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RNA干扰HCCR-2基因表达对食管癌 EC9706细胞凋亡及周期的影响
目的：采用RNA干扰技术探讨人宫颈癌癌基因-2（HCCR-2）对人食管癌细胞凋亡及增殖周期的影响及其可能的分子机制。方法采用脂质体介导将pGCsi-shHCCR-2与pGCsi质粒转染人食管癌细胞株EC9706，经G418筛选获得稳定抑制HCCR-2表达的食管癌细胞模型；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测转染细胞HCCR-2、P21、P27 mRNA与蛋白表达；流式细胞仪检测各组细胞凋亡及增殖周期。结果成功构建稳定抑制 HCCR-2表达的食管癌细胞模型。反义组、空载体组和对照组细胞 HCCR-2 mRNA表达量分别为0.19±0.07、0.43±0.22、0.45±0.21；相应的P21 mRNA表达量分别为0.25±0.09、0.12±0.04、0.11±0.05；相应的P27 mRNA表达量分别为0.28±0.13、0.13±0.05、0.15±0.08；相应的HCCR-2蛋白表达量分别为0.42±0.23、0.88±0.41、0.91±0.46；相应的P21蛋白表达量分别为0.78±0.34、0.36±0.15、0.35±0.17；相应的P27蛋白表达量分别为0.81±0.38、0.41±0.17、0.43±0.24，较其他组，反义组细胞HCCR-2 mRNA及蛋白表达量显著降低（P＜0.01），而P21、P27 mRNA及蛋白表达量显著增加（P＜0.01）。反义组、空载体组和对照组细胞凋亡率分别为（19.64±3.35）%、（6.75±0.91）%、（6.79±0.98）%，反义组较其他组细胞凋亡显著增加（P＜0.01）；相应的G0/G1期细胞百分数分别为（56.58±11.37）%、（41.32±8.52）%、（42.65±8.63）%，反义组较其他组处于G0/G1期细胞数显著增加（P＜0.01）。结论下调EC9706细胞HCCR-2表达后，细胞凋亡增加，细胞周期出现G0/G1期阻滞，其作用机制与P21与P27表达增加有关。
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肝癌组织中人宫颈癌癌基因mRNA的表达及意义
目的 观察人宫颈癌癌基因(HCCR)mRNA在肝癌和癌旁正常组织以及肝癌患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平.方法 TRIZOL法提取肝癌组织和癌旁正常肝组织以及肝癌患者和正常人的PBMC的RNA,用RT-PCR技术分析HCCR基因在不同样品中的mRNA表达水平.结果 在肝癌组织中,HCCR的mRNA相对表达强度为0.776±0.101,癌旁正常组织中的相对表达强度0.470±0.154,两者相比,P＜0.05.在PBMC中,肝癌患者HCCR mRNA的表达强度为0.256±0.069,而正常人未检测出,两者相比,P＜0.05. 结论 HCCR基因可能参与了肝癌的发生与发展,与肝癌的病理过程有一定的相关性.
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上调HCCR-2基因表达对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响
目的 利用细胞转基因技术探讨人宫颈癌癌基因-2(HCCR-2)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 经脂质体介导将含有HCCR-2真核表达质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及Western blot鉴定;Western blot检测阳性细胞克隆Bcl-2、Bax蛋白表达改变；流式细胞仪检测细胞凋亡率；噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性.结果 成功建立高表达HCCR-2的阳性MCF-7细胞克隆(M-23),并证实其Bcl-2蛋白表达与细胞增殖活性均显著增高,而Bax蛋白表达与细胞凋亡显著降低.结论 上调MCF-7细胞HCCR-2基因后,细胞增殖活性增加,细胞凋亡降低,其作用机制与Bcl-2表达增加而Bax表达降低.
