首页 > 文献资料
-
混合无机砷对Keap1基因沉默HaCaT细胞中Nrf2通路的影响
目的 探讨Keap1沉默及染砷对Nrf2通路相关基因表达的影响及砷致皮肤早期氧化损伤的机制.方法 培养人源性正常HaCaT细胞(正常细胞)和Keap1沉默HaCaT细胞,将无机砷混合受试物按照LC50的1/100、1/50、1/10分为低(2.90 μmol/L)、中(5.80 μmol/L)、高(29.00 μmol/L)3个不同浓度组,以0 μmol/L无机砷混合受试物染毒Keap1沉默HaCaT细胞组为阴性对照组,正常细胞组为空白对照组,于3个时间点(24、48、72 h)采用实时荧光定量PCR检测Nrf2通路相关基因(Nrf2和Bach1)mRNA表达,使用ELISA试剂盒检测GSH、HO-1蛋白表达.结果 以阴性对照组作参照,Nrf2基因24 h 2.90、29.00 μmol/L染砷组表达上调,48 h和72 h 时2.90 μmol/L染砷组表达上调,而5.80 μmol/L及29.00 μmol/L染砷组表达均下调,差异有统计学意义 (P <0.012 5);Bach1基因24 h 2.90、5.80及29.00 μmol/L染砷组表达上调,48 h 2.90、5.80 μmol/L染砷组表达上调,而72 h 2.90、5.80及29.00 μmol/L染砷组表达均下调,差异有统计学意义 (P <0.012 5).随染毒浓度的增加,GSH蛋白和HO-1蛋白表达总体呈持续增长趋势.其中GSH蛋白24 h 2.90、5.80及29.00 μmol/L染砷组,48 h 5.80 μmol/L和29.00 μmol/L染砷组以及72 h 29.00 μmol/L染砷组表达差异有统计学意义 (P <0.012 5);HO-1蛋白24、48、72 h 2.90、5.80及29.00 μmol/L染砷组差异均有统计学意义 (P <0.012 5);空白对照组GSH蛋白和HO-1蛋白表达总体上低于阴性对照组,24 h差异均有统计学意义 (P <0.012 5).结论 Keap1基因沉默会引起Nrf2持续激活.Keap1、Nrf2、Bach1、GSH和 HO-1均参与砷诱导的抗氧化反应,并在砷致皮肤氧化应激损伤中发挥作用.
-
抑制Keap1基因对染砷HaCaT细胞蛋白底物的影响
目的 探讨抑制Keap1基因对染砷人永生化皮肤角质(HaCaT)细胞砷蛋白底物的影响.方法 将人源性正常HaCaT细胞作为实验的空白对照组,Keap1抑制HaCaT细胞作为染毒组和阴性对照组,培养8、24、48、72h,对染毒组给予无机砷混合物进行染毒,分为高、中、低浓度组,各浓度组的染毒浓度为LC50的1/10(29μmol/L)、1/50(5.8μmol/L)和1/100(2.9μmol/L);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测砷处理细胞内同型半胱氨酸(HCY)、S-腺苷甲硫氨酸(SAM)、三价砷甲基转移酶(As3MT)N-6-腺嘌呤DNA甲基转移酶1(N6AMT1的蛋白含量.结果 染砷8h,与阴性对照组比较,空白对照组、高浓度组SAM蛋白表达下调,低、中浓度组表达上调;低、中浓度组HCY蛋白表达上调,AS3MT蛋白在空白对照组、低浓度组表达上调,N6AMT1蛋白在空白对照组下调,低、中浓度组表达上调(P<0.0125).染砷24h,与阴性对照组比较,As3MT蛋白在低、中、高3个浓度组表达上调,SAM蛋白在空白对照组表达下调,低浓度组表达上调,高浓度组表达下调,HCY在空白对照组、低浓度组表达上调(P<0.0125).染砷48h,与阴性对照组比较,SAM、HCY的蛋白在低、中浓度组表达上调;N6AMT1的蛋白在中浓度组表达上调,高浓度组表达下调(P<0.0125).染砷72h,与阴性对照组比较,SAM蛋白在空白组和高浓度组表达下调,低浓度组表达上调,AS3MT的蛋白在空白对照组、低和中浓度组表达上调;N6AMT1的蛋白在空白对照组、高浓度组表达下调,在高浓度组SAM、As3MT、N6AMT1蛋白表达均下调(P<0.0125).结论 SAM和HCY蛋白表达在砷甲基代谢中表达有一致性;砷甲基化代谢中N6AMT1与AS3MT共同作用,其中N6AMT1起辅助作用;在高浓度、长时间的砷暴露中造成蛋白底物的耗竭,砷代谢发生障碍.
-
基于Keap1-Nrf2-ARE探讨强直性脊柱炎患者肺功能降低的机制
目的：基于Keap1-Nrf2-ARE通路探讨强直性脊柱炎患者肺功能降低的机制。方法：选取120例强直性脊柱炎患者作为研究组，并从体检中心抽取60例健康人作为正常对照组。采用德国Jager MasterScreen自动肺功能检测仪测定两组肺功能参数[用力肺活量（FVC）、第1秒用力呼气容积（FEV1）、大通气量（MVV）、大呼气流量（PEF）、25％肺活量位的大呼气流量（FEF25）、50％肺活量位的大呼气流量（FEF50）、75％肺活量位的大呼气流量（FEF75）]；采用酶联免疫分析法（ELISA法）检测两组血清中通路蛋白[Kelch样ECH相关蛋白l（Keap1）、核因子NF-E2相关因子（Nrf2）]、氧化应激指标[丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、活性氮（RNS）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、总抗氧化能力（TAOC）]和细胞因子[白细胞介素（IL）-18、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-4、IL-35]含量；采用魏氏法检测炎性指标红细胞沉降率（ESR）；采用日立7060型全自动生化分析仪检测C-反应蛋白（CRP）、免疫球蛋白。结果：与正常对照组比较：①强直性脊柱炎患者FEV1、MVV、PEF、FEF50、FEF75值均显著降低（P<0.01或P<0.05）；与强直性脊柱炎患者Keap1、Nrf2正常组比较，Keap1、Nrf2异常组FEV1、MVV、PEF、FEF50、FEF75值显著降低（P<0.05或P<0.01）。②强直性脊柱炎患者血清中Keap1、Nrf2、ROS、RNS、MDA值显著升高（P<0.01或P<0.05）， SOD、CAT、TAOC值均显著降低（P<0.01或P<0.05）。③强直性脊柱炎患者IL-18、TNF-α、ESR、CRP值显著升高（P<0.01），IL-4、IL-35值显著降低（P<0.01或P<0.05）。④Spearman相关性分析显示，FEV1、MVV、PEF、FEF50、FEF75与SOD、CAT、TAOC、IL-4、IL-35呈正相关，与Keap1、Nrf2、ROS、RNS、MDA、IL-18、TNF-α、ESR、CRP、胸闷、气短、呼吸困难呈负相关（P<0.01或P<0.05）。结论：58.33%的强直性脊柱炎患者存在肺功能降低，表现为肺功能参数FEV1、MVV、PEF、FEF50、FEF75值均显著降低，以上肺功能参数与抗氧化指标、抑炎细胞因子呈正相关，与通路蛋白（Keap1、Nrf2）、氧化指标、致炎细胞因子、炎症指标呈负相关。Keap1、Nrf2表达上升，Keap1-Nrf2-ARE信号通路活化后，机体抗氧化能力下降，促使细胞因子失衡、炎症指标升高，导致免疫复合物异常沉积增多，在引起强直性脊柱炎发病的同时使肺组织或器官受损或破坏，终出现肺功能降低。
-
PKC-Nrf2/Keap1-ARE抗氧化通路与肝脏疾病
氧化应激与肝脏疾病的发生发展密切相关.PKC-Nrf2/Keap 1-ARE抗氧化通路是机体内重要的抗氧化应激系统之一,它在抵御氧化应激和维持机体内的氧化还原平衡中起重要作用.本文综合介绍了PKC-Nrf2/Keap1-ARE抗氧化通路的基本结构、功能和激活机制,及其与肝脏疾病的关系.
