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角膜缘干细胞克隆化培养影响因素的研究
目的探讨丝裂霉素C处理Swiss-3T3成纤维细胞作为饲细胞的条件,了解兔角膜缘于细胞克隆化培养的增殖状况.设计对照实验研究.研究对象兔角膜缘干细胞单纯培养组,兔角膜缘干细胞与Swiss-3T3成纤维细胞作为饲细胞的混合培养组.方法采用DMEM/F12培养基进行细胞培养,观察4.0μμg/ml丝裂霉素C作用不同时间后3T3细胞数量的变化.DispaseⅡ酶消化兔角膜缘上皮细胞,与饲细胞混合接种,观察干细胞克隆形成情况,比较各代、各组的细胞克隆形成率(CFE).用EDTA去除饲细胞,间接免疫荧光染色检测角膜缘干细胞克隆团表达增殖细胞核抗原(PCNA)情况.主要指标细胞数/毫升,细胞克隆形成率.结果4.0μg/ml丝裂霉素C处理2.5小时的Swiss-3T3细胞,培养期间(约12日)细胞数量无明显变化,可作为饲细胞.与饲细胞共同培养的兔角膜缘干细胞形成细胞克隆团,细胞的平均CFE比较:有饲细胞组角膜缘干细胞明显高于无饲细胞组(t=2.982,P<0.01).兔角膜缘干细胞冻存复苏后平均CFE比较,有饲细胞组明显高于无饲细胞组(t=3.007,P<0.01).兔角膜缘干细胞克隆团中细胞PCNA染色为阳性.结论角膜缘干细胞与作为饲细胞的Swiss-3T3成纤维细胞共同培养形成细胞克隆,其中含有干细胞,且具有高增殖力.
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口腔粘膜上皮细胞体外培养的研究
目的：探索口腔粘膜上皮细胞体外培养的技术和方法，为进一步采用组织工程技术构建口腔粘膜组织奠定基础，同时可为口腔粘膜的生理、药理、毒理学及微生态研究提供实验模型。方法：取刚离乳的雄性新西兰幼兔口腔粘膜组织小块，酶消化成单细胞悬液，接种后静置培养，定期换液、传代。以相差显微镜每日动态观察细胞形态变化及生长增殖情况，细胞进行常规组化染色、免疫组化染色及流式细胞仪检查，并以电镜观察其超微结构。结果：整个上皮细胞生长期内无成纤维细胞混杂生长，均为单一的上皮细胞，并证实为二倍体细胞。细胞可传11- 13代，成活50～60天。结论：新西兰幼兔口腔粘膜上皮细胞可在体外进行培养，在一定时间内保持增殖能力。这不仅为组织工程化口腔粘膜构建奠定了基础，而且为口腔粘膜的体外研究提供了实验模型。
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以L929细胞为饲细胞的口腔粘膜上皮细胞体外培养
目的:探索口腔粘膜上皮细胞体外培养的技术和方法,为进一步采用组织工程技术构建口腔粘膜组织奠定基础.方法:取刚离乳的新西兰幼兔口腔粘膜组织小块,酶消化成单细胞悬液,接种后以L929细胞为饲细胞培养,定期换液、传代.以相差显微镜每天动态观察细胞形态变化及生长增殖情况,细胞进行常规HE染色、免疫组化染色及流式细胞仪检查,并以扫描电镜、透射电镜观察其超微结构.结果:整个上皮细胞生长期内无成纤维细胞混杂生长,均为单一的上皮细胞,并证实为二倍体细胞.细胞可传11～13代,成活50～60 d.结论:新西兰幼兔口腔粘膜上皮细胞可在体外进行培养,在一定时间内保持增殖能力.这不仅为组织工程化口腔粘膜构建奠定了基础,而且为口腔粘膜的体外研究提供了实验模型.
