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高磷联合腺嘌呤饮食诱导大鼠高转化型肾性骨病模型的建立与分析
目的：探讨高磷联合腺嘌呤制作大鼠慢性肾脏病（ chronic kidney disease ，CKD）模型诱导的骨矿代谢异常。方法雄性3月龄SD大鼠30只，随机分成三组：基础组（Basal）、对照组（Control）、慢性肾病组（CKD），实验持续6周。所有大鼠先饲养两周以适应环境，Basal在实验开始时处死；Control 组给予高磷（1.03％）饮食；CKD组前四周给予腺嘌呤（0.75％）和高磷（1.03％）饮食，后两周给予不含腺嘌呤的高磷（1.03％）饮食。所有动物在处死前进行体内双荧光标记。实验结束时，取左侧胫骨上段（ proximal tibia metaphometry ， PTM）不脱钙包埋，并采用骨组织形态计量学方法分析。结果与Basal组相比：6周高磷饮食的Control组大鼠骨组织未出现静态参数、生长板参数的变化；而动态参数显示矿化沉积率（ MAR）、类骨质体积百分数（％OV/BV）明显增加，矿化延迟时间（ MLT）明显减少。与Control组相比：CKD组骨小梁面积百分数（％Tb．Ar）、骨小梁数量（Tb．N）显著降低，骨小梁分离度（Tb．Sp）显著性升高；荧光周长百分率（％L．Pm）、矿化沉积率（MAR）、骨形成率（BRF/TV、BRF/BS、BRF/BV）、类骨质周长百分数（％O．Pm）、类骨质面积百分数（％OV/BV）、每毫米成骨细胞数量（ Ob．N）、成骨细胞贴壁周长（％Ob．S．Pm）、每毫米破骨细胞数（ Oc．N）、破骨细胞贴壁周长（％Oc．S．Pm）、明显升高，MLT与髙磷对照组比无变化，与Basal组比也减少。生长板参数显示：生长板宽度（ G．P．Wi）、纵向生长率（ L．G．R）明显减少，但是退行细胞高度（ D．C． H）没有改变。结论 CKD模型导致骨的变化表现为明显的骨高转换模型，既促进骨形成，也促进骨吸收；终骨量减少，说明骨吸收大于骨形成。生长板参数G．P．Wi和L．G．R减少，说明此模型对软骨下成骨有抑制作用。
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腺嘌呤灌胃联合高磷饮食诱导慢性肾衰竭血管钙化大鼠模型的探讨?
目的：：观察腺嘌呤灌胃联合高磷饮食方法诱导的慢性肾衰竭血管钙化大鼠模型。方法：30只SD大鼠随机分为正常对照组及模型组，每组15只。实验第1~4周，模型组大鼠按250 mg/kg剂量给予腺嘌呤混悬液灌胃及含1.8%高磷饲料喂养，第5~6周腺嘌呤改为隔日灌胃。正常对照组灌胃等体积生理盐水。共给药6周。6周后杀检取材，苏木精-伊红( HE)染色法观察两组大鼠肾脏病理及主动脉钙化结节形成情况；检测主动脉血管壁钙含量及碱性磷酸酶( ALP)水平；全自动生化仪测定血钙( Ca2+)、血磷( P3-)、血肌酐( Scr)、血尿素氮( BUN)、血清全段甲状旁腺激素( iPTH)水平。结果：与正常对照组比较，模型组肾小球结构紊乱，肾小管扩张积水，腔内有炎性细胞的浸润，肾小管内棕褐色结晶沉积，肾脏间质纤维化，肾脏血管明显减少；模型组主动脉出现广泛的呈连续线性分布的钙化结节；模型组大鼠主动脉钙含量及ALP水平均明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)；与正常对照组比较，模型组大鼠血P3-、Scr、BUN、iPTH水平均明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)，血Ca2+水平明显下降，差异有统计学意义(P<0.01)。结论：腺嘌呤灌胃联合高磷饮食是制备慢性肾衰竭血管钙化大鼠模型较为快速、可行、准确的方法，值得进一步推广。
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大鼠肾性骨病模型皮质骨骨量及结构的变化
目的:观察腺嘌呤联合高磷饮食建立的肾性骨病模型大鼠的皮质骨骨量和骨结构的形态学变化,并探讨其骨矿代谢情况及机制. 方法:3月龄雄性SD大鼠24只,随机分为腺嘌呤模型组(M组,1～4周予含腺嘌呤的高磷饮食,5～6周高磷饮食饲养)和高磷饮食对照组(C组,高磷饮食饲养6周);皮下注射钙黄绿素进行体内双荧光标记,处死大鼠后取左侧胫骨中段不脱钙包埋制备骨标本,骨组织形态计量学分析骨量和骨结构变化情况.结果:静态参数显示:与C组相比,M组骨组织总面积明显变小、皮质骨面积百分比和皮质骨厚度显著降低,骨髓腔面积百分比明显增大;胫骨皮质上出现侵蚀小孔.动态参数显示:与C组相比,M组骨外膜面荧光标记周长百分比无显著变化,但骨矿化沉积率、骨形成率明显增加;骨内膜面荧光标记周长百分比、骨矿化沉积率明显提高,骨形成率和骨吸收周长百分数明显增加. 结论:腺嘌呤作用下高磷饮食大鼠胫骨皮质骨的骨外膜、内膜的骨形成和吸收活跃;皮质骨内外膜骨量丢失,说明骨吸收大于骨形成、骨偶联失衡而导致皮质厚度减少,处于明显的骨高转化代谢状态.
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高磷饮食对慢性肾衰竭大鼠肾脏Ⅱa型Na-Pi转运体的影响
目的:研究高磷饮食对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾脏Ⅱa型钠-磷协同转运体(NaPi-2)mRNA表达的影响.方法:24只SD大鼠,随机分为CRF高磷饮食组、CRF低磷饮食组、假手术高磷饮食组与假手术低磷饮食组,用5/6肾大部切除术构建CRF大鼠模型,分别予高磷(含磷1.2%)或低磷(含磷0.2%)饮食,测定2、7、14天血离子钙(iCa)、磷(P)、全段甲状旁腺激素(iPTH);第14天测血1,25-(OH)2D3,RT-PCR法检测NaPi-2 mRNA表达.结果:2周后CRF模型中高磷饮食组较低磷组肾脏NaPi-2mRNA表达明显减低(P＜0.01),血P明显增高(P＜0.05),iPTH明显增高(P＜0.01),血 iCa及1,25-(OH)2D3两组无明显差异(P＞0.05).假手术组中高磷饮食组较低磷组NaPi-2 mRNA表达减低(P＜0.05),血iCa、P、iPTH及1,25-(OH)2D3均无变化(P＞0.05).CRF组较假手术组NaPi-2mRNA表达明显减少(P＜0.05).结论:高磷饮食引起CRF大鼠NaPi-2mRNA表达减少,高磷血症可能是iPTH增高、不受钙和1,25-(OH)2D3影响的独立因素.
关键词： 高磷饮食 肾脏Ⅱa型Na-Pi转运体 mRNA表达 慢性肾衰竭大鼠 甲状旁腺激素 -
腺嘌呤加高磷饮食快速建立慢性肾脏病血管钙化动物模型法
目的 建立一种快速诱导慢性肾脏病(CKD)血管钙化大鼠模型的实验方法,为进一步阐明CKD所致血管钙化机制及其防治提供可靠的实验平台.方法 45只SD大鼠随机分为对照组和CKD血管钙化组,实验组给予2.5％腺嘌呤混悬液灌胃,联合1.8％高磷饲料喂养;对照组予以等量生理盐水灌胃,普通饲料喂养;分别于第2、4、6周收集尿液、血液、肾脏及主动脉标本;经腹主动脉取血测定肾功能、钙、磷等,HE染色观察肾脏病理改变,Von Kossa染色、钙含量测定评估主动脉钙化情况;免疫组化法检测主动脉α-SMA、Runx2蛋白表达量,RT-PCR检测大鼠主动脉α-SMA、Runx2 mRNA水平.结果 1.生化指标:与对照组相比,各时间点CKD组的24小时尿蛋白定量、肌酐及尿素氮水平均明显升高(P＜0.01);血磷及钙磷乘积水平明显增加(P＜O.O1),血钙自第4周起明显降低(P＜0.05);2.肾脏病理:对照组肾脏结构形态正常;CKD组逐渐出现肾脏结构紊乱,皮髓质分界不清,肾小球显著萎缩,囊腔显著扩张,肾小管扩张,部分上皮细胞变性坏死,管内可见大量棕黄色颗粒物质沉积,肾间质明显纤维化,血管明显减少,可见炎性细胞浸润;3.主动脉钙化:1Von Kossa染色:对照组主动脉无明显黑色颗粒物沉积;CKD组主动脉逐渐出现黑色颗粒物质沉积,中膜平滑肌纤维断裂,血管僵硬度显著增加;2主动脉钙含量:与对照组相比,各时间点CKD组主动脉钙含量均显著增高(P＜0.01);3免疫组化结果:与对照组相比,CKD组各时间点主动脉平滑肌α-SMA蛋白表达明显减少(P＜0.05),而Runx2蛋白表达明显增加(P ＜0.05);4RT-PCR结果:与对照组相比,CKD组主动脉各时间点α-SMA mRNA表达显著降低(P＜0.01),而Runx2 mRNA表达明显升高(P＜0.05).结论腺嘌呤灌胃加高磷饮食较传统方法,具有更加快速、简便、准确等的特点,为慢性肾脏病血管钙化研究提供了一个可靠的动物模型.
