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ERAP1基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的关联研究
目的：探讨内质网氨肽酶1（endoplasmic reticulum aminopeptidase 1，ERAP1）基因多态性与非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的相关性。方法入选NSCLC患者224例，健康体检人群207例。采用Taq Man探针基因分型方法对ERAP1基因SNP rs26653和rs26618两个位点进行基因分型，并构建单倍型，评估上述两个SNPs及单倍型与NSCLC的相关性。结果病例组和对照组ERAP1基因rs26618和rs26653基因型和等位基因频率差异有统计学意义（P＜0.05）。病例组和对照组rs26618/rs26653单倍型CG、TC的单倍型频率差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ERAP1基因与NSCLC的发生有关， rs26618/rs26653-CG单倍型可能增加NSCLC的患病风险，rs26618/rs26653-TC单倍型对NSCLC可能具有保护性作用。
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氨肽酶N与胆石形成关系的临床及实验室研究
目的观察APN活性在胆石病人及致石饮食组动物胆汁中的变化并探索它在成石过程中可能起的作用. 方法测定胆石病人和喂成石饮食动物(兔)的胆囊、胆管胆汁APN活性和酯质成分,探讨APN 活性与胆汁CSI之间的相关关系. 结果胆石病人和结石形成前兔的胆囊、胆管胆汁APN活性均显著高于对照组并与自身CSI呈显著的直线正相关.胆固醇结石病人胆囊胆汁的APN活性[(66.0±24.1)?U/ml]较自身胆管胆汁[(38 .4±9.4)?U/ml]显著升高(P<0.05);且2者均明显高于对照组胆囊胆汁[(23.0± 7.7)?U/ml](2者P均<0.05).致石饮食组动物和对照组胆囊胆汁的APN活性均显著高于自身胆管胆汁(2者P均<0.05);致石饮食组胆囊胆汁[(14.50±4.08)?U/ml]和胆管胆汁[(9.13±1.67)?U/ml]的APN活性同样均明显高于对照组相应的胆囊胆汁[(6 .05±0.95)?U/ml]和胆管胆汁[(3.09±0.92)?U/ml](P值均<0.05). 结论根据胆汁APN具有促成核活性与自身CSI呈显著正相关,提示APN可能参与胆石形成的早期阶段,而检测胆汁中APN的活性可能具有预测胆结石形成危险性的作用.
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卵巢上皮性癌淋巴结转移相关差异表达蛋白内质网氨基肽酶1的表达及意义
目的 从基因转录及蛋白表达的水平检测内质网氨基肽酶1(ERAP1)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞、组织中的表达,探讨其与卵巢癌转移的关系.方法 应用实时荧光定量PCR技术、蛋白印迹法检测在卵巢癌淋巴结非定向转移细胞系(SKOV3)与淋巴结定向高转移细胞系(SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4)中ERAP1 mRNA和蛋白的表达情况;并应用免疫组化方法在人卵巢癌原发灶与相应的淋巴结转移灶、裸鼠卵巢癌移植瘤原发灶与相应的淋巴结转移灶中对ERAP1的蛋白表达进行验证.结果 SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4细胞中ERAP1 mRNA和蛋白的表达呈下降趋势(分别为0.118±0.012、0.031±0.003、0.028±0.003、0.016±0.005;0.91±0.33、0.09±0.03、0.10±0.04、0.05±0.04),其中,SKOV3细胞中ERAP1 mRNA和蛋白的表达显著高于SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4细胞,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).ERAP1蛋白在人卵巢痛原发灶(184±14)和相应的淋巴结转移灶、裸鼠卵巢癌移植瘤原发灶(143±22)和相应的淋巴结转移灶(97±12)中的表达均呈下降趋势,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 卵巢癌中ERAP1表达的下降或缺失与淋巴结转移有关.
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内质网氨肽酶2基因rs2549782多态性与妊娠期高血压发病的相关性
目的:探讨内质网氨肽酶2(ERAP2)基因rs2549782多态性与淮安地区汉族女性妊娠期高血压发病的关系.方法:应用病例对照研究,收集2013年6月—2016年4月江苏省淮安市妇幼保健院确诊的汉族妊娠期高血压疾病患者100例为研究对象(病例组),同期住院分娩正常孕妇310例为对照(对照组),应用MassARRAY-IPLEX技术和基质辅助激光解吸离子飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对ERAP2基因rs2549782位点进行基因分型.结果:2组中rs2549782位点等位基因分布差异无统计学意义(P=0.089),而基因型分布差异有统计学意义(P=0.045).经校正混杂因素后,Logistic回归分析提示G等位基因(OR=1.64,95%CI:1.09~2.47)以及GT基因型(OR=2.23,95%CI:1.01~4.07)和GG基因型(OR=2.96,95%CI:1.20~7.31)为妊娠期高血压发生的危险因素.结论:ERAP2基因rs2549782位点单核苷酸多态性与淮安汉族妊娠期高血压疾病的发生具有相关性,G等位基因、GT和GG基因型均为妊娠期高血压的危险因素.
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131Ⅰ-NGR的制备及人CD13表达细胞株的体外筛选
目的 通过制备131I-NGR进行人CD13表达细胞株的体外筛选,探讨NGR对不同肿瘤的靶向性.方法 设计合成NGR短肽,以Iodogen法对NGR进行131I标记,探讨Iodogen法标记的佳实验条件及标记物性质.将20μl标记产物置于双倍体积的生理盐水和新鲜人血清中混合,在室温和37℃下分别于2、12和24 h时用TLC测定放化纯,评价产物的体外稳定性.通过细胞免疫荧光实验和蛋白印迹实验检测HT-1080、HUVEC、HepG2、U87Mg、PC-3、HT-29和MCF-7细胞株的CD13表达.对阳性表达细胞株进行131I-NGR受体分析.以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度Na131I、NGR和131I-NGR在24、48和72 h对HT-1080和HT-29细胞株的体外生长抑制率,采用单因素方差分析进行统计分析.结果 成功标记131I-NGR,佳标记条件为131I 18.5 MBq、NGR 10μg和Iodogen 20 μg,标记率为(93.7±2.5)％,比活度达1.41 TBq/mmol.标记后稳定性良好,24 h后标记率仍＞87％.免疫荧光实验和蛋白印迹实验结果证实HT-1080、HUVEC、HepG2、U87Mg和PC-3细胞株CD13表达均为阳性,其中HT-1080细胞株为强阳性,而HT-29和MCF-7细胞株CD13为阴性表达.HT-1080细胞体外受体结合实验提示1h为佳结合时间,测得Kd值为7.3 nmol/L,Bmax为0.302 nmol/L.与HT-29细胞相比,131I-NGR对HT-1080细胞株的生长抑制作用更强,并呈一定的剂量-效应和时间-效应关系；在72 h时,3700 MBq/L 131I-NGR对HT-1080的抑制率达(67.9±3.4)％.结论 经Iodogen法制备131I-NGR具有标记时间短、标记率高且标记产物稳定性好的特点.体外实验筛选出CD13表达强阳性的人肿瘤细胞株HT-1080,其与131 I-NGR结合特异性高.
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GPDA在糖尿病早期肾损害诊断中的应用
目的研究尿甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)诊断糖尿病早期肾损害的价值.方法采用解放军第88医院检验科建立的GPDA连续监测法,测定87例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)和72名正常对照的尿液GPDA,并与其他反映早期肾损害的指标相比较.结果 NIDDM患者尿液GPDA显著高于正常对照组(P<0.01),增高程度与NIDDM病程、血糖水平、高血压关系密切.尿GPDA与N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和尿微量白蛋白(UmA)呈显著正相关. 结论尿液GPDA测定是一项新的预测NIDDM早期肾损害的敏感指标.
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血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶对肝癌诊断价值的探讨
目的检测血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)并探讨其对肝癌的诊断价值.方法采用连续监测法分别对30例原发性肝癌、胆石症、肺癌、肝硬化、慢性肝炎及15例胃癌患者血清GPDA进行测定.结果原发性肝癌患者的GPDA活性和阳性率比胆石症、肺癌、肝硬化、慢性肝炎及胃癌患者显著增高(P＜0.01).结论血清GPDA活性测定对原发性肝癌有一定辅助诊断价值.
