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多巴胺D5受体突变基因F173L在心脏过表达引起转基因小鼠扩张型心肌病
目的 建立心脏特异表达人多巴胺D5受体突变基因F173L(D5F173L)的转基因小鼠,利用该转基因动物模型来研究多巴胺D5受体在心脏肥大发生中的作用机制.方法 利用心脏特异启动子α-MHC构建转基因表达载体,显微注射法建立心脏特异表达人多巴胺D5 F173L(α-MHC-D5F173L)的转基因小鼠,PCR鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测多巴胺D5受体在心脏组织中的表达,心脏超声检测转基因小鼠及野生小鼠的心脏结构和功能.光学显微镜检查α-MHC-D5F173L转基因小鼠心脏的病理改变.结果 建立了α-MHC-D5F173L转基因小鼠.在3月龄,与野生型小鼠比较,α-MHC-D5F173L转基因小鼠心脏收缩期和舒张期左心室内径均增加[收缩期(3.26±0.42)比(2.58±0.23)mm,舒张期(4.28±0.39)比(3.86±0.25)mm,均P＜0.053,收缩期和舒张期左心室容积均增大[收缩期(44.97±14.54)比(24.66±5.34)μL,舒张期(83.99±18.42)比(64.83±9.90)μL,均P＜0.05],射血分数及短轴缩短率减少[(48.01±8.73)%比(62.18±4.84)%,(24.23±5.15)%比(33.15±3.52)%,均P＜0.05].病理学观察显示,α-MHC-D5F173L转基因小鼠心腔明显大于野生型,心室壁明显变薄,心肌细胞不均匀肥大,心肌间质纤维增多.结论 α-MHC-D5F173L转基因小鼠出现典型扩张型心肌病的表型.
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胰岛素对肾脏近曲小管上皮细胞多巴胺D5受体表达和功能的影响
目的 观察胰岛素对肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞多巴胺D5受体表达与功能的影响.方法 以RPT细胞与多巴胺D5受体转染的HEK293(HEK-D5)细胞为研究对象,观察胰岛素对D5受体表达与功能的影响,并在Wistar-Kyoto(WKY)大鼠与自发性高血压大鼠(SHR)的RPT细胞上比较这种影响的区别.观察在胰岛素[10-7 mmol/(L·24 h)]预先作用与否的情况下,D5受体(D1 类激动剂 Fenoldopam)对Na+-K+-ATP 酶活性的影响.结果 胰岛素可升高WKY的RPT细胞D5受体表达,该作用呈现作用浓度与时间依赖性;在SHR的RPT细胞却出现截然不同的现象,刺激胰岛素受体却降低了D5受体的表达;基础状态下,SHR的RPT细胞D5受体的表达明显低于WKY细胞.与单用Fenoldopam相比,在胰岛素(10-7 mmol/L/24 h)预先刺激的情况下,Fenoldopam降低Na+-K+-ATP酶的作用增强.结论 胰岛素可调节RPT细胞D5的表达和功能,该调节作用异常可能在高血压的发生发展中发挥一定作用.
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氧化应激在多巴胺D5突变基因F173L小鼠血压升高中的作用与机制
目的 利用特异表达人多巴胺D5突变基因F173L(D5 F173L)的转基因小鼠,探讨多巴胺D5受体在高血压发生中的作用机制.方法 采用鼠尾无创法测量野生型与D5 F173L小鼠血压.使用代谢笼收集小鼠24 h尿量并用电极法测定尿钠、尿钾水平.用哇巴因法检测小鼠近曲小管上皮细胞(mRPT)转染野生型、D5F173L质粒后Na+-K+-ATP酶活性.利用DHE试剂盒检测小鼠肾脏中超氧阴离子含量,观察氧化应激水平的变化.通过荧光定量PCR筛选出与氧化应激相关基因mRNA表达水平的变化.结果 D5F173L转基因小鼠收缩压、平均动脉压、肾脏尿钾、氧化应激水平、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ mRNA的表达高于野生型小鼠[收缩压(121±5)比(98±4)mm Hg、平均动脉压(85±3)比(76±5)mm Hg,尿钾(0.60±0.09)比(0.46±0.05)mmol/d,氧化应激的荧光密度:0.076±0.006比0.051±0.009,PPARγ mRNA:0.89±0.33比0.48±0.39,均P＜0.05],24 h尿量、尿钠、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX-1)、过氧化氢酶(CAT) mRNA的表达低于野生型小鼠[尿量(1.57±0.17)比(2.01±0.10)mL/d、尿钠(0.36±0.02)比(0.46±0.05) mmol/d,SOD mRNA 1.28±0.33比0.79±0.39、GPX-1 mRNA 1.09±0.11比0.75±0.20、CAT mRNA 1.42±0.34比0.93±0.48,均P＜0.05].转染D5F173L质粒的近曲小管上皮细胞Na+-K+-ATP酶活性较野生型和空白对照组升高[(136.9±42.3)％比(88.6±23.9)％,(99.7±22.1)％,均P＜0.05].结论 氧化应激水平通过增加肾脏Na+-K+-ATP酶活性使肾脏利尿排钠功能受损,可能是D5 F173L转基因小鼠血压升高的原因之一.
关键词： 高血压 多巴胺D5受体 氧化应激 D5F173L转基因小鼠 -
高盐饮食对转染人多巴胺D5受体突变基因F173L小鼠血压的影响
目的 研究高盐饮食对转染人多巴胺D5受体突变基因F173L(hD5F173L)小鼠血压的影响及氧化应激和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1 R)表达的改变.方法 转染hD5F173L小鼠和转染人正常基因(hD5WT)小鼠均随机分为正常盐饮食(0.4％ NaCl)、高盐饮食(3％ NaCl)、高盐并给予坎地沙坦[3％ NaCl+坎地沙坦1mg/(kg·d)]3组,每组6～8只,2周后通过颈动脉插管测量小鼠血压.光泽精法测量其肾脏膜蛋白烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性,免疫印迹检测肾脏膜蛋白NADPH氧化酶和AT1R的表达.结果 正常饮食情况下,hD5F173L转基因小鼠的血压、肾脏膜蛋白NADPH氧化酶的活性和表达、肾脏AT1R的表达均明显高于hD5WT转基因小鼠.hD5F173L小鼠高盐组的平均动脉压、肾脏细胞膜蛋白NADPH氧化酶的活性和表达高于正常盐组[平均动脉压(99.3±2.1)比(92.2士5.4)mm Hg,P＜0.05].hD5WT转基因小鼠高盐组与正常盐组的平均动脉压差异无统计学意义.hD5F173L小鼠高盐并给予坎地沙坦组平均动脉压、肾脏细胞膜蛋白NADPH氧化酶的活性均低于高盐组[平均动脉压(71.1±7.6)比(99.3±2.1)mm Hg,P＜0.05]和正常盐组[平均动脉压(71.1±7.6)比(92.2±5.4)mm Hg,P＜0.05].结论 多巴胺通过D5受体调节AT1R的功能并调节肾脏氧化应激,对盐敏感性高血压具有一定的调控作用.
关键词： 盐敏感性高血压 多巴胺D5受体 氧化应激 血管紧张素Ⅱ1型受体 -
多巴胺D5受体对心脏结构和功能的影响
背景多巴胺通过D5受体对于机体的血压具有重要的调节作用.转人D5突变基因D5F173L小鼠的收缩压、舒张压和平均动脉血压均明显高于转人D5突变基因D5S390G及正常人D5基凼(hD5WT)小鼠.目的 应用超声心动仪观测人多巴胺D5受体突变基因F173 L(D5F173L),S390G(D5S390G)及正常人D5基因(hD5WT)的转基因小鼠心脏结构和功能的变化,探讨该基因对心脏疾病发病机制的影响.方法 利用稳定传代的D5F173L,D5S390G及hD5WT基因转基因小鼠,通过超声心动仪观察各组转基因小鼠及阴性对照小鼠舒张期及收缩期左心室结构及功能的变化.结果 超声心动仪结果显示自4.结果 5月龄始,D5F173L转基因小鼠的舒张期与收缩期左心室容积与左心室内径均明显小于多巴胺hD5WT转基因小鼠及阴性对照小鼠(n=6,P<0.05),其舒张期与收缩期左心室前后壁厚度及左心室质量则明显高于多巴胺hD5WT转基因小鼠及阴性对照小鼠(n=6,P<0.05).而D5S390G小鼠舒张期与收缩期左心室内体积、左心室内径、左心室前后壁厚度与多巴胺hD5WT转基因小鼠及阴性对照小鼠比较无显著差异.结论多巴胺D5转基因小鼠在血压升高的同时伴有心脏结构与功能的变化,提示多巴胺D5在心脏结构与功能形成过程中具有重要的调节作用.
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多巴胺 D5受体通过抑制氧化应激对扩张型心肌病的调节作用
目的：探讨多巴胺 D5受体是否会通过抑制氧化应激来影响扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy）的发生发展。方法建立心脏特异表达人多巴胺 D5受体突变基因 F173L（α－MHC－hD5F173L）和正常基因（α－MHC－hD5WT）转基因小鼠。用3月龄小鼠，首先检测比较转基因小鼠心脏内 ROS 的产量和 NOX2的表达量。然后对α－MHC－hD5F173L 小鼠通过皮下给 NADPH 氧化酶的抑制剂罗布麻宁（Apocynin）4周，同时给 PBS 作为对照组，然后检测各项心肌病相关指标。同时构建人多巴胺 D5受体突变基因（hD5F173L）和正常多巴胺 D5受体基因（hD5WT）的大鼠心肌细胞（H9C2），检测两者在基础条件下 ROS 产量的变化。结果α－MHC－hD5F173L 转基因小鼠的 NADPH 氧化酶的活性和 NOX2蛋白的表达量均明显高于野生型α－MHC－hD5WT 小鼠，罗布麻宁能显著改善α－MHC－hD5F173L 转基因小鼠的心脏功能。 H9C2－hD5F173L 大鼠细胞系 NOX2的表达量及 ROS 产量高于H9C2－hD5WT 对照细胞。结论多巴胺 D5受体可能通过抑制氧化应激而防止扩张型心肌病的发生发展。
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多巴胺D5受体转基因小鼠的建立
目的 建立人多巴胺D5受体突变基因F173 L (D5F173L), S390G(D5S390G)及正常人D5基因(hD5WT)的转基因小鼠,利用该转基因动物模型来研究D5受体在原发性高血压中的发病机制.方法 利用显微注射的技术将插入CMV启动子下游的D5F173L, D5S390G及hD5WT基因的转基因载体注射入C57BL/6小鼠体内,建立多巴胺D5F173L, D5S390G及hD5WT的转基因小鼠.通过PCR鉴定转基因小鼠的基因型.利用Western Blotting方法鉴定该受体蛋白在肾脏的表达情况.使用智能无创血压测量仪测量转基因小鼠的血压值.结果 分别建立了多巴胺D5F173L, D5S390G及hD5 WT转基因C57BL/6小鼠,Western Blotting方法鉴定结果显示,与非转基因C57BL/6小鼠比较,D5转基因小鼠D5受体在肾脏有较高的表达.3～6月龄D5 F173L转基因小鼠的收缩压、舒张压和平均动脉血压均明显高于多巴胺D5S390G及hD5WT转基因小g(n=6～8,P＜0.05).结论 多巴胺D5受体在原发性高血压发病中具有重要作用,但作用机理还有待于进一步研究.
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多巴胺D5受体基因多态性与慢性抽动障碍的关联分析
目的研究慢性抽动障碍与多巴胺D5受体基因多态性是否相关联.方法采用聚合酶链式反应(PCR)、限制性片段长度多态性(RFLPs)与琼脂糖电泳技术的方法,对176个符合CCMD-3诊断标准的慢性抽动障碍儿童与其亲生父母的多巴胺D5受体基因多态性分型,采用病例对照研究,数据统计采用单体型相对风险(GHRR和HHRR)与传递不平衡检验(TDT)方法进行分析.结果慢性抽动障碍与多巴胺D5受体基因多态性无显著关联.GHRR值为0.32～1.61;HHRR值为1.82;TDT值为2.25,其P值均大于0.05.结论慢性抽动障碍与多巴胺D5受体基因多态性无关联.
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多巴胺D5受体基因多态性与痉挛性斜颈相关
目的:初步研究痉挛性斜颈与DRD5基因多态性的关联性,进而从分子生物学角度探求其发病机制,为临床诊治提供遗传学依据.方法:选取25名痉挛性斜颈患者和25名健康对照者进行病例对照研究.实验数据采用卡方检验及logistic回归进行统计分析.结果:DRD5基因的ORF上有6个单核苷酸位点的突变,差异均有统计学意义,其中2个可能为危险因素,4个保护性因素.结论:DRD5基因多态性与痉挛性斜颈的易感性有关.
