酒精加速了口腔上皮细胞的HIV感染

两种基因型牙龈卟啉单胞菌对上皮细胞的影响

目的 比较2种fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)刺激下口腔上皮细胞白介素-6( Interlukin-6,IL-6)的表达.方法 以未受P.g刺激的上皮细胞作为对照组,实验组用P.g ATCC 33277(I型菌毛组)和W83、47A-1(Ⅳ型菌毛组)分别与口腔上皮细胞孵育24h,于1、3、6、24h收集细胞和培养上清液.逆转录-多聚酶联反应检测KB细胞IL-6 mRNA的表达,酶联免疫反应检测培养上清液中IL-6的变化.结果 1～24h实验组IL-6mRNA的表达均高于对照组(P＜0.05),6h Ⅳ型菌毛组IL-6mRNA表达高于I型菌毛组(P＜0.05),IL-6 mRNA和蛋白水平表达不一致,3～24h I型菌毛组IL-6蛋白水平高于Ⅳ型菌毛组和对照组(P＜0.05),提示IL-6的表达存在转录后水平的调节.结论P.g菌毛基因型与上皮细胞表达细胞因子的水平相关,Ⅳ型菌毛的调节作用强于I型菌毛,提示P.g致病性与其fimA基因型相关.

不同生物状态白色念珠菌对口腔上皮细胞的黏附能力及ALS mRNA表达

目的：观察不同生物状态白色念珠菌对口腔上皮细胞的黏附能力及ALS mRNA表达,以期揭示口腔白色念球菌感染机制。方法将白色念珠菌3683、SC5314、3630与来源于50名健康志愿者的口腔上皮细胞混合培养,采用革兰阳性染色观察白色念珠菌的黏附能力,采用荧光定量RT-PCR法检测白色念珠菌3683、SC5314、3630中ALS2及ALS3 mRNA表达情况。采用SPSS 15.0统计学软件进行数据分析。结果黏附实验结果显示,3株白色念珠菌均可黏附于口腔上皮细胞,且菌株3683黏附数量明显多于菌株SC5314和菌株3630,统计学比较显示,差异有统计学意义(P<0.05),而菌株SC5314和菌株3630黏附数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。荧光定量RT-PCR结果显示,白色念珠菌3683、SC5314、3630中均能检测到ALS2及ALS3 mRNA表达,其中,菌株3683 ALS2及ALS3 mRNA表达水平均高于菌株SC5314和菌株3630,统计学比较显示,差异有统计学意义(P<0.05)；菌株3630 ALS2及ALS3 mRNA表达水平均高于菌株SC5314,但两者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同生物状态白色念珠菌的口腔上皮细胞黏附能力不同,菌株黏附能力的强弱可能与其ALS2及ALS3基因情况表达相关。

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激上皮细胞表达细胞因子的比较

目的 比较不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, P. gingivalis)刺激下口腔上皮细胞表达细胞因子的水平.方法 P. gingivalis ATCC 33277(I fimA),W83(Ⅳ fimA),47A-1(Ⅳ fimA)分别与KB细胞ATCC CCL17共同孵育6h,在3h和6h收集细胞和培养上清液.逆转录-聚合酶链式反应检测KB细胞IL-8,IL-6,IL-1β mRNA的表达,酶联免疫反应检测培养上清液中IL-8,IL-6,IL-1β的变化.结果 3h时,Ⅳ fimA组IL-6蛋白水平低于I fimA组(P＜0.05),6h时,Ⅳ fimA组IL-6和IL-8蛋白水平均低于Ⅰ fimA组(P＜0.05);IL-8,IL-6 mRNA和蛋白水平表达不一致,提示存在转录后水平的调节.3h,6h时,IL-1β对P. gingvalis刺激不敏感,mRNA和蛋白表达水平都很低.结论 P. gingivalis fimA基因型与上皮细胞表达细胞因子的水平相关,提示P. gingivalis致病性与其fimA基因型相关.

介绍一种新型口腔护理液的配制方法

过氧化氢溶液可放出新生态氧,形成氧化作用强的自由基杀灭细菌、病毒、芽孢及真菌,可清除口腔内的有机物及坏死组织,具有去腐生肌、清除口腔异味的作用.碳酸氢钠可预防真菌感染,减少pH值过低造成的口腔糜烂及溃疡.临床护理人员常采用过氧化氢溶液或碳酸氢钠溶液进行口腔护理.但临床应用3%的过氧化氢溶液浓度较高,对口腔黏膜刺激性强,并且产生大量泡沫给清洗带来不便.碳酸氢钠易损伤口腔上皮细胞,不宜长时间使用.

超微超顺磁性纳米氧化铁标记犬口腔黏膜上皮细胞与磁共振成像实验

背景：上皮细胞是组织工程常用的种子细胞类型，但如何无创性地对其进行体内示踪仍缺乏有效手段。目的：探讨超微超顺磁性纳米氧化铁标记犬口腔黏膜上皮细胞及其体外磁共振成像的可行性。方法：原代培养比格犬口腔黏膜上皮细胞，分别予以0，5，10，25，50，100 mg/L超微超顺磁性纳米氧化铁联合0.75 mg/L多聚赖氨酸标记犬口腔黏膜上皮细胞，普鲁士蓝染色鉴定不同质量浓度梯度下细胞内铁表达情况，CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖情况，确定佳标记质量浓度。后，将2×105个标记上皮细胞置于1 mL PBS缓冲液中重悬，行3.0 T MR T2*WI序列扫描，测量不同标记质量浓度下MRI灰度值。结果与结论：①超微超顺磁性纳米氧化铁联合0.75 mg/L多聚赖氨酸成功标记口腔黏膜上皮细胞，普鲁士蓝染色显示细胞内存在蓝染铁颗粒，且随质量浓度增加，蓝染颗粒增加，至25 mg/L时蓝染率达到饱和；②CCK-8法检测结果表明超微超顺磁性纳米氧化铁质量浓度低于25 mg/L时，细胞增殖不受影响；③磁共振扫描显示，随着转染质量浓度增加，超微超顺磁性纳米氧化铁标记细胞磁共振信号降低；④结果表明，超微超顺磁性纳米氧化铁联合多聚赖氨酸能有效标记犬口腔黏膜细胞，且当转染质量浓度在25 mg/L以下时，不影响细胞增殖，体外磁共振成像显影良好。

阻断白色念珠菌粘附口腔粘膜上皮细胞的实验研究

白色念珠菌的粘附与其表面甘露糖结构有关，为探讨阻断粘附的方法，我们采用体外法测定其对口腔上皮细胞的粘附数量，显示：白色念珠菌粘附感染上皮细胞后，甘露糖可以在一定程度上减少粘附，绿慕安及刀豆素A可以有效地减少粘附。提示甘露糖及绿慕安可能有助于治疗白色念珠菌感染。

四种口腔修复材料对细胞的毒性分析

目的:研究纯钛、钛合金、钴铬合金和镍铬合金四种非贵金属口腔修复材料对L-929成纤维细胞的毒性作用.方法:应用口腔修复材料制备材料浸提液处理培养L-929细胞,采用AnnexinV-FITC试剂盒比较细胞凋亡水平改变,采用Western blot检测细胞凋亡相关基因的表达.结果:纯钛与钛合金诱导L-929细胞凋亡的水平与对照组没有统计学差异(P＞0.05)；钴铬合金和镍铬合金材料浸提液可引起L-929细胞凋亡增加(P＜0.05).结论:纯钛与钛合金材料对口腔黏膜细胞的毒性作用相较钴铬合金和镍铬合金材料低,更具安全性.

体外共培养环境对犬脂肪干细胞、口腔上皮细胞的影响

目的：探讨体外共培养环境对犬脂肪干细胞(ADSC)、口腔上皮细胞(OK)移行速率、增殖速率的影响。方法：获取犬ADSC和OK并鉴定，将两种细胞种植于同一个刻度培养皿内，检测共培养环境下细胞的移行速率，与单一细胞培养环境作对比，观察细胞移行速率的改变。收集两种细胞培养上清，加入到对方培养基中，形成体外模拟混合培养环境，MTT法检测细胞增殖曲线的改变。结果：共培养环境下，OK、ADSC细胞的移行速率均较单一细胞培养环境下高。与常规培养相比，在体外模拟共培养环境下，OK、ADSC细胞的增殖曲线均变陡。结论：在体外共培养环境中， ADSC、OK呈现互相促进、互相吸引、协同增殖态势，细胞的移行速率、增殖速率均得到提高，能够共同用于组织工程口腔黏膜的构建。

体外培养口腔上皮细胞感染白色念珠菌后白介素-8的表达改变

目的:观察白色念珠菌对体外培养口腔黏膜上皮细胞(KB细胞)表达白介素8(IL-8)的影响.方法:采用逆转录-聚合酶反应(RT-PCR)技术及酶联免疫吸附实验(ELISA),分别检测体外口腔上皮细胞感染菌丝型、孢子型、灭活白色念珠菌及白色念珠菌培养上清后表达、分泌IL-8的mRNA水平及上清液中的蛋白含量,对实验数据间差异进行t检验,判断分析其统计学意义.结果:菌丝型、孢子型及120℃灭活处理的白色念珠菌均能诱导KB细胞增强IL-8的表达,RT-PCR成像分析系统Mark值分别为180.23、186.36、143.41,与对照组85.57相比,具有显著性差异(P＜0.05);白色念珠菌的培养上清(Mark值为80.87)却不能增加其表达.动态观察结果显示,白色念珠菌诱导KB细胞表达、分泌IL-8随时间增加而增强,72h达到高峰,随后出现下降趋势;剂量依赖性观察发现,KB细胞随着菌量增多而IL-8的分泌减少,呈现负相关性.结论:白色念珠菌能增加口腔上皮细胞分泌IL-8,IL-8可能与黏膜局部白色念珠菌感染、防御密切相关.

HPV16 E6/E7永生化口腔上皮细胞的上皮-间叶变

目的研究人乳头状瘤病毒HPV16 E6/E7永生化口腔上皮细胞的上皮-间叶变(EMT),以及发生EMT细胞的生物学特征.方法相差显微镜、微分干涉显微镜观察HPV16 E6/E7永生化口腔上皮细胞系HIOEC细胞形态学改变;透射电镜观察细胞间桥粒形成情况; RT-PCR比较正常口腔上皮细胞和HIOEC细胞中β-catenin、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、wnt-4、wnt-5a、snail基因的转录情况;免疫组化检测HIOEC细胞中细胞角蛋白(CK)、波形蛋白(Vim)的表达.免疫荧光、激光共聚焦显微镜观察Actin 细胞骨架的改变.结果 HIOEC细胞呈梭形成纤维细胞样改变,细胞分散生长;RT-PCR结果显示HIOEC细胞E-cadherin、wnt-4转录水平下调, wnt-5a转录水平上调,β-catenin、snail基因无明显改变.HIOEC细胞共表达CK和Vim.Actin细胞骨架在HIOEC细胞中更显丰富,呈束排列.结论 HPV16 E6/E7永生化口腔上皮HIOEC细胞发生上皮-间叶变,细胞表现间叶细胞的部分生物学特征.

HPV16 E5、E6和 E7基因重组慢病毒载体的构建及其感染口腔上皮细胞

目的：分别构建 HPV16 E5、E6和 E7癌基因的重组慢病毒载体感染人口腔上皮细胞，为研究 E5基因对口腔上皮细胞的致癌机制奠定基础。方法克隆 HPV16 E5、E6和E7基因，分别构建 pLVX－AcGFP－E5、 pLVX－AcGFP－E6和pLVX－AcGFP－E7重组慢病毒载体，与包装质粒共转染293T细胞。收集3种慢病毒上清液，分别感染口腔上皮细胞、腺嘌呤素筛选感染细胞，RT－PCR 和 Western blot 法检测目的基因的表达。结果成功构建 pLVX－AcGFP－E5、pLVX－AcGFP－E6和 pLVX－AcGFP－E7重组慢病毒载体，获得3种慢病毒上清液，筛选得到3个稳定的细胞株。 RT－PCR 和 Western blot均可检测到 HPV16 E5、E6和 E7基因在口腔上皮细胞内表达。结论本研究构建的3个重组慢病毒载体能成功感染口腔上皮细胞。

口腔粘膜上皮细胞体外培养的研究

目的：探索口腔粘膜上皮细胞体外培养的技术和方法，为进一步采用组织工程技术构建口腔粘膜组织奠定基础，同时可为口腔粘膜的生理、药理、毒理学及微生态研究提供实验模型。方法：取刚离乳的雄性新西兰幼兔口腔粘膜组织小块，酶消化成单细胞悬液，接种后静置培养，定期换液、传代。以相差显微镜每日动态观察细胞形态变化及生长增殖情况，细胞进行常规组化染色、免疫组化染色及流式细胞仪检查，并以电镜观察其超微结构。结果：整个上皮细胞生长期内无成纤维细胞混杂生长，均为单一的上皮细胞，并证实为二倍体细胞。细胞可传11- 13代，成活50～60天。结论：新西兰幼兔口腔粘膜上皮细胞可在体外进行培养，在一定时间内保持增殖能力。这不仅为组织工程化口腔粘膜构建奠定了基础，而且为口腔粘膜的体外研究提供了实验模型。

放射线对口腔上皮细胞抗白色念珠菌感染能力的研究

目的：探讨X线对口腔上皮细胞抗白色念珠菌感染能力的影响。方法：采用不同剂量（1、3、5、7、9 Gy）的X线处理口腔上皮细胞，MTT法检测口腔上皮细胞的活性变化，制霉菌素法和荧光白染色技术检测侵染率、粘附率的变化。结果：MTT结果表明，随着X线剂量的增加口腔上皮细胞的活性逐渐降低（P＜0．05）；与正常对照组比较，白色念珠菌对9 GyX线预处理组的口腔上皮细胞的侵染率显著降低（P＜0．05）；与正常对照组比较，白色念珠菌对9 GyX线预处理组的口腔上皮细胞的粘附率显著升高（P＜0．05）。结论：随着X线照射剂量的增加，口腔上皮细胞活性逐渐降低，照射剂量为5 Gy时，口腔上皮细胞活性显著下降（P＜0．05）；X线照射口腔上皮细胞后对其抗白色念珠菌感染能力有显著影响。

苦参碱对白色念珠菌黏附人口腔黏膜上皮细胞的影响

目的:研究不同浓度苦参碱对白色念珠菌粘附人口腔黏膜上皮细胞的影响.方法:采用白色念珠菌标准菌株ATCC76615为研究对象,经不同浓度苦参碱预处理后以及不同浓度苦参碱干预下,在体外和人口腔黏膜上皮细胞相互作用,固定后经革兰氏染色,显微镜下计算粘附细胞数.结果:苦参碱预作用白色念珠菌后,可以减少其对人口腔黏膜上皮细胞的粘附数:苦参碱干预下白色念珠菌粘附人口腔黏膜上皮细胞数明显减少.结论:苦参碱可抑制白色念珠菌粘附人口腔黏膜上皮细胞.

白念珠菌感染口腔上皮细胞诱导炎症细胞因子的产生机制

目的 探讨白念珠菌感染口腔上皮细胞诱导炎症细胞因子的产生机制.方法 采用随机数字法将70只小鼠平均分为两组,每组包含35只受试小鼠,模型组建立小鼠口腔白念珠菌感染的体内模型,对照组不进行任何处理;感染5 d后比较两组受试小鼠菌落计数、炎症细胞因子表达水平以及TLR2、TLR4表达量.结果 感染5 d后,模型组受试小鼠的菌落数以及白斑面积评分均明显高于对照组,两组间差异具有统计学意义(P<0.05);模型组受试小鼠血清TNF-α、IL-6水平明显高于对照组,TGF-β水平明显低于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05);模型组受试小鼠TLR2、TLR4 mRNA扩增带相对吸光度值明显高于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05).结论 白念珠菌感染口腔上皮细胞后炎症细胞因子表达水平增加,其机制可能与感染白念珠菌后,其菌体作用于TLRs进而引起细胞内信号转导相关.

口腔中影响白色念珠菌粘附的因素

念珠菌粘附于宿主上皮细胞是其在宿主中集落形成及入侵体内的第一步。口腔内唾液、共生性细菌、细胞外基质及SIgA等均对白色念珠菌的粘附有影响。本文总结了这些影响因素的研究进展，提出了阻断白色念珠菌粘附口腔上皮细胞的措施。

以L929细胞为饲细胞的口腔粘膜上皮细胞体外培养

目的:探索口腔粘膜上皮细胞体外培养的技术和方法,为进一步采用组织工程技术构建口腔粘膜组织奠定基础.方法:取刚离乳的新西兰幼兔口腔粘膜组织小块,酶消化成单细胞悬液,接种后以L929细胞为饲细胞培养,定期换液、传代.以相差显微镜每天动态观察细胞形态变化及生长增殖情况,细胞进行常规HE染色、免疫组化染色及流式细胞仪检查,并以扫描电镜、透射电镜观察其超微结构.结果:整个上皮细胞生长期内无成纤维细胞混杂生长,均为单一的上皮细胞,并证实为二倍体细胞.细胞可传11～13代,成活50～60 d.结论:新西兰幼兔口腔粘膜上皮细胞可在体外进行培养,在一定时间内保持增殖能力.这不仅为组织工程化口腔粘膜构建奠定了基础,而且为口腔粘膜的体外研究提供了实验模型.

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激口腔上皮细胞白细胞介素-8的表达

目的 比较不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)刺激下口腔上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)的表达水平,初步探讨P:gingivalis致病性与其fimA基因型的关系.方法 P.gingivalis ATCC 33277(Ⅰ型fimA)、W83、47A-1(Ⅳ型fimA)和KB细胞ATCC CCL-17共同孵育24h,以未受刺激的KB细胞作为对照组,分别在1、3、6、24 h收集细胞和培养上清液.RT-PCR检测KB细胞胞IL-8mRNA的动态表达,酶联免疫反应检测培养上清液中IL-8的动态变化.结果 2种fimA基因型菌株刺激1h,KB细胞IL-8 mRNA的表达上调至峰值,高于对照组,3～24 h IL-8 mRNA的表达水平接近对照组;P.gingivalis感染细胞后3～24h,上清液中的IL-8水平低于对照组,Ⅳ型菌株低于Ⅰ型菌株;IL-8 mRNA及其蛋白表达不完全一致,提示IL-8的表达存在转录后水平的调节.结论 fimA基因型与口腔上皮细胞IL-8的表达水平相关,提示P.gingivalis致病性与其fimA基因型相关.

白色念珠菌对口腔上皮细胞细胞周期的影响

目的:研究白色念珠菌对口腔上皮细胞增殖及细胞周期的影响.从另一种角度证明白色念珠菌感染与癌发展的关系.方法:在培养的口腔上皮细胞(KB细胞)中,加入菌丝相、孢子相的白色念珠菌,共同培养48 h,采用流式细胞仪观察白色念珠菌对KB细胞增殖及细胞周期的影响.结果:与对照组相比,菌丝组G0/G1期细胞所占比例降低,S期、 G2/M期所占百分比显著升高,反映细胞增殖活力的增殖指数PI增高,差异有显著性(P＜0.05).而孢子组的KB细胞PI值与对照组相比无明显变化,P＞0.05.结论:白色念珠菌可引起KB细胞细胞周期的改变;白色念珠菌对KB细胞周期的改变有赖于该菌的毒性及对细胞的感染.