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虾青素对高糖诱导足细胞损伤的影响
目的 利用条件永生型人源足细胞系,探讨虾青素对高糖诱导的足细胞损伤的影响.方法 体外培养人肾脏足细胞,按培养条件的不同分为正常葡萄糖浓度组(NG)、高糖组(HG)、高渗组(MA)、高糖+虾青素不同剂量干预组(10-6M,10 5M,10-4M).干预24h后收集足细胞.用Annexin V/PI双染色法,应用流式细胞仪检测虾青素对足细胞凋亡的影响.并采用物理离心的方法检测虾青素对足细胞粘附力的作用.结果 HG组足细胞早期凋亡率较NG组增高[(7.7±0.9)％ vs.(2.7±0.74)％,P=0.000],不同剂量虾青素干预组较HG组足细胞早期凋亡率均下降[(5.7±1.0)％,P=0.017;(5.2±0.7)％,P=0.006;(4.3±0.9)％,P=0.001],并呈剂量依赖性.高剂量的虾青素可以缓解高糖诱导的足细胞粘附力的降低[(67.2±4.3)％ vs.(37.9±9)％,P=0.017].结论 虾青素对高糖诱导的人足细胞早期凋亡和粘附功能有保护作用.
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人尿源性干细胞条件培养基对高糖诱导足细胞凋亡的影响
目的：通过正常人尿液提取干细胞，探讨尿源干细胞（human urine - derived stem cells，hUSCs）的条件培养基（conditioned medium，CM）对高糖所致人肾脏足细胞损伤的影响。方法：从健康男性尿液提取 hUSCs，鉴定后进行体外培养，制备 hUSCs - CM；体外培养人肾脏足细胞株，按培养条件不同，分为正常葡萄糖对照组（ NG 组）、高糖组（HG 组）、甘露醇高渗对照组（MA 组）及 HG + hUSCs - CM 不同剂量（1×，5×，10×）干预组，干预24 h 后收集细胞，以 RT - PCR 检测足细胞骨架蛋白 synaptopodin 的表达；以 Annexin V - FITC 和 PI 双染方法，应用流式细胞仪观察各组足细胞的早期凋亡率。结果：HG 组足细胞 synaptopodin mRNA 的表达较 NG 组降低（P <0．05），HG + hUSCs - CM（1×，5×，10×）组的足细胞 synaptopodin mRNA 的表达较 HG 组均增加（P <0．05）；HG 组足细胞凋亡率较 NG 组增高（P <0．05），hUSCs - CM 干预组较 HG 组足细胞凋亡率均下降，并和 hUSCs - CM 具有剂量相关性（P <0．05）。结论：hUSCs - CM 对高糖诱导的人足细胞凋亡及损伤具有保护作用。
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黄芪甲苷通过抑制PKC/MAPK通路修复损伤人足细胞裂孔膜
目的 探讨核苷酸嘌呤霉素对人足细胞的损伤作用及黄芪甲苷的修复作用,并探索PKC/MAPK通路是否参与其中,寻找可能存在的作用机制.方法 用CCK-8法筛选合适的核苷酸嘌呤霉素造模浓度及黄芪甲苷的大无毒浓度,予核苷酸嘌呤霉素刺激人足细胞造成损伤,予不同浓度的黄芪甲苷处理后,应用Western blot法检测nephrin、podocin、PKC、JNK及p38蛋白水平的表达情况.结果 核苷酸嘌呤霉素刺激后,nephrin、podocin的蛋白的表达明显降低,而PKC、JNK、p38的表达明显上升,用药后渐趋正常,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05),溶剂对照组无明显改变,无统计学差异(P＞0.05).结论 核苷酸嘌呤霉素能造成人足细胞裂孔膜损伤,黄芪甲苷对这种损伤有修复作用,而PKC/MAPK通路参与修复过程,同时这种修复作用与黄芪甲苷浓度呈正相关.
关键词： 黄芪甲苷 人足细胞 nephrin Podocin PKC/MAPK通路 -
骨形成蛋白7能减轻TGF-β1诱导的人足细胞损伤
目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenie protein 7,BMP-7)抑制转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人足细胞转分化作用及其机制研究.方法:构建及鉴定pcDNA 3.1rh BMP-7质粒,体外培养人足细胞,先后予10、20、50、100、200 μg/mL重组的BMP-7诱导足细胞,分别在培养24、48、72 h收集细胞,流式细胞试验检测细胞凋亡率,以此选择重组BMP-7适的刺激浓度和适的作用时间点.实验分为正常对照组、TGF-β诱导组(TGF-β)及质粒转染组(PEGF-BMP-7),质粒转染组加入重组BMP-7 100 μg/mL预处理48 h后,而TGF-β诱导组和PEGF-BMP-7组分别予5 ng/mL TGF-β1处理足细胞后,通过免疫荧光观察足细胞Podocin、α-SMA、VIM的表达变化;收集细胞抽取总RNA和总蛋白,应用RT-PCR和Westernblot观察重组BMP-7对人足细胞Podocin、α-SMA、VIM的mRNA和蛋白表达的影响.结果:①本实验成功构建pcDNA 3.1rhBMP-7质粒,转染的人足细胞能稳定表达BMP-7,质粒转染组BMP-7蛋白表达水平(0.487±0.012)较正常对照组(0.251±0.012)和TGF-β诱导组(0.151±0.015)明显增高(P＜0.001);②Real-time PCR检测结果显示TGF-β诱导组足细胞Podocin的mRNA表达水平(0.285±0.013)较正常对照组(1.057±0.090)明显降低(P＜0.001),而质粒转染组足细胞Podocin的mRNA表达水平(0.693±0.077)较TGF-β诱导组有升高趋势(P=0.003);TGF-β诱导组和质粒转染组足细胞的α-SMA(1.257±0.039和1.028±0.093)、VIM(1.114±0.097和0.821±0.059)的mRNA表达较正常对照组(0.357±0.089和0.403±0.020)明显升高(P＜0.001),质粒转染组足细胞α-SMA和VIM的mRNA较TGF-β诱导组有下降趋势(P=0.011,P=0.002).Western blot检测结果显示TGF-β诱导组足细胞Podocin的蛋白表达水平(32.923±5.301)较正常对照组(101.807±9.208)明显降低(P＜0.001),而质粒转染组足细胞Podocin的蛋白表达水平(90.507±7.810)较TGF-β诱导组有升高趋势(P＜0.001);TGF-β诱导组和质粒转染组足细胞的α-SMA(116.120±8.300和93.832±10.602)、VIM(124.016±9.702和100.801±6.801)的蛋白表达较正常对照组(35.730±4.892和43.801±2.600)明显升高(P＜0.001),质粒转染组足细胞α-SMA和VIM的蛋白较TGF-β诱导组有下降趋势(P=0.017,P=-0.007).结论:TGF-β1可诱导人足细胞发生转分化,导致其α-SMA、VIM表达增高,Podocin表达减少,BMP-7能显著抑制此现象,提示BMP-7可逆转足细胞EMT,对足细胞损伤具有保护作用.
