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SN-38载药纳米微球对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用
目的:检测喜树碱活性代谢产物SN-38载药纳米微球(SN-38-np)的各项特征,比较该栽药纳米微球与裸药抗人胃癌肿瘤细胞BGC-823的效果.方法:用溶剂分散法制备SN-38/PCL-PEG纳米微球.原子力显微镜和透射电子显微镜观察纳米微球形态,采用高效液相色谱法(HPLC)测定SN-38浓度并计算该栽药微球载药量、包封率及描绘其体外释放曲线.采用MTT法观察该微球对人胃癌细胞株BGC-823的生长抑制效果,荧光显微镜检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果:微球为不规则的圆形,平均粒径小于100nm.载药量11%左右,包封率80%左右;SN-38纳米微球可稳定溶解于水中且具有良好的缓释特性:MTT结果显示,较低浓度的SN-38载药纳米微球在72 h抑制肿瘤效果明显优于SN-38裸药,同时计算IC50发现SN-38载药纳米微球在24 h和72 h的IC50明显低于SN-38裸药(P<0.05),两者48 h时间点的IC50相当;细胞内活性氧(ROS)检测结果显示:裸药和载药微球均可明显诱导ROS产生,在较低作用浓度时,SN-38载药纳米微球可比裸药诱导产生更多的细胞内ROS产物.结论:SN-38载药纳米微球可使细胞内达到并维持有效药物浓度,即使在较低作用浓度下亦可持续有效的抑制肿瘤细胞生长,效果明显优于相同浓度下SN-38裸药.
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HPLC-MS/MS法测定人血浆中伊立替康及主要代谢产物的浓度
目的 建立液质联用(HPLC-MS/MS)法同时测定人血浆中伊立替康(CPT-11)及主要活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)及无活性的葡萄糖醛酸化SN-38(SN-38G)的浓度.方法 以氘代伊立替康、氘代SN-38、氘代SN-38G为内标,沉淀蛋白法进行提取.色谱柱:ZORBAX XDB-C8(2.1 mm×50 mm,5μm),水相:0.1％甲酸,有机相:纯甲醇,进行梯度洗脱,流速:0.35 mL·min-1.通过电喷雾离子源,以正离子多反应监测模式(MRM)进行检测,考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度和准确度、稳定性、基质效应和提取回收率.结果 伊立替康标准曲线方程为y=1.32×10-3x-5.30×10-3(r=0.9997),在10～2000 ng·mL-1线性关系良好,定量下限为10 ng·mL-.SN-38标准曲线方程为y=8.50 × 10-3x+4.00×10-3(r =0.999 5),在2～400 ng·mL-1线性关系良好,定量下限为2 ng·mL-1.SN-38G标准曲线方程为y=6.53×10-3x-1.28×10-3(r =0.9997),在5 ～ 1000 ng·mL-1线性关系良好,定量下限为5 ng·mL-.日内与日间RSD均小于15％,平均回收率＞92％.结论 该方法简便快速,准确度高,灵敏度好,专属性强,适用于同时测定人血浆中伊立替康、SN-38及SN-38G的浓度.
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LC-MS/MS测定大鼠全血纳米粒中伊立替康及其代谢物SN-38的浓度
目的 建立高效液相-质谱联用(LC-MS/MS)测定大鼠全血中伊立替康(CPT-11)及其代谢物7-乙基10-羟基喜树碱(SN-38)浓度的方法.方法 采用液液法提取大鼠全血中药物,以地西泮为内标;使用Shim-pack XR-ODS(2.0 mm × 100 mm,2.2μm)色谱柱,以5 mmol·L-1甲酸铵缓冲液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,梯度流速恒定为:0.3 mL· min-1,柱温为35℃,选样量10μL,总分析时间为4.2 min.质谱采用电喷雾离子源,以多反应离子监测模式进行定量分析.结果 伊立替康及其代谢物7-乙基t0-羟基喜树碱线性范围分别为1～2000和0.5～100ng·mL-1;全血中伊立替康及7-乙基10-羟基喜树碱的LLOQ分别为1和0.5 ng · mL-1.伊立替康和7-乙基10-羟基喜树碱质控样品的批内RSD小于9.43％和11.39％,批间RSD小于9.73％和11.79％,提取回收率分别在73.7％～ 117.4％和61.7％～75.5％内.结论 本方法灵敏度高,准确,干扰少,可应用于大鼠全血中伊立替康及其代谢物7-乙基10-羟基喜树碱浓度的测定和药动学研究.
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喜树碱衍生物SN-38对人白血病细胞系HL-60增殖及凋亡作用的实验研究
目的:观察喜树碱衍生物SN-38对人白血病细胞系HL-60细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其可能的作用机制.方法:采用CCK法检测SN-38对HL-60细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;特异性荧光底物检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性;观察不同种类Caspase抑制剂对SN-38诱导HL-60细胞的增殖和凋亡作用的影响.结果:CCK法显示SN-38明显抑制HL-60细胞增殖,流式细胞凋亡分析及Caspase抑制剂研究,显示SN-38通过内源性Caspase信号通路诱导HL-60细胞凋亡.结论.SN-38通过内源性Caspase信号通路抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡.
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HPLC法测定血浆中伊立替康及其代谢产物SN-38、SN-38G浓度及方法学研究
目的：建立同时测定晚期结直肠癌患者血浆中伊立替康（CPT-11）及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱（SN-38）和非活性代谢产物的SN-38葡萄糖醛酸化（SN-38G）的浓度测定方法，并进行方法学验证。方法：以Kromacil C18为色谱柱，甲醇-水（含5 mmol·L-1 KH2PO3，pH=3.0）=55∶45为流动相，激发波长λex=385 nm、发射波长λem=535 nm。结果：CPT-11在20～5000 ng·mL-1范围内线性良好，SN-38在2～500 ng·mL-1范围内线性良好，r值均为0.999。CPT-11和SN-38的提取回收率分别为53.26%～59.86%和66.83%～71.30%。 CPT-11低、中、高三种浓度的日间和日内精密度均小于6.32%；SN-38低、中、高三种浓度的日间和日内精密度均小于7.02%。血浆样品反复冻融3次、室温放置8 h、进样器中放置24 h及长期冻融，稳定性均良好，样品浓度均未见显著改变。结论：使用高效液相色谱-荧光定量检测法简便、准确、灵敏，适用于晚期结直肠癌患者血浆中伊立替康及其代谢产物SN-38、SN-38G的血药浓度测定。
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高效液相色谱法测定血中伊立替康及活性代谢物SN-38浓度
目的：建立高效液相色谱法同时测定结直肠癌患者血中的伊立替康（CPT-11）及其活性代谢物7-乙基-10-羟基喜树碱（SN-38）的浓度，并对我院基因型指导给药方案进行评价。方法：以2μg·mL-110-羟基喜树碱作为内标，先用100μL 10%高氯酸沉淀蛋白，再用50μL 10%高氯酸酸化血浆。采用Agilent ZORBAX Eclipse C8色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm）对CPT-11和SN-38进行分离；以0.05 mol·L-1的磷酸二氢钠-乙腈-三乙胺（75∶25∶0.1，v∶v，磷酸调pH 3.0）为流动相；荧光检测波长：激发波长380 nm，发射波长550 nm。结果：人血浆中CPT-11和SN-38线性范围均为3~1000 ng·mL-1，定量下限为3 ng·mL-1；准确度分别是98.5%和100.0%；回收率分别是83.8%和84.3%。结论：本方法可靠、简便、快速，可为伊立替康个体化给药提供参考。
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SN-38对K562细胞的增殖抑制、凋亡诱导及其与塞来昔布联合化疗的协同作用
目的 观察SN-38对慢性粒细胞白血病(CML)急变细胞株K562增殖抑制及凋亡诱导作用,并探讨其作用机制及与塞来昔布联合化疗的协同作用.方法 采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪以Annexin Ⅴ/PI双标记法检测细胞凋亡,PI单染法检测细胞周期;特异性荧光底物检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达变化.以CalcuSyn药效学软件计算联合指数(CI),评价SN-38与塞来昔布对K562细胞的联合效应.结果 SN-38对K562细胞具有时间和浓度依赖性的增殖抑制作用,SN-38可以诱导K562细胞凋亡,伴随G2/M期细胞比例持续下降,Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9活性以时间依赖方式升高,并显著下调K562细胞的Survivin蛋白表达.SN-38与塞来昔布联合化疗后,K562细胞增殖抑制率较两单药组明显增强;两药在低浓度时具有剂量依赖的协同效应(Fa＜0.87).结论 SN-38体外抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能通过下调Survivin表达,并激活Caspase有关.SN-38与塞来昔布联合应用对K562细胞具有剂量依赖的协同细胞毒效应.
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沙利度胺对伊立替康及其代谢物SN-38在大鼠体内药动学的影响
目的:研究伊立替康合用沙利度胺后伊立替康及其代谢物SN-38在大鼠体内的药动学情况.方法:以健康♂ SD大鼠为受试对象,随机分成伊立替康注射液10、20mg·kg-1单用组(时照组)及与沙利度胺(20mg·kg-1)合用组(实验组),给药后0.083、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12 h采集血样并测定伊立替康、SN-38血药浓度,采用DASver2.0软件拟合二者的药动学参数.结果:与对照组比较,伊立替康10mg·kg-1实验组伊立替康AuC0～t Cmax显著增加(P<0.05),SN-38的AUC0～t降低(P<0.05);20mg·kg-1实验组伊立替康Cmax显著增加(P<0.05),SN-38的Cmax、AUC0～t显著降低(P<0.05).结论:联用沙利度胺可以增加伊立替康AUC0～t同时减少SN-38的AUC0～t及Cmax.
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高效液相色谱法测定大鼠血浆中伊立替康及其活性代谢产物SN-38的含量
目的:建立同时测定大鼠血浆中伊立替康(CPT-11)及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)浓度的高效液相色谱法.方法:以10-羟基喜树碱作为内标,先用7%高氯酸酸化血浆,再用7%高氯酸-乙腈(50:50)沉淀蛋白.采用Hypersil C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5 μm)进行分离;以0.05 mol·L-1的磷酸氢二钠-甲醇-三乙胺(50:50:0.025,磷酸调pH 3.0)为流动相;荧光检测波长:激发波长380 nm,发射波长550 nm.结果:大鼠血浆中CPT-11和SN-38线性范围分别是20～5000 ng·mL-1(r=0.9997)和2～500 ng·mL-1(r=0.9999).两组分低检出限分别为15 ng·mL-1和1.7 ng·mL-1.2组分平均相对回收率分别是98.7%和99.9%;平均绝对回收率分别87.2%和94.7%.2组分日内、日间精密度均小于12%.结论:本方法快速、简便、准确.灵敏度高,可用于CPT-11及其活性代谢产物SN-38药代动力学的研究.
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LC-MS/MS法测定大鼠血浆中依立替康及代谢物SN-38的浓度
目的:建立高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中依市替康及其代谢物SN-38的浓度.方法:血浆中加入内标后经固相萃取后进行分析.采用Symmetry C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,5μm),流动相为pH=3.0的5 mmol·L~(-1)甲酸铵缓冲液(A)-含0.1%甲酸的甲醇(B),梯度洗脱,梯度流速恒定为0.25 mL·min~(-1),柱温为30℃,整个分析时间为10min.采用ESI正离子多反应临测模式进行检测.结果:依立替康及其代谢物SN-38线性范围分别为1-2000 ng·mL~(-1)和0.5-100 ng·mL~(-1);血浆中依立替康及SN-38的LLOQ分别为1 ng·mL~(-1)和0.5 ng·mL~(-1);提取回收率均在88%以上;方法回收率在90%-110%之间;批内、批间RSD均小于9%.结论:本方法灵敏度高,操作简便,可应用于大鼠血浆中依立替康及其代谢物SN-38浓度的测定.
