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大鼠局灶性脑缺血预处理后活化转录因子6mRNA及其蛋白表达的变化
目的 观察脑缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后活化转录因子6 (ATF6) mRNA及其蛋白表达的影响.方法 选择SD大鼠120只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血预处理组,每组40只,每组又按照再缺血后12 h,1、2、3d分为4个时间点,每个时间点10只.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,实时荧光定量PCR和免疫组织化学法观察再缺血后各个时间点ATF6 mRNA及其蛋白的表达变化.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组ATF6 mRNA及其蛋白表达均于缺血再灌注后12 h开始明显上升,1d达高峰,随再灌注时间延长其表达逐渐下降,但仍保持较高表达水平(P＜0.05,P＜0.01);缺血预处理组各时间点ATF6 mRNA及其蛋白表达水平较缺血再灌注组明显升高(P＜0.05).结论 脑缺血预处理可能通过诱导ATF6表达发挥其神经保护作用.
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内质网应激对ATF6调控XBP1启动子转录的影响
目的 确定XBP1启动子的转录核心区域,探讨激活转录因子6(ATF6)在内质网应激(ERS)与非ERS状态下对XBP1启动子转录活性的调控作用.方法 采用基因重组技术构建ATF6基因及两个缺失体ATF6s1p、ATF6s2p的真核表达载体pcDNA3.1 (-)-ATF6、pcDNA3.1 (-)-s1p、pcDNA3.1(-)-s2p,以及XBP1启动子报告基因载体pGL3-XBP1.针对XBP1启动子的各个组成元件设计和构建XBP1一系列截短体的报告基因载体.采用双荧光素酶报告基因法检测并确定XBP1启动子的核心启动子区,Western blotting检测ATF6及缺失体s2p、s1p在ERS与非ERS状态下对XBP1核心启动子区转录的调控作用.结果 XBP1启动子的-407bp-+133bp区域是转录活性调控的核心区域,-2000bp--407bp区域不具有转录活性,该区域可能含有抑制转录活性的组成元件.非ERS状态时,ATF6及两个缺失体s2p、s1p可明显上调XBP1启动子的转录活性及XBP1蛋白表达；而在ERS状态时,ATF6及两个缺失体s2p、s1p下调了XBP1启动子的转录活性和XBPl蛋白表达.结论 ATF6对XBP1的转录调控作用在ERS状态和非ERS状态下存在差异.非ERS状态时,ATF6上调XBP1的转录和表达,而ERS状态时,ATF6下调XBP1的转录和表达.
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糖尿病周围神经病变中内质网应激诱导的细胞凋亡机制研究进展
糖尿病周围神经病变(DPN)的发病机制复杂,不可缓解的内质网应激反应(ERS)可诱导细胞凋亡,损伤神经细胞结构和功能,从而导致DPN.当未折叠的或折叠错误的蛋白在内质网上过度积累时,会触发内质网产生一系列应激反应以保护细胞,即未折叠蛋白反应(UPR),一般用UPR来提示ERS的发生.UPR主要包括3个信号通路:蛋白激酶R样内质网激酶通路、激活转录因子6通路和肌醇需求酶1通路.分析DPN中ERS诱导的细胞凋亡机制,可为预防和治疗DPN提供参考及新思路.
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激活转录因子6基因Ala145Pro变异与中国人糖脂代谢的关联研究
目的 研究激活转录因子6(ATF6)基因Ala145Pro(GCG→CCG)变异与中国人糖脂代谢的相关性.方法 对689例上海地区中国人(其中糖调节正常者361名,新诊断2型糖尿病患者250例,早发2型糖尿病家系先证者78例)采用PCR-RFLP检测ATF6基因Ala145Pro变异,并测定所选人群的糖脂代谢相关临床指标.结果 (1)等位基因频率分布在早发2型糖尿病家系先证者和糖调节正常人群中差异有统计学意义(P=0.035),糖调节正常人群中C等位基因频率较高;(2)糖调节正常人群中,CC+CG基因型携带者高密度脂蛋白胆固醇较GG基因型者低(P=0.014);(3)新诊断2型糖尿病患者中,CC+CG基因型携带者低密度脂蛋白胆固醇较GG基因型者高(P=0.041).结论 ATF6基因与中国人糖脂代谢相关.
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枳实含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞内质网应激损伤的影响及机制
目的 探讨枳实含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞(ICCs)内质网应激(ERS)损伤的影响及机制.方法 采用酶解法分离培养ICCs并行c-kit免疫荧光染色法鉴定细胞.使用衣霉素(Tm)构建ICCs内质网应激模型,4苯基丁酸(4-PBA)抑制内质网应激.血清药理学方法制备枳实含药血清.取对数生长期的ICCs,随机分为四组,ICCs组正常培养,ERS模型组予1μg/mL Tm处理,抑制剂组予含1μg/mL Tm和10 mmol/L 4-PBA处理,枳实组予1μg/mL Tm和20％枳实含药血清,每组作用时间均为24h.透射电子显微镜观察胃ICCs内质网的超微结构;实时荧光定量PCR法检测ERS相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)mRNA表达.结果 成功分离、培养并鉴定ICCs.透射电子显微镜下正常ICCs的内质网结构正常,排列整齐;模型组ICCs细胞器减少,内质网肿胀,扩张、囊泡化改变、排列紊乱;枳实组ICCs内质网肿胀,呈局限性扩张.与ICCs组比较,ERS模型组GRP78、ATF6 mRNA表达升高(P均＜0.05);与ERS模型组比较,枳实组GRP78、ATF6 mRNA表达降低(P均＜0.05).结论 枳实含药血清可减轻ICCs细胞的ERS损伤,其机制可能与调控ERS ATF6通路有关.
