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链脲佐菌素和高脂肪饲料诱导的实验性2型糖尿病小鼠模型
人类疾病的动物模型可为人类疾病研究提供重要线索。近两年国外学者对用C57BL／6J断乳小鼠、链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)及高热量饲料建立非胰岛素依赖型糖尿病(2型糖尿病)模型的有关问题进行了研究[1]。现将我们用C57BL／6J断乳小鼠建立的2型糖尿病模型的初步建模方法报告如下。材料与方法1.动物选择与喂养：C57BL／6J雄性断乳(21天)小鼠(中山医科大学实验动物中心提供)40只，单笼喂养，室温18～25℃，相对湿度50％～80％，每日光照12小时，自由摄食、饮水。
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改良的乳小鼠心肌细胞原代培养方法
目的：建立一种稳定而快速的乳小鼠心肌细胞的原代培养方法。方法用多聚赖氨酸预包被处理培养皿，采用两步法（0.25％胰酶4℃过夜，0.5 mg／mL－1.0 mg／mL II型胶原酶＋5 mg／mL白蛋白的胶原消化液37℃短时多次消化），通过差速贴壁70 min ＋5-溴脱氧尿嘧啶的使用来纯化心肌细胞。倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态变化，台盼蓝染色法检测细胞存活率，α-actinin特异性免疫荧光染色鉴定心肌细胞并计算纯度。结果心肌细胞形态良好，自发搏动，细胞成活率可达到98％，纯度可达到95％。结论本方法培养的心肌细胞存活率高，纯度高，是一种理想的心肌细胞原代培养方法。
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乳小鼠心肌细胞体外培养方法的优化
目的 探讨乳小鼠心肌细胞分离和体外培养的方法,并结合实际情况建立一种优化的体外培养乳小鼠心肌细胞的方法.方法 胰酶- Ⅱ型胶原酶混合液分次消化乳小鼠心肌组织后行差速贴壁法达到心肌细胞纯化目的,并利用心肌细胞特意表达a-肌动蛋白的特性运用细胞免疫组织化学方法鉴定心肌细胞.结果 差速贴壁48h后心肌细胞贴壁完全,并见大部分贴壁细胞出现搏动,但未观察到同簇搏动,经a-肌动蛋白细胞免疫组织化学鉴定,心肌细胞纯度达96.7%.结论 本研究优化了原代乳小鼠心肌细胞分离和体外培养方法,为后续细胞实验打下了基础.
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乳小鼠心肌成纤维细胞和心肌细胞的分离培养及荧光鉴定
目的 探讨和建立适用于乳小鼠心肌成纤维细胞和心肌细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法.方法 乳小鼠心脏剪成组织块,用Ⅱ型胶原酶加胰蛋白酶联合消化法分离细胞,再通过差速贴壁分离法分别收集、培养乳小鼠心肌成纤维细胞和心肌细胞.光学显微镜下分别观察成纤维细胞和心肌细胞的基本形态特征的变化,并对2种细胞行苏木素-伊红(HE)染色,用第2代心肌成纤维细胞行波形蛋白免疫荧光鉴定,而原代心肌细胞行α-横纹肌肌动蛋白、心肌肌钙蛋白和心肌肌球蛋白重链免疫荧光鉴定.结果 差速贴壁分离法心肌成纤维细胞原代培养90 min基本贴壁,贴壁较早,培养第3～5代细胞生长良好,72 h心肌成纤维细胞波形蛋白免疫荧光鉴定纯度高达97％;而心肌细胞贴壁较晚,24h贴壁后部分心肌细胞出现自发性搏动现象,48 h后细胞逐渐展开,72 h后逐渐形成细胞簇并出现同步搏动,心肌肌球蛋白重链、心肌横纹肌肌动蛋白、心肌肌钙蛋白免疫荧光鉴定心肌细胞纯度分别为95％、93％、95％.结论 差速贴壁分离法结合免疫荧光鉴定可分离乳小鼠心肌成纤维细胞和心肌细胞,此方法成熟、稳定、有效,为研究心脏疾病的基础与临床研究提供了理想的实验模型.
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培养肝细胞在蛋白质组学研究中的应用
目的研究一种简便的肝细胞培养方法以培养出足够量的单一类型细胞,从而获得尽可能多的蛋白量进行细胞蛋白质组学分析.方法采用肝组织块贴壁法培养并传一代(目的是去组织块及其他间质细胞).收集细胞蛋白并进行SDS-PAGE及双向凝胶电泳.结果本实验方法可获得高密度、高纯度、高活力的肝实质细胞,细胞裂解后得到的蛋白质电泳图谱效果好.结论实验方法操作简单、经济、高效,能够满足一般实验室进行细胞蛋白质组学分析.
