．05）；AGA组NF-κB p65蛋白表达显著高于IGA组和对照组（P均＜0．01），IGA组与对照组比较差异无统计学意义。结论AGA患者PBMCs中ASC及其亚型ASC-b表达异常，提示ASC及其亚型在GA的病理机制中发挥了重要功能。
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ASC及ASC-b异常表达与痛风性关节炎患者血清中炎症介质分泌的相关性研究
目的:研究凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及其亚型ASC-b异常表达与痛风性关节炎患者血清中炎症介质分泌的相关性.方法:选择2014年7月~2017年3月期间在德阳市人民医院就诊的急性痛风性关节炎患者作为研究的 AGA 组,痛风性关节炎间歇期患者作为研究的 IGA 组,另取同期在德阳市人民医院体检的健康志愿者作为研究的对照组.测定外周血中 ASC、ASC-b的表达量以及血清中炎症介质的含量.结果:AGA 组患者外周血中 ASC、ASC-b的 mRNA 表达量以及血清中IL-1β、IL-18、TNF-α、PGE2、IL-6、IL-8、DKK-1、TRAP5b、ANGPTL4、RANKL、APN/CD31的含量均显著高于IGA组和对照组(P<0.05),IGA组患者外周血中ASC、ASC-b的 mRNA 表达量以及血清中 IL-1β、IL-18、TNF-α、PGE2、IL-6、IL-8、DKK-1、TRAP5b、ANGPTL4、RANKL、APN/CD31的含量与对照组比较无显著性差异(P> 0.05);AGA 患者外周血中 ASC、ASC-b的mRNA表达量与血清中 IL-1β、IL-18、TNF-α、PGE2、IL-6、IL-8、DKK-1、TRAP5b、ANGPTL4、RANKL、APN/CD31的含量呈正相关.结论:痛风性关节炎患者外周血中高表达的 ASC及ASC-b与炎症反应的激活以及关节的骨破坏密切相关.
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缺氧对少突胶质前体细胞内NLRP3炎症小体表达的影响
目的:观察缺氧对少突胶质前体细胞(preOL)内Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)及细胞凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达的影响.方法:将体外分离纯化的preOL分为正常组和缺氧组,1％ O2 5％CO2、37℃缺氧培养箱培养9h建立preOL缺氧损伤模型.TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光染色、qRT-PCR及Western Blot检测NLRP3表达,Western Blot检测ASC表达.结果:preOL缺氧损伤后胞质内出现空泡,胞膜破裂,突起出现肿胀、断裂;凋亡率较正常组增加(P＜0.05);缺氧组NLRP3阳性细胞数和平均荧光强度均较正常组增加(P＜0.05),NLRtP3的mRNA及蛋白水平也均较正常组增加(P ＜0.05);ASC蛋白的表达在缺氧后上调(P＜0.05).结论:preOL的缺氧损伤可能与激活NLRP3炎症小体有关.
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维甲酸对甲状腺癌ASC蛋白的影响
目的 探索维甲酸诱导甲状腺癌细胞的凋亡情况及凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达.方法 甲状腺滤泡状癌细胞株FIE-133(A组),乳头状甲状腺癌细胞株W3(B组),未分化甲状腺癌细胞株8505C(C组),3组细胞用维甲酸刺激24h共同培养.流式细胞术观察细胞活性,RT-PCR和Western blotting检测ASC mRNA及蛋白的表达.采用双向电泳分离蛋白质,采用PDQuest2 -DE软件分析维甲酸+A组与A组细胞2组间差异表达的蛋白质斑点,并用Western blotting进一步验证.结果 流式细胞术结果,维甲酸均导致3组细胞凋亡,A组的凋亡率强于B、C2组(P＜0.01).RT-PCR和Western blotting检测的ASC mRNA及蛋白的表达,A、B、C3组均有表达,A组强于B、C2组(P＜0.05).维甲酸作用A组,质谱鉴定了ASC蛋白,Western blotting验证蛋白质ASC与双向电泳的结果一致.结论 为维甲酸治疗甲状腺癌的蛋白质研究提供实验资料.
