首页 > 文献资料
-
人乳头瘤病毒 E6／E7 mRNA 检测在宫颈癌筛查中的应用
目的：探讨人乳头状瘤病毒（ HPV） E6／E7 mRNA在筛检宫颈癌前病变-子宫颈上皮内瘤变（ CIN）2级及以上CIN2＋（ CINⅡ和CIN Ⅲ）病变的应用价值。方法横断面调查设计，标本来源于2011年12月至2013年12月期间惠州市第一人民医院和惠州市第三人民医院妇产科门诊和住院部宫颈疾病疑似患者，采集345例妇女宫颈脱落细胞用支链DNA（ b-DNA）技术检测高危HPV E6／E7 mRNA，以液基细胞学（ thin-prep cytologic test ， TCT ）和组织病理学结果为参照，对 HPV E6／E7mRNA的临床CIN诊断价值进行效能分析。结果（1）与TCT比较：325例HPV E6／E7 mRNA阳性率分别为：未见上皮内病变细胞（NILM）21.1％（40／190）、非典型鳞状细胞（ASC）38.5％（15／39）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）76.9％（30／39）、非典型鳞状细胞不能排除高级别上皮内病变（ASC-H）8／10、高度鳞状上皮内病变（HSIL）72.3％（34／47），TCT分级与HPV E6／E7 mRNA阳性率呈线性关联（χ2＝67.654，P＜0.01；r＝0.497， P＜0.01）；与HPV E6／E7 mRNA拷贝数也具有相关性（ r＝0.511， P＜0.01）。（2）与病理结果比较：164例HPV E6／E7 mRNA阳性率分别为NILM 27.8％（10／36）、CINⅠ65.9％（29／44）、CINⅡ80.6％（54／67）、CIN Ⅲ82.4％（14／17），病理分级与HPV E6／E7 mRNA阳性率呈线性关联（χ2＝26.426，P＜0.01；r＝0.438， P＜0.01）；与HPV E6／E7 mRNA拷贝数具有相关性（r＝0.543， P＜0.01）。（3）筛检效能分析：HPV E6／E7 mRNA敏感度为84.6％、TCT敏感度为47.7％，联合序贯检测时敏感度为40．0％，特异度为91.1％；受试者工作特征曲线确定的CIN2＋（ CIN Ⅱ和CIN Ⅲ）佳诊断临界点为890.26个拷贝／ml，敏感度为58.5％，特异度为93.7％。结论 HPV E6／E7 mRNA检测对宫颈病变检出率优于TCT，联合序贯检测时特异度明显提高；采用佳诊断临界点进行分析时，检出CIN2＋病变的敏感度和特异度均较高；可能对宫颈癌癌前病变的筛检及风险评估具有一定临床价值。（中华检验医学杂志，2015，38：532-536）
-
人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测在宫颈上皮内瘤变1预后中的预测价值
目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA检测在宫颈上皮内瘤变(CIN)1患者预后中的预测价值.方法 选取2013年7月至2014年10月,于烟台市烟台山医院妇科经阴道镜下宫颈活组织病理学检查,首次确诊为CIN1的107例患者为研究对象.所有受试者均于首次确诊为CIN1前1个月内,同时接受宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)、HPV DNA基因分型及HPV E6/E7mRNA检测;于阴道镜下宫颈活组织病理学检查确诊为CIN1后,对其进行为期2年的随访,每6个月随访1次.随访检查项目包括宫颈TCT、HPV DNA基因分型及HPV E6/E7 mRNA检测,并对可疑病变者予以阴道镜下宫颈活组织病理学检查.根据随访结束时受试者的TCT、HPV DNA基因分型、HPV E6/E7 mRNA检测结果及阴道镜下宫颈活组织病理学检查结果,将本研究受试者分为转阴组与持续或进展组.采用x2检验,对2组受试者的HPV E6/E7 mRNA阳性率进行比较;采用Mann-Whitney U秩和检验,对2组HPV E6/E7 mRNA表达水平进行比较;计算3种宫颈病变筛查方法对于预测CIN1预后的敏感度和特异度;绘制HPV E6/E7 mRNA表达水平预测CIN1预后的受试者工作特征(ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(ROA-AUC),根据约登指数大原则,确定HPVE6/E7 mRNA表达水平预测CIN1预后的佳临界值,同时计算其敏感度和特异度.本研究遵循的程序符合烟台市烟台山医院伦理委员会所制定的标准,获得该伦理委员会批准,并与受试者均签署临床研究知情同意书.结果 ①根据随访结束时受试者的TCT、HPV DNA基因分型、HPV E6/E7 mRNA检测结果及阴道镜下宫颈活组织病理学检查结果,将本研究受试者分为转阴组(n=63,随访结束时,TCT、HPV DNA基因分型及HPV E6/E7 mRNA检测结果均为正常,或阴道镜下宫颈活组织病理学检查结果为阴性),持续或进展组(n=44,随访结束时,阴道镜下宫颈活组织病理学检查结果为CIN1及以上).2组患者的年龄等一般临床资料比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).②持续或进展组受试者确诊为CIN1时的HPV E6/E7 mRNA阳性率及其中位表达水平分别为61.9％(39/63)和3 738.4 copy/mL,转阴组分别为81.8％(36/44)和583.5 copy/mL,持续或进展组HPVE6/E7 mRNA阳性率及其中位表达水平均显著高于转阴组,并且差异均有统计学意义(x2=4.901,P=0.027;U=821.000,P＜0.001).③HPV-16/18阳性患者CIN持续或进展率为50.8％(31/61),显著高于HPV16/18阴性者的28.3％(13/46),并且差异有统计学意义(x2=5.512,P=0.019).HPV E6/E7 mRNA阳性患者CIN持续或进展率为48.0％(36/75),显著高于HPV E6/E7 mRNA阴性者的25.0％(8/32),并且差异亦有统计学意义(x2=4.901,P=0.027).TCT,HPV DNA基因分型及HPV E6/E7 mRNA定性检测对于预测CIN1患者预后的敏感度分别为50.0％、70.5％、81.8％,特异度分别为66.7％、52.4％、38.1％.④HPV E6/E7 mRNA表达水平预测CIN1患者预后的ROC曲线分析结果显示,HPV E6/E7 mRNA表达水平预测CIN1持续或进展的ROC AUC为0.704(95％CI:0.601～0.806,P＜0.001),HPV E6/E7 mRNA表达水平预测CIN持续或进展的佳临界值为2 724.0 copy/mL,此时其预测CIN1持续或进展的敏感度为54.5％,特异度为81.0％.结论 HPV E6/E7 mRNA定性检测结果对于预测CIN1患者预后的敏感度较高,而其定量检测结果对于预测CIN1患者预后的特异度较高.HPV E6/E7 mRNA检测可能对CIN1患者预后的预测具有一定临床价值.
-
慢病毒介导的靶向沉默HPV16E7-shRNA对SiHa细胞DNA甲基转移酶表达的影响
目的 探讨慢病毒携带的靶向人乳头瘤病毒16(HPV16)E7基因的短发夹干扰RNA(shRNA)对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞中4种甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L)表达水平的影响.方法 构建HPV16 E7基因靶序列的shRNA重组质粒,用BLOCK-iTTM Lentiviral RNAi Expression System试剂盒进行慢病毒包装,分别转染293T细胞48、72 h后收集病毒上清液.分别用含靶向HPV 16 E7-shRNA重组质粒的病毒上清液与完全培养基(1∶1)的混合液(shRNA组)、含空白质粒(即不含靶向HPV16 E7-shRNA序列)的病毒上清液与完全培养基(1∶1)的混合液(阴性对照组)、完全培养基(空白对照组)培养SiHa细胞.感染0、48、96 h后,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测3组SiHa细胞中HPV16 E7和4种甲基转移酶mRNA的表达,Western印迹检测4种甲基转移酶的蛋白表达.结果 感染0h时,shRNA组、阴性对照组、空白对照组SiHa细胞HPV16 E7、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(均P＞0.05);感染48、96 h时,3组细胞间HPV16 E7和4种DNMT mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(均P＜0.05).shRNA组HPV16 E7、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L mRNA表达水平在48 h时的沉默效率分别为71.13％、50.53％、13.72％、46.27％和17.92％,96 h时分别为83.50％、74.2％、47.8％、64.7％和48.9％;而阴性对照组和空白对照组各时间点表达水平差异无统计学意义(均P＞0.05).慢病毒感染48、96 h时,3组细胞间上述4种DNMT蛋白表达量差异有统计学意义(均P＜0.01).shRNA组4种DNMT蛋白表达水平随感染时间的延长而逐渐下降,感染48 h时DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L蛋白表达抑制率分别为84％、37.2％、59.8％、49.3％,96 h时分别为73.1％、68.7％,55.5％、65.5％.结论 靶向沉默HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞E7基因能够干扰DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L mRNA及蛋白的表达.
-
HPV16E7靶向小干扰RNA对SiHa细胞增殖凋亡及6种抑癌基因的影响
目的：探讨HPV16E7在SiHa细胞株中对抑癌基因（MT1G、NMES1、RRAD、SFRP1、SPARC、TFPI2）的表达及细胞增殖能力和凋亡水平的影响。方法 SiHa细胞转染E7SiRNA 48 h后，qPCR检测E7及6种抑癌基因mRNA水平变化，CCK?8检测细胞增殖能力改变，流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果 SiHa细胞转染后48 h，qPCR结果显示实验组E7 mRNA显著降低（0.25±0.036，P<0.05）；6种抑癌基因的mRNA水平均显著增加（MT1G 1.403±0.190、NMES11.720±0.060、RRAD 1.390±0.160、SFRP11.493±0.120、SPARC 2.157±0.144、TFPI22.060±0.122，P<0.05）。细胞增殖结果显示，与阴性对照组及空白组比较，实验组细胞增殖能力显著降低（0.554±0.130，P<0.05），阴性对照组和空白组之间差异无统计学意义（P>0.05）。细胞凋亡结果提示，实验组细胞凋亡细胞频率为9.222%较阴性对照组（0.246%）及空白组（0.123%）明显增加（P<0.05），空白组与阴性对照组差异无统计学意义（P>0.05）。结论 HPV16导致细胞恶性转化过程中，E7可能通过抑制（MT1G、NMES1、RRAD、SFRP1、SPAR、TFPI2）6种抑癌基因的表达参与作用。
-
自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体检测尖锐湿疣皮损的研究
目的 采用自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体检测外生殖器尖锐湿疣皮损组织中HPV6b和11型E7蛋白的表达,探讨该抗体在临床检验中的应用价值.方法 55例经临床和病理确诊的尖锐湿疣皮损石蜡标本,用自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体进行免疫组化检测,其中18例皮损冰冻标本用RT-PCR法测定HPV6b和11型E7蛋白mRNA表达,分析与免疫组化结果的符合率.结果 55例尖锐湿疣皮损的免疫组化染色显示,HPV6b和11型E7蛋白为胞核染色,且皮损全层表皮细胞均有阳性表达,但基底层阳性细胞较多.HPV6b和11型E7蛋白阳性表达率分别为76.36％(42/55)和58.18％(32/55),总阳性表达率为94.55％(52/55),两蛋白双阳性率为40.00％(22/55),两蛋白均阴性表达为3例(5.45％).18例尖锐湿疣冰冻标本经RT-PCR法检测,HPV6b和11型E7 mRNA阳性表达分别为15例和10例,双阳性表达7例,其阳性表达型别与免疫组化结果完全一致,符合率均为100％.结论 该自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体免疫组化法检测尖锐湿疣皮损,检测结果直观,可以观察到HPV6b和11型感染细胞在病损中的分布位置.
关键词： 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒6 人乳头瘤病毒11 乳头瘤病毒E7蛋白质类 -
HPV16E7多肽体外诱生抗原特异性细胞毒性T细胞表型及功能的研究
目的 探讨高致癌性HPV16E7病毒抗原肽体外诱生HLA-A2阳性正常人外周血抗原特异性CD8+细胞毒性T细胞(CTL)的表型及功能状态.方法 以HPV16E711-20合成多肽、重组人IL-7、IL-2体外刺激26例HLA-A2阳性正常人外周血T细胞,用HLA-A*0201限制性表位肽/YMLDLQPETT五聚体技术,结合流式细胞仪对抗原特异性CTL进行频率、表型[CD45RA+CD27-效应性CTL、CD45RA-CD27-效应性记忆CTL(TEM)、CD45RA-CD27+中枢性记忆CTL(TCM)、CD45+CD27+初始性CTL]及功能(穿孔素、颗粒酶B、FasL)分析,并以无关肽HBVcoxe18-27作为阴性对照.结果 病毒多肽体外刺激T细胞7 d后,抗原特异性CD8+CTL数为(0.73±0.33)%,比未刺激组的(0.02±0.03)%明显增多(P＜0.01).进一步分析,在抗原特异性CTL中,效应性CTL、TEM、TCM及初始性CTL百分比分别为(26.07±13.46)%、(7.97±7.11)%、(33.25±19.68)%及(32.73±13.89)%,均比未刺激组的(0.02±0.03)%、(0.02±0.03)%、(0.02±0.03)%及(0.02±0.05)%明显增多,P值均＜0.01.HPV16E711-20表位特异性CTL分泌穿孔素、颗粒酶B、Fas-L的水平分别为(47.01±18.69)%、(80.53±13.32)%及(26.48±7.81)%,均比未刺激组的(0.38±0.55)%、(0.34±0.22)%及(0.16±0.16)%明显增多,P值均＜0.01.结论 HPV16E711-20多肽诱导CD8+T细胞克隆扩增,产生抗原特异性CD8+CTL,分泌毒性细胞因子,通过不同机制特异性杀伤病毒感染的靶细胞,在抗病毒免疫应答中发挥作用.
关键词： 人乳头瘤病毒16 乳头瘤病毒E7蛋白质类 T淋巴细胞 细胞毒性 表型 -
人IFNα-2b对HPV11-E7 DNA疫苗的免疫佐剂效应
强Th1型应答为主,对Th2型应答无明显影响.
关键词： 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒 乳头瘤病毒E7蛋白质类 干扰素α-2b -
温热对HPV-6/11型早期基因E6和E7表达的影响
目的 探讨不同温热条件对HPV感染皮损中E6/E7基因表达的影响.方法 采用PCR法确定6例尖锐湿疣标本HPV型别.利用37℃,42℃,45℃不同的温热条件处理置于培养液中的离体尖锐湿疣皮损,采用实时定量PCR法检测HPV-6/11型早期基因E6/E7 mRNA的表达水平.结果 6例标本中.各有1例分别感染HPV-6、HPV-11,4例同时感染HPV-6和HPV-11.E6、E7 mRNA的表达水平均随温度升高而逐渐减少.HPV-6 E6 mRNA的相对表达量分别为37℃(1.00±0.00),42℃(0.61±0.17).45℃(0.27±0.15);HPV-6 E7 mRNA的相对表达量分别为37℃(1.00±0.00),42℃(0.56±0.21),45℃(0.16±0.11);HPV-11 E6 mRNA的相对表达量分别为37℃(1.00±0.00),42℃(0.60±0.22).45℃(0.16±0.08);HPV-11 E7 mRNA相对表达量分别为37℃(1.00±0.00),42℃(0.55±0.15).45℃(0.24±0.06).组间比较差异有统计学意义(P<0.01.结论 温热对HPV-6/11型E6和E7基因表达的抑制作用可能是感染消退的机制之一.
关键词： 人乳头瘤病毒6 人乳头瘤病毒11 发热 乳头瘤病毒E7蛋白质类 -
HPV16 E7、TGF β1和MT1-MMP在宫颈病变中的表达及其意义
目的 检测宫颈病变组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7蛋白、转化生长因子β1(TGF β1)和膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)的表达情况,探讨其在宫颈病变形成及演进过程中的意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测了64例石蜡包埋的不同病变宫颈组织中HPV16 E7、TGF β1和MT1-MMP的表达.结果 在宫颈病变由良性到恶性的发展过程中,TGF β1和MT1-MMP的表达水平均逐渐升高(F=501.98、244.22,q=14.81～48.49,P＜0.05);HPV16 E7蛋白阳性组TGF β1和MT1-MMP的表达水平均较阴性组高(t=2.76、2.78,P＜0.01);TGF β1与MT1-MMP的表达水平呈正相关(r=0.96,P＜0.01).结论 TGF β1和MT1-MMP在宫颈病变中的表达与病变良恶性有关,TGF β1和MT1-MMP高表达是宫颈恶性肿瘤的表现之一;HPV16感染可能通过HPV16 E7蛋白影响TGF β1和MT1-MMP的表达.
关键词： 宫颈肿瘤 乳头瘤病毒E7蛋白质类 转化生长因子β 间质胶原酶
