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低强度激光引起线粒体功能及细胞内游离Ca2+的变化
目的研究低强度激光对心肌细胞线粒体功能及细胞内游离Ca2+的影响,探讨低强度激光提高脂质体介导的心肌细胞基因转染可能的发生机制.方法对体外培养的Wistar大鼠心肌细胞给予低强度激光照射,激光波长510.6 nm,功率密度为1、5、10 mW/cm2,照射时间为600、1 200 s,使能量密度分别为0.6、1.2、3、6、12 J/cm2.同时设对照组.照射后48 h采用四唑盐(MTT)比色法和激光共聚焦成像技术,分别测定细胞线粒体功能及细胞内游离Ca2+.结果所有照射剂量均能显著提高心肌细胞线粒体功能,其中以1.2 J/cm2组的效应明显,其光密度(optical density, OD)值较对照组提高了9.39倍(1.006±0.069/0.107±0.007, P＜0.01);其余各组OD值提高了1.4～2.2倍(P＜0.05).细胞内游离Ca2+测定,各实验组均显著降低(P＜0.05).结论低强度激光对脂质体介导的心肌细胞基因转染率的提高,与其增强细胞线粒体的功能有关,也可能与降低了细胞内游离Ca2+的含量,继而促进微管的聚合,增强细胞骨架的运输功能有关.
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三氧化二砷对小鼠膀胱癌细胞系细胞内游离钙浓度影响的实验研究
目的:研究As2O3对小鼠膀胱癌细胞系WYH929肿瘤细胞内游离钙离子浓度的影响.方法:用钙离子荧光探剂Fura 2-AM,以荧光分光光度计检测As2O3对膀胱癌细胞内游离钙离子浓度的变化.结果:As2O3可以使肿瘤细胞[Ca2+]i水平明显升高,由88 nmol/L逐渐升高至230 nmol/L,存在明显的量效关系(P＜0.05),而与细胞外钙离子浓度变化无关(P＞0.05).结论:As2O3影响小鼠膀胱癌细胞株WYH929肿瘤细胞内钙稳态,诱导肿瘤细胞内钙离子浓度持续升高;这可能是其抗肿瘤,诱导肿瘤细胞凋亡作用的机制之一.
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下丘脑神经元中游离Ca2+的电生理测定法
目的采用膜片钳技术通过对SD乳鼠下丘脑神经元上Ca2+激活K+通道(KCa)Ca2+敏感性的研究测定其细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i).方法首先应用内面向外式研究不同[Ca2+]i时KCa通道的开放概率(P0),作出量效曲线,再应用细胞贴附式求得生理状态下此通道的开放概率,从量效曲线上查出的细胞内游离Ca2+浓度.结果试验表明SD乳鼠下丘脑神经元上KCa通道的P0具有对[Ca2+]i的高度敏感性,求得下丘脑神经元内的[Ca2+]i为0.1μmol/L.结论实验结果说明此电生理法测定[Ca2+];具有较高的可靠性和准确性.
关键词： 细胞内游离Ca2+ 膜片钳技术 Ca2+激活K+通道 细胞信号转导 -
生理浓度睾酮对前列腺素F2α诱导SD大鼠血管平滑肌细胞中Ca2+升高的影响
目的:观察牛理浓度睾酮短时作用对前列腺素F2α(PGF2a)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)中Ca2+升高的影响. 方法:贴块法培养雄性SD大鼠胸主动脉VSMCs,钙敏荧光指示剂Fura-2负载细胞,Nikon TE-2000E活细胞工作站对VSMCs内钙信号进行测定. 结果:VSMCs给以单纯PGF2α(10μmol/L)刺激,[Ca2+]i在数秒钟内由基线水平100 nmol/L左右迅速升至约500 nmol/L的峰值,随后呈缓慢下降,约150 s降至基线水平.在PGF2α作用的峰值给以牛理浓度(40 nmol/L)睾酮或乙醇溶媒干预,前者能够明显缩短[Ca2+]i由峰值回落至基线水平的时间[与乙醇溶媒相比,(104.9±27.0)s vs(153.5±40.4)s,P<0.01].在PGF2α作用前预先给以睾酮或乙醇溶媒处理2 min,前者对PGF2α刺激的[Ca2+]i峰值水平无明显影响[与乙醇溶媒相比,(390.0±126.0)nmol/L vs(403.4±160.7)nmol/L,P>0.05],但使[Ca2+]i由峰值降至基线水平的时faJ显著缩短[与乙醇溶媒相比,(120.6±32.0)s vs (151.4±27.4)s,P<0.01]. 结论:睾酮对PGF2α诱导的VSMCs中[Ca2+]i升高具有快速抑制作用,提示睾酮通过与VSMCs细胞膜作用抑制受体门摔钙通道介导的Ca2+内流.
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蛙皮素对PC-3细胞骨架及细胞内游离Ca2+的影响
目的:观察蛙皮素(BBS)对前列腺癌PC-3细胞骨架形态及细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)浓度的影响.方法:①利用免疫荧光法(IH),结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测10-5mol/L浓度BBS处理的PC-3细胞角蛋白(CK)的表达,以反映其对细胞骨架形态的影响;②应用Fluo-3/AM荧光标记技术和LSCM检测不同浓度BBS(10-9、10-7、10-5 mol/L)处理的PC-3细胞[Ca2+]i浓度.结果:① 10-5mol/L浓度的BBS可促进PC-3细胞CK表达及伪足形成;② BBS可提高PC-3细胞[Ca2+]i浓度,并具有浓度依赖性.结论: 实验证明一定浓度的BBS可明显提高PC-3细胞[Ca2+]i浓度及CK表达,进而影响PC-3细胞骨架形态.本研究为探索BBS应用于肿瘤研究以及BBS作用后细胞内信息传递途径提供了基础.
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β-淀粉样蛋白和载脂蛋白E4升高神经元胞内游离钙
目的研究β-淀粉样蛋白（Aβ）和载脂蛋白E4（Apo E4）对神经元胞内游离Ca2+浓度的影响，探索它们对神经元的毒性效应。方法制备0～3 d新生SD大鼠的海马和皮层神经元悬液，负载上fura-2/AM，实验组分别加入Aβ25～35、Apo E4以及Aβ25～35+Apo E4孵育液温孵3 min后，用荧光双波长分光光度计测定神经元［Ca2+］i；采用显微准弹性激光散射技术（MQLS），分析Aβ25～35及Apo E4对单个神经元散射光强度自相关函数（ACF）的影响，通过公式由ACF拟合出反映细胞膜流动性的频移线宽Г。结果 Aβ25～35和Apo E4均能升高海马和皮层神经元静息［Ca2+］i (P<0.05)，其中5 μmol*L-1 Aβ25～35的作用大于1 μmol*L-1 Aβ25～35的作用(P<0.05)；Aβ25～35和Apo E4也能增强KCl去极化诱导的海马和皮层神经元［Ca2+］i升高(P<0.05)。Aβ25～35（1 μmol*L-1）+Apo E4（0.1 μmol*L-1）共同作用也使神经元静息［Ca2+］i 及KCl去极化诱导的神经元［Ca2+］i升高(P<0.05)，但两者共同作用未见其升［Ca2+］i效应进一步增大。Aβ25～35和Apo E4均降低海马和皮层神经元的频移线宽Г。结论 Aβ25～35和Apo E4均能升高神经元静息［Ca2+］i及降低神经元膜流动性，但两者共同作用未能显示升［Ca2+］i效应的协同作用，提示Aβ25～35和Apo E4有一定的神经毒性。
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胰高糖素样肽GLP-1(7-36)NH2对体外培养的新生大鼠胰岛细胞作用的研究
目的与方法探讨GLP-1(7-36)NH2对培养的新生大鼠胰岛细胞胰岛素和胰高糖素释放的影响,并以Fluo-3为探针,用570型粘附式细胞仪研究GLP-1(7-36)NH2对β细胞内Ca2+的作用.结果在含11.2 mmol/L葡萄糖的KRBB液中孵育1 h,GLP-1(7-36)NH2在10-11～10-8 mol/L使胰岛细胞胰岛素分泌增加和胰高糖素分泌减少;在10-9 mol/L时,促胰岛素释放作用大.在含2.8 mmol/L葡萄糖时,GLP-1(7-36)NH2使胰岛素分泌无明显增加,但在含葡萄糖5.6、11.2和16.7 mmol/L时,胰岛素分泌明显增加;在含葡萄糖16.7 mmol/L时,GLP-1(7-36)NH2使胰岛b 细胞内Ca2+升高明显.结论 GLP-1(7-36)NH2具有葡萄糖浓度依赖的促胰岛素释放作用和抑制胰高糖素分泌作用.
