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Myc结合的锌指蛋白1评估实验性急性胰腺炎疾病严重程度的价值
目的 检测急性坏死性胰腺炎( ANP )大鼠血清及胰腺组织 Myc 结合的锌指蛋白1 (MIZ1)表达,探讨其评估急性胰腺炎(AP)病情严重程度的价值. 方法 采用胰管逆行注射牛磺胆酸钠方法制备ANP模型. 以注射生理盐水作为对照组. 术后6、24、48 h处死大鼠,取血及胰腺组织. 采用ELISA法检测血清淀粉酶活性及C反应蛋白( CRP)、TNF-α、IL-6、MIZ1水平. 常规行胰腺组织病理学检查,并采用免疫组化及蛋白质印迹法检测胰腺组织MIZ1蛋白表达. 结果 对照组及ANP 6、24、48 h组大鼠血清淀粉酶活性分别为( 449 ±40 )、( 578 ±25 )、( 1 021 ±205 )、( 971 ±143 ) U/L;CRP水平为(123 ±23 )、( 169 ±25 )、( 226 ±34 )、( 229 ±24 ) mg/L; IL-6 为( 20.16 ±4.11 )、( 38.60 ±12.05 )、(52.33 ±6.77)、(44.83 ±4.30) ng/L; TNF-α为(55.33 ±3.32)、(82.8 ±5.26)、(120.66 ±16.00)、(108.33 ±12.17) ng/L;MIZ1为(5.51 ±0.34)、(3.44 ±0.56)、(2.11 ±0.11)、(2.41 ±0.43)ng/L;胰腺病理评分为(1.83 ±0.75)、(6.00 ±1.67)、(8.16 ±2.70)、(9.33 ±1.50)分;胰腺组织MIZ1表达量为0.81 ±0.05、0.53 ±0.07、0.31 ±0.06、0.21 ±0.08. 除ANP 6 h组的血淀粉酶活性外,其他所有指标ANP各组与对照组差异均有统计学意义(P值均<0.01),ANP 24、48 h组又与6 h组差异有统计学意义(P值均<0.01),而ANP 24 h组与48 h组间的差异均无统计学意义. 血清MIZ1水平与血清淀粉酶、CRP、TNF-α、IL-6水平及胰腺组织病理学评分均呈负相关,差异均有统计学意义(P值均<0.01). 结论MIZ1在AP病程中低表达,并与病情严重程度密切相关,可作为评估AP预后的指标之一.
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caspase-3在颞叶癫痫大鼠海马神经凋亡中作用的实验研究
目的构建癫痫模型大鼠海马凋亡神经元的cDNA文库,采用酵母三杂交技术从中寻找caspase-3潜在的酶切底物. 方法制作海人藻酸大鼠癫痫模型,取其海马组织制作酵母三杂交cDNA文库,克隆获得caspase-3的 P12、P17两亚基,然后分别定向插入同一pBridge质粒,构建caspase-3的酵母三杂交诱饵载体并进行验证,然后对所构建文库进行筛库.结果成功构建癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了caspase-3酵母三杂交诱饵载体,并通过caspase-3与eIF2α之间的相互作用验证,经筛库获得caspase-3的底物MIZ1.结论酵母三杂交技术可用于寻找caspase-3下游底物,从癫痫模型大鼠海马的cDNA文库中筛库获得caspase-3的底物MIZ1,为进一步研究caspase-3在癫痫发作引起的海马神经元损伤中的作用奠定了基础.
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海人藻酸致痫大鼠海马神经元凋亡中caspase-3作用的实验研究
目的阐明癫痫模型大鼠海马神经元凋亡中caspase-3的作用机制.方法以TUNEL法检测KA致痫大鼠海马神经元凋亡情况,以Western Blot方法检测其海马神经元中eIF2α的表达变化.取模型鼠海马组织制备cDNA文库,以caspase-3的大小亚单位构建酵母三杂交诱饵载体,并进行酵母三杂交筛库实验.结果在癫痫发作后12 h海马出现凋亡神经元,72 h达高峰;发作后24 h海马神经元出现eIF2α被caspase-3酶切的片段,逐渐增加至72 h.成功制备癫痫模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了caspase-3酵母三杂交诱饵载体,验证了caspase-3与eIF2αt之间的相互作用,并经筛库获得caspase-3的新底物PIAS1.结论在癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中eIF2αt被caspase-3酶切.酵母三杂交技术可用于筛库寻找caspase-3下游底物,从癫痫大鼠海马中获得caspase-3的新底物PIAS1,为进一步研究在癫痫发作致神经元损伤中caspase-3的作用建立了基础.
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癫癎模型大鼠海马神经元凋亡细胞中caspase 3新底物的寻找
目的:在癫癎模型大鼠海马神经元凋亡细胞中寻找caspase 3新底物.方法:建立癫癎模型大鼠海马组织cDNA文库,构建含caspase 3的P12和P17两亚基的三杂交诱饵载体,检测其效果,并进行酵母三杂交筛库.结果:成功建立了癫癎模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了大鼠caspase 3基因的酵母三杂交诱饵载体,并通过caspase 3与eIF2α之间的相互作用验证;以此三杂交诱饵载体筛库获得caspase 3的新底物PIAS1及MIZ1.结论:从癫癎模型大鼠海马的cDNA文库中筛库获得caspase 3的新底物,为进一步研究caspase 3在癫癎发作引起海马神经损伤中的作用创造了条件.
