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HBVX蛋白及血管生成素-2与乙型肝炎相关性肝细胞癌的关系研究
目的 探讨HBV X蛋白(HBV X protein,HBx)及血管生成素(angiopoietin,Ang)-2与乙型肝炎(乙肝)相关性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测69例乙肝相关性HCC组织中HBx和Ang-2的表达,并分析它们与患者临床病理学特点的关系.结果 69例乙肝相关性HCC组织中HBx的阳性表达率为84.06%(58/69),Ang-2的阳性表达率为81.16%(56/69).HBx的表达与HCC的淋巴结转移及门静脉侵犯有关(P<0.05),Ang-2的表达与HCC的肿瘤直径、包膜浸润、淋巴结转移、门静脉侵犯及TNM分期有关(P<0.05).HBx与Ang-2在乙肝相关性HCC组织中表达呈正相关(rp=0.600).结论 HBx可能参与乙肝相关性HCC的新生血管形成,这可能与Ang-2的高表达有关.
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盐酸千金藤碱对HepG2.2.15细胞HBX/NF-κB通路的影响
目的 探讨盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CH)对HepG2.2.15细胞HBX/NF-κB信号通路的影响. 方法 选用不同浓度的CH(2.5,5,10 μmol/L)干预稳定表达野生型乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的HepG2.2.15细胞后,采用RT-PCR和ELISA法分别检测细胞内X基因mRNA和X蛋白表达变化;采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡率,Western blot法检测细胞内NF-κB信号通路成员P65和IκBα蛋白表达. 结果 与未经CH处理的HepG2.2.15细胞(对照组)相比,CH各剂量组明显抑制细胞内X基因mRNA和X蛋白的表达(P＜0.05).CH干预细胞48 h能够浓度依赖性地诱导HepG2.2.15细胞凋亡,2.5,5,10 μmol/L CH处理细胞后,HepG2.2.15细胞平均凋亡率分别为(11.9±1.21)％,(19.8±2.32)％,(29.3±1.27)％.CH处理组细胞内IκBα蛋白的表达水平明显高于对照组,且P65蛋白的表达水平明显下调(P均＜0.05). 结论 CH能够抑制HBX/NF-κB信号通路的活性,并具有促进HepG2.2.15细胞凋亡的作用.
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HBx 与 p300CBP、Smad2蛋白在乙肝相关性肝细胞癌中的表达
目的：探讨 HBVx 蛋白（HBV x protein，HBx）与 p300CBP、Smad2蛋白在乙肝相关性肝细胞癌中表达的相关性。方法通过乙肝相关性肝细胞癌组织的病理标本和转染乙肝病毒（HBV）x 基因的人肝细胞株两部分试验，分别检测 HBx、Smyd2、p300／CBP 的表达，分析 HBx、Smyd2、p300／CBP 之间表达的相关性。结果较之癌旁组织，肝癌组织中HBx 的表达显著增高，Smyd2、p300／CBP 的表达则显著下调，差异均有统计学意义，（均P ＜0.05）。且经 Pearson 相关性分析，HBx 与 Smyd2和 p300／CBP 在乙肝相关性肝细胞癌中的表达具有较高的一致性（P ＜0.05）。结论 HBx 与p300CBP、Smad2蛋白在乙肝相关性肝细胞癌中的表达之间有一定相关性。
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HBV转录激活蛋白HBx、MHBst78MHBst155真核重组载体构建
目的分别构建人乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白、羧基端截断的中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,以便进一步研究其转录激活功能及对宿主细胞信号传导通路的影响.方法设计合成3对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBV DNA为模板,采用PCR法分别扩增HBV X基因、MHBst78与MHBst155编码基因片段;用HindⅢ,KpnⅠ双酶切HBVX基因;用HindⅢ和BamHⅠ双酶切MHBst78与MHBst155编码基因片段后,分别定向插入到真核表达载体pcDNA3.1相应酶切位点,转化宿主菌JM109,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒.结果酶切重组体显示所切下的片段大小均与预计相符,测序结果与文献报道序列及预计结果一致.结论成功构建了HBV X基因、羧基端截断的HBV中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,为进一步研究HBV转录激活蛋白HBx、MHBst78 MHBst155对宿主细胞信号转导通路的影响奠定基础.
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HBV X蛋白调控miRNA致肝细胞癌发生机制的研究进展
肝细胞癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一.由于难以早期诊断和缺乏有效的治疗方法,HCC病死率非常高,其肿瘤相关致死率近年已经高居世界第二[1].肝细胞癌的发生和发展是多因素、多步骤的复杂过程,但是80％以上的HCC患者有HBV的感染史[2],而在此过程中起重要作用的是HBVX蛋白(HBVX protein,HBX).HBX是有HBV病毒基因组中X基因所编码的相对分子质量约为17 000的蛋白质,对基因转录、信号传递、细胞周期和细胞增生凋亡等均具有调节作用,因此在HBV诱发HCC过程中扮演重要角色[3-4].微小RNA (microRNA,miRNA)是一类新近发现的高度保守的非编码miRNA,参与转录后基因表达与调控[5-6].
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HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响
目的 构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响.方法 以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板,用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,并酶切和DNA测序鉴定.用Sap Ⅰ单酶切这两种质粒,获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组,经转染试剂PolyJetTM Reagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中.在转染后各时间点Western blot检测HBx蛋白的表达,Southern blot 和Real-time PCR同时检测细胞质DNA复制和细胞核cccDNA的合成,Real-time PCR分析定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录.结果 在野生组中可检测到HBx蛋白的表达,而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Western blot的检测范围.两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异(P＞0.05).而在转染后96 hHBx突变组中细胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50％～70％ (P＜0.05).结论 HBx缺失虽然不影响细胞核HBV cccDNA的合成,但是它能下调细胞质HBV DNA的复制和pgRNA的转录.
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HBV X蛋白引起肝细胞癌异常表观遗传学修饰
肝细胞癌(HCC)是常见的恶性肿瘤之一,与HBV的慢性感染密切相关.HBV X蛋白(HBx)由HBV x基因编码,研究表明它在HBV相关肝细胞癌的形成中起着重要作用.HBx可以引起宿主基因表观遗传修饰的显著改变,有证据已经表明由HBx引起的表观遗传学事件在HBV相关肝细胞癌的发展中起着重要作用.本综述主要关注HBx在肝细胞癌中引起的表观遗传学变化,包括异常的DNA甲基化、组蛋白修饰和microRNAs表达;对HBx引起HBV共价闭合环状(ccc)DNA的表观遗传学调控也进行了讨论.
