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高盐饮食对去甲肾上腺素诱导的Dahl盐敏感大鼠肠系膜动脉收缩反应的影响
目的 探讨高盐摄人对去甲肾上腺素(NA)诱导的盐敏感大鼠肠系膜二级动脉(MSA)收缩功能的影响. 方法 8周龄雄性Dahl/SS大鼠按区组随机化分为4组:高盐8％ NaCl饮食(HS组,7只)、低盐0.3％ NaCl饮食(LS组,8只)、高盐饮食贝那普利10 mg·kg-1·d-1灌胃(HB组,6只)、正常0.6％ NaCl饮食对照组(NS组,8只).饮食干预6周后,股静脉注射NA(10μg/kg),使用全视野激光散斑灌注血流仪,在体探测大鼠MSA血流灌注的变化,并采用显微镜和高速摄像机记录MSA管径的变化. 结果 饮食干预后,与NS组比较,HS组NA诱导的大鼠MSA管径收缩率明显升高(34.90％±15.46％比18.34％±4.15％,P=0.01),HB组与HS组比较差异无统计学意义(P=0.46);LS组大鼠MSA收缩持续时间明显短于HS组[(16.4±1.8)s比(23.9±8.0)s,P=0.02].HS组NA诱导的大鼠MSA平均血流灌注下降率明显高于NS组(33.50％±5.14％比21.60％±6.16％,P＜0.01),LS组平均血流灌注下降率低于NS组(14.94％±2.90％比21.60％±6.16％,P=0.02),HB组与HS组比较差异无统计学意义(P=0.07);MSA大血流灌注下降率在HS组显著高于LS组(45.74％±10.17％比28.78％±6.21％,P=0.04),其他各组之间比较差异无统计学意义.结论 高盐饮食增强盐敏感大鼠MSA对儿茶酚胺的反应性,而贝那普利不能逆转高盐饮食的作用.
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法舒地尔对盐敏感性高血压大鼠心室重构及心肌细胞凋亡的影响研究
目的 探讨法舒地尔对盐敏感性高血压大鼠心室重构及心肌细胞凋亡的影响.方法 本实验于2016年2月—2017年6月在陕西省医学实验动物中心实验室完成.选取6周龄健康雄性Dahl盐敏感大鼠69只,采用随机数字表法分为生理盐组、高盐组及法舒地尔组,每组23只.生理盐组大鼠给予含盐量为0.3%的正常饲料饲养;高盐组大鼠给予含盐量为8%的特制饲料喂养,自由饮水;法舒地尔组大鼠给予含盐量为8%的特制饲料喂养,自由饮水,建模成功后6h腹腔注射法舒地尔,连续治疗1周.药物治疗结束后1周采用高分辨小动物超声成像系统检测大鼠左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室射血分数(LVEF),并测量前壁厚度、后壁厚度;HE染色观察心肌细胞形态;VG染色法测算胶原容积积分;TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测RhoA激酶mRNA相对表达量,Western blot法检测RhoA激酶相对表达量.结果 (1)药物治疗结束后1周,生理盐组和法舒地尔组大鼠LVEDd、LVESd小于高盐组,LVFS和LVEF高于高盐组,前壁厚度和后壁厚度大于高盐组(P<0.05);法舒地尔组大鼠LVEDd、LVESd、前壁厚度及后壁厚度小于生理盐组,LVFS和LVEF高于生理盐组(P<0.05).(2)生理盐组大鼠心肌细胞排列有序,心肌间质无炎性细胞浸润及纤维化瘢痕形成;高盐组大鼠心肌细胞排列紊乱,巨噬细胞浸润明显增多同时伴有明显纤维化重构;与高盐组相比,法舒地尔组大鼠尽管有炎性细胞浸润,但心肌细胞排列有序且无纤维化瘢痕组织形成,心肌纤维化重构较轻.(3)药物治疗结束后1周,生理盐组和法舒地尔组大鼠胶原容积积分低于高盐组,法舒地尔组大鼠胶原容积积分高于生理盐组(P<0.05).(4)药物治疗结束后1周,生理盐组和法舒地尔组大鼠心肌细胞凋亡率低于高盐组,法舒地尔组大鼠心肌细胞凋亡率高于生理盐组(P<0.05).(5)药物治疗结束后1周,生理盐组和法舒地尔组大鼠RhoA激酶mRNA和RhoA激酶相对表达量低于高盐组,法舒地尔组大鼠激酶mRNA和RhoA激酶相对表达量高于生理盐组(P<0.05).结论 法舒地尔能有效抑制盐敏感性高血压大鼠心室重构及心肌细胞凋亡,其机制可能与降低RhoA激酶表达有关.
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转化生长因子β1基因沉默脂肪干细胞移植对盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化和心肌细胞的影响研究
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)基因沉默脂肪干细胞(ADSCs)移植对盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响.方法 本实验于2015年6月-2016年7月在陕西省医学实验动物中心实验室完成.体外培养ADSCs,构建TGF-β1为靶向基因的mRNA和siRNA表达质粒,病毒转染至ADSCs,取第三代ADSCs进行慢病毒转染,转染时分为空白组、对照组、TGF-β1-siRNA转染组.采用Western blot法检测基因转染后第3天和第14天不同基因转染组ADSCs TGF-β1蛋白表达情况.选取80只SPF级雄性Dahl盐敏感大鼠构建盐敏感性高血压大鼠模型,采用随机数字表法分为正盐组、高盐组、ADSCs组及TGF-β1基因沉默组,每组20只.正盐组给予0.3%氯化钠饮食;高盐组给予8%氯化钠饮食;ADSCs组予8%氯化钠饮食6周后尾静脉移植ADSCs,持续3 d;TGF-β1基因沉默组大鼠给予8%氯化钠饮食6周后尾静脉移植TGF-β1基因沉默ADSCs,持续3 d.细胞移植2周后,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4组大鼠心肌组织TGF-β1 mRNA表达情况,采用Western blot法检测4组大鼠心肌组织TGF-β1蛋白表达情况,采用超声心动图检测4组大鼠左心室射血分数(LVEF)和缩短分数(FS),并计算左心室质量指数(LVMI),VG染色测算胶原容积积分,HE染色观察心肌细胞形态,荧光显微镜下观察心肌组织中CM-Dil标记的ADSCs分布情况,采用TUNEL法检测4组大鼠心肌细胞凋亡情况.结果 (1)荧光显微镜下显示,CM-Dil标记的ADSCs呈橘红色,标记率为97%.(2)基因转染后第3天和第14天空白组和对照组ADSCs TGF-β1蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05),而TGF-β1-siRNA转染组ADSCs TGF-β1蛋白相对表达量低于空白组和对照组(P<0.05).(3)细胞移植2周后,TGF-β1基因沉默组大鼠心肌组织TGF-β1 mRNA、蛋白相对表达量低于正盐组、高盐组及ADSCs组,ADSCs组大鼠心肌组织TGF-β1 mRNA、蛋白相对表达量低于正盐组、高盐组,高盐组大鼠心肌组织TGF-β1 mRNA、蛋白相对表达量高于正盐组(P<0.05).(4)细胞移植2周后,高盐组和ADSCs组大鼠LVEF和FS低于正盐组和TGF-β1基因沉默组,LVMI高于正盐组和TGF-β1基因沉默组(P<0.05);ADSCs组和TGF-β1基因沉默组大鼠LVEF和FS高于高盐组,LVMI低于高盐组(P<0.05);正盐组与TGF-β1基因沉默组大鼠LVEF、FS及LVMI比较,差异无统计学意义(P>0.05).(5)细胞移植2周后,高盐组、ADSCs组和TGF-β1基因沉默组大鼠胶原容积积分高于正盐组,ADSCs组和TGF-β1基因沉默组大鼠胶原容积积分低于高盐组,TGF-β1基因沉默组大鼠胶原容积积分低于ADSCs组(P<0.05).(6)HE染色结果显示,细胞移植2周后高盐组大鼠心肌出现明显纤维化且巨噬细胞浸润明显增多,ADSCs组大鼠心肌纤维化较轻,TGF-β1沉默组大鼠心脏纤维化轻、巨噬细胞浸润少.(7)荧光显微镜下显示,细胞移植2周后正盐组和高盐组大鼠心肌组织中未发现CM-Dil标记的ADSCs,TGF-β1基因沉默组大鼠心肌组织中CM-Dil标记的ADSCs多于ADSCs组(P<0.05).(8)细胞移植2周后,正盐组大鼠心肌细胞凋亡率为0,ADSCs组和TGF-β1基因沉默组大鼠心肌细胞凋亡率低于高盐组,TGF-β1基因沉默组大鼠心肌细胞凋亡率低于ADSCs组(P<0.05).结论 TGF-β1基因沉默ADSCs移植能有效减轻盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化,减少心肌细胞凋亡.
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Dahl盐敏感性大鼠体外循环模型的建立
目的 建立Dahl盐敏感性(Dahl/SS)大鼠体外循环(CPB)模型.方法 雄性SD大鼠7只,14～16周龄,CPB时间120 min作为阳性对照组(Ⅰ组)；雄性Dahl/SS大鼠10只,14-16周龄,采用随机数字表法,将其随机分为2组:CPB时间120min组(Ⅱ组,n=5)和CPB时间75 min组(Ⅲ组,n=5).Dahl/SS大鼠先低盐饮食喂养,CPB前4周改为高盐饮食喂养.吸入异氟醚麻醉诱导后,经口气管内插管,接呼吸机行机械通气.右颈内静脉和尾动脉插管分别作为静脉引流和动脉回流通道,血液经定制的微型氧合器氧合.分别于CPB前、CPB 30、60min、CPB结束后30、90min(T1-5)时采集动脉血样,进行血气分析,并测定血糖浓度；分别于上述时点记录MAP.计算各时点MAP和血糖的变化率,记录CPB结束后7d内大鼠的生存情况.结果 3组间动脉血气分析指标比较差异无统计学意义(p＞0.05).与Ⅰ组比较,Ⅱ组T2,4,5时MAP变化率升高,T4时血糖变化率升高(P＜0.05)；与Ⅱ组比较,Ⅲ组T2.5时MAP变化率降低,T4时血糖变化率降低(P＜0.05).Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组CPB结束后7d内生存率分别为7/7、1/5和4/5,Ⅱ组生存率低(p＜0.05).结论 Dahl/SS大鼠CPB维持75 min是可行的.
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血管内皮细胞相关生长因子在高血压不同阶段心肌细胞和血管内皮细胞中的分布特征
目的:观察血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维生长因子在高血压不同阶段心肌细胞和血管内皮细胞的分布变化.方法:实验于2001-10/2002-06在承德医学院附属医院中心实验室完成.选用遗传性盐敏感型高血压大鼠(DahlS)和遗传性盐抵抗型高血压大鼠(DahlR),在5周龄投与8%食盐饲料,分别在10,11,12周时取材,制作心肌组织切片.应用免疫组织化学方法观察血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子在心肌组织中的表达变化情况,计算单位面积心肌组织血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子的阳性细胞数和血管内皮细胞的阳性表达.结果:血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子免疫细胞在DahlS和DahlR组大鼠的心肌细胞及血管内皮细胞中均有表达,DahlS组血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子阳性细胞数均较同时期DahlR组增多(P＜0.01).DahlS组自10周起至12周心肌细胞血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子阳性细胞数逐渐增多(P＜0.01).DahlR组在高血压不同时期血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子无显著性变化(P＞0.05).心肌组织的血管内皮细胞的表达强度,DahlS组血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子均由(+)到(++),且均可见组织内毛细血管增多.DahlR组无变化.结论:血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子在心肌细胞和心肌细胞间的血管上均有表达,并随高血压的病程延长呈上升趋势.
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自发性高血压大鼠缺血再灌注后视网膜毛细血管细胞凋亡及p53基因表达
目的 探讨凋亡相关基因p53在自发性高血压大鼠(SHR)视网膜缺血再灌注损伤(RIR)后视网膜毛细血管细胞凋亡中的作用.方法将60只SHR随机分为假手术组(SHR-SH)和缺血组(SHR-RIR),每组各30只大鼠,每组又按照不同再灌注时间分别再分为再灌注后2、6、24、72 h和7 d共5个小组,每小组各6只大鼠.选取60只Wistar-Kyoto大鼠(WKY)同样分为假手术组(WKY-SH)和缺血组(wKY-IIR)作为对照.建立大鼠RIR损伤动物模型,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口翻译法(TUNEL)法观察大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡,通过免疫组织化学链酶卵白素-生物素复合体法(SP)检测RIR后不同时段视网膜组织中p53基因的表达变化.结果 SHR视网膜毛细血管细胞凋亡率在RIR后2、6、24,72 h和7 d时分别为(8.64±0.56)%、(14.92±0.99)%、(24.72±2.98)%、(16.53±1.80)%和(7.12±1.10)%.SHR视网膜毛细血管在RIR后2 h p53表达即开始增加,6 h继续增多,24 h达到高峰,72 h仍维持在较高水平,7 d时仍有少量表达,与SHR-SH比较,差异有统计学意义(P<0.01).WKY-SH和SHR-SH组各时间点细胞凋亡和p53表达无明显差异.WKY-RIR与SHR-RIR相应时间点比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 p53可能通过诱导或促进细胞凋亡参与大鼠RIR;高血压状态下发生RIR视网膜毛细血管细胞凋亡更为严重,且尤以缺血再灌注后24 h为著.
