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肠系膜动脉二甲基精氨酸二甲胺水解酶2甲基化在围产期高脂喂食雄性子代大鼠血压升高中的作用
目的 探讨围产期高脂喂食对雄性子代大鼠肠系膜动脉二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)启动子甲基化水平的影响及在动脉血压增高中的作用.方法 SD大鼠分为正常脂肪喂食组(NFD)和高脂喂食组(HFD),围产期分别给予标准饲料(含4.43％脂肪)和高脂饲料(含30％脂肪)喂养,分娩后各组随机选择9只雄性子鼠以标准饲料喂养,18周龄时采用无创性尾套法测量子鼠动脉血压水平,检测肠系膜动脉内皮依赖性舒张功能,采用硝酸还原酶法检测肠系膜动脉一氧化氮含量,酶联免疫吸附试验法检测非对称性二甲基精氨酸(ADMA)含量及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测DDAH2 mRNA表达水平,Western-blot方法检测DDAH2蛋白表达水平,巢式甲基化PCR法检测DDAH2启动子甲基化水平.结果 与NFD组相比,HFD组子代大鼠收缩压升高[(143.3±2.6)比(121.7±3.8)mm Hg,P＜0.05];肠系膜动脉血管环的舒张百分比降低(均P＜0.05),敏感性降低(pD2:NFD 6.44±0.18比HFD 7.56±0.26,P＜0.05);肠系膜动脉一氧化氮含量降低[(0.42±0.01)比(0.53±0.01)μmol/g,P＜0.01],eNOS活性降低[(0.57±0.01)比(0.73±0.01)kU/g pro,P＜0.01],ADMA含量增加[(0.32±0.07)比(0.29±0.01)μmol/g pro,P＜0.05];肠系膜动脉DDAH2 mRNA降低(0.12±0.01比0.15±0.01,P＜0.01),DDAH2蛋白降低(0.24±0.01比0.28±0.01,P＜0.01),启动子甲基化水平升高(1.20±0.03比0.98±0.04,P＜0.01).结论 围产期高脂喂食可以导致雄性子代大鼠肠系膜动脉DDA H2启动子甲基化水平增高,引起DDAH2/ADMA/eNOS/一氧化氮通路障碍,是其成年后动脉血压升高的原因之一.
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瑞舒伐他汀对慢性心力衰竭大鼠的心脏保护作用及其对非对称二甲基精氨酸代谢通路的影响
目的：探讨瑞舒伐他汀对慢性心力衰竭大鼠的心脏保护作用及其对非对称二甲基精氨酸（ADMA）代谢通路的影响。
方法：36只SD大鼠，随机分为异丙肾上腺素模型组、瑞舒伐他汀治疗组、正常对照组，每组12只，建立各组模型。检测血清学相关指标和血流动力学参数，并观察心肌组织病理变化，采用免疫印迹方法检测相关蛋白表达的情况。
结果：与正常对照组比较，异丙肾上腺素模型组脑钠肽、肌钙蛋白I含量、血清ADMA和左心室大下降速率（-LVdP/dtmin）明显升高（P均<0.01）；左心室收缩压、心率、动脉收缩压、平均动脉压和左心室大上升速率（+LVdP/dtmax）均显著降低（P均<0.01），差异均有统计学意义。与异丙肾上腺素模型组比较，瑞舒伐他汀治疗组血清脑钠肽、肌钙蛋白I含量、ADMA水平和-LVdP/dtmin明显降低（P均<0.01）；左心室收缩压、心率、动脉收缩压、平均动脉压和+LVdP/dtmax均显著升高（P均<0.01），差异均有统计学意义。与正常对照组相比，异丙肾上腺素模型组蛋白精氨酸甲基转移酶1（PRMT1）的表达增多（P<0.01），二甲基精氨酸二甲胺水解酶2（DDAH2）的表达降低（P<0.01），差异均有统计学意义。与异丙肾上腺素模型组比较，瑞舒伐他汀治疗组PRMT1的表达明显下降（P<0.01），DDAH2表达差异无统计学意义（P>0.05）。
结论：瑞舒伐他汀对异丙肾上腺素诱导的大鼠慢性心力衰竭心脏具有保护作用，该作用机制与其降低血清肌钙蛋白I、脑钠肽及调控ADMA代谢通路有关。 -
人胚肾293细胞中乙酰转移酶p300对二甲基精氨酸二甲胺水解酶2基因表达的调节
目的:一氧化氮(NO)在高血压发生中具有重要作用,二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)可调节NO生物合成.本研究以乙酰转移酶p300为乙酰化作用因素,鉴定人胚肾293(human embryonic kidney 293,HEK293)细胞中乙酰化是否参与调节DDAH2基因的表达.方法:以人胚肾HEK293细胞为研究对象,转染野生型及乙酰转移酶(HAT)结构域缺失的突变型p300表达载体,应用Western blot方法鉴定载体表达情况;real-time PCR方法鉴定野生型及突变型p300对DDAH2 mRNA表达水平的影响;软件分析DDAH2启动子结构;构建DDAH2启动子荧光素酶报告基因载体;双荧光素酶活性检测系统检测野生型及突变型p300对DDAH2启动子活性的影响.结果:Western blot结果显示转染两种p300表达载体的HEK293细胞中p300蛋白表达水平显著升高(P<0.05);实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)结果证明野生型p300可显著升高DDAH2 mRNA表达(P<0.05),而HAT结构域缺失的突变型p300无此作用(P>0.05);软件分析结果显示DDAH2启动子区存在多种潜在的受乙酰化调控的转录因子的结合位点;构建了两个DDAH2启动子荧光素酶报告基因载体,分别命名为pGL530w和pGL171w;双荧光素酶活性检测结果证明基础条件下,pGL530w和pGL171w具有较高的活性(P<0.05),野生型p300可显著升高二者活性,但突变型p300对二者无明显作用(P>0.05).结论:人胚肾HEK293细胞中p300介导的乙酰化可通过调节DDAH2基因启动子活性,从而参与调节DDAH2基因表达.这一机制可能在肾脏组织NO生物合成中发挥重要作用,从而在高血压发生中发挥一定作用.
关键词： 二甲基精氨酸二甲胺水解酶2 一氧化氮 乙酰化 P300 高血压 -
脓毒症糖尿病大鼠肺组织DDAH2表达变化及意义
目的:观察二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(dimethylarginine dimethylaminohydrolase 2,DDAH2)在糖尿病脓毒症机体中的表达变化,探讨血管内皮功能损害的发生机制.方法:64只Wistar大鼠随机分为正常对照组、单纯脓毒症组、糖尿病组、糖尿病脓毒症组,每组16只.免疫组织化学方法观察肺组织结构变化及DDAH2表达的分布变化.Griess法测定血清及肺组织一氧化氮(nitrite oxide,NO)含量,real-time PCR测定肺组织DDAH2 mRNA水平.结果:免疫组织化学显示糖尿病组大鼠肺组织平均光密度值(average optical density value,AOV)无明显变化,RT-PCR显示DDAH2 mRNA表达水平低于正常对照组(P＜0.05);脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)腹腔注射后,单独脓毒症组和糖尿病脓毒症组肺组织DDAH2 AOV值及mRNA表达较正常对照组均明显降低(均P＜0.01);且糖尿病脓毒症组AOV值低于单纯脓毒症组(P＜0.01),DDAH2 mRNA表达亦低于单纯脓毒症组(P＜0.05).糖尿病脓毒症组及单纯脓毒症组血清及肺组织中NO水平均增高,血清测定前者低于后者(p＜0.05),但肺组织中前者高于后者近2倍(P＜0.05).结论:脓毒症肺表现为DDAH2表达下调,糖尿病脓毒症肺组织表现为DDAH2表达更为明显下调,提示存在更为严重的血管内皮细胞损害,因此DDAH2表达下调可能参与脓毒症糖尿病机体肺损伤的发生.
关键词： 脓毒症 糖尿病 肺 二甲基精氨酸二甲胺水解酶2 -
围产期高盐饮食对雄性子代大鼠肠系膜动脉DDAH2/ADMA/eNOS/NO通路的影响
目的 探讨围产期高盐饮食对雄性子代大鼠肠系膜动脉二甲基精氨酸二甲胺水解酶2 (DDAH2)/非对称性二甲基精氨酸(ADMA)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)/一氧化氮(NO)通路的影响.方法 实验大鼠分为2组:正常饮食(NSD)组和高盐饮食(HSD)组,分别在围产期以普通饲料(含1％ NaC1)和高盐饲料(含8％NaCl)喂养,分娩后雄性子鼠继续相同饲料喂养至16周.测量子鼠血压,检测肠系膜动脉内皮依赖性舒张功能,检测血浆和肠系膜动脉NO含量、eNOS活性、ADMA含量,检测肠系膜动脉DDAH2活性及DDAH1和DDAH2蛋白质表达水平.结果 16周时,HSD组收缩压显著高于NSD组(P＜0.01).HSD组大鼠肠系膜血管张力低于NSD组(P＜0.01);用ADMA孵育血管环后,NSD组血管张力显著减弱,而HSD组未见显著性变化.与NSD组比较,HSD组血浆NO含量降低(P＜0.05),eNOS活性降低(P＜0.01),ADMA含量增加(P＜0.05);HSD组肠系膜动脉NO含量下降(P＜0.01),eNOS活性下降(P＜0.01),ADMA含量升高(P＜0.05).HSD组DDAH2活性降低(P＜0.01),DDAH2蛋白质表达显著降低(P＜0.01);DDAH1蛋白质表达未见显著改变.HSD组肠系膜动脉指标相关性分析:eNOS活性与NO含量呈正相关,ADMA含量与eNOS活性呈负相关,DDAH2活性、DDAH2蛋白质表达与ADMA含量呈负相关.结论 母体围产期高盐饮食导致其雄性子代收缩压增高,肠系膜动脉内皮依赖性舒张功能障碍,此与肠系膜动脉DDAH2表达下降、活性降低和DDAH2/ADMA/eNOS/NO通路障碍有关.
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DDAH2基因-449G/C多态性及ADMA水平与2型糖尿病合并动脉粥样硬化的相关性
目的 探讨二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)基因-449G/C多态性及非对称性二甲基精氨酸(ADMA)水平与2型糖尿病合并动脉粥样硬化的相关性.方法 运用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术对146例健康对照者和238例2型糖尿病患者[其中未合并动脉粥样硬化组(D0组)80例,合并早期动脉粥样硬化组(D1组)71例,合并中晚期动脉粥样硬化组(D2组)87例]的DDAH2基因-449G/C多态性进行检测,应用酶联免疫吸附法检测血浆ADMA浓度,并比较分析各组间基因型、等位基因频率及相关临床指标.结果 2型糖尿病合并动脉粥样硬化组(D1 +D2组)DDAH2基因-449 G/G基因型频率及G等位基因频率高于D0组(P＜0.05).2型糖尿病组中,DDAH2基因-449G/G基因型携带者具有较高的ADMA水平(P＜0.05);ADMA水平在D1 +D2组＞D0组,且D2＞D1 ＞D0组(P＜0.01).Logistic回归显示,血浆ADMA是2型糖尿病合并动脉粥样硬化发生与发展的危险因素,DDAH2基因-449G/G基因型是2型糖尿病合并动脉粥样硬化发生的危险因素.结论 在云南地区汉族人群中,DDAH2基因-449G/G基因型可能是2型糖尿病合并动脉粥样硬化发生的遗传易感因子,该基因型携带者具有较高的ADMA水平,血浆ADMA水平可作为2型糖尿病动脉粥样硬化发生及发展的预测因子.
