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C1型尼曼-匹克氏症小鼠免疫系统功能异常初步研究
目的 探讨Npc1基因突变型(Npc1-/-)和野生型(Npc1+/+)小鼠免疫系统差异,从免疫学角度完善对C1型尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease type C1,NPC1)发病机制的研究,为人NPC1疾病的治疗提供重要支持.方法 分别测量不同时间节点Npc1-/-与Npc1+/+小鼠体重、胸腺及脾脏重量,计算胸腺与脾脏指数;血常规检测小鼠外周血白细胞数量;qPCR检测小鼠外周血白细胞细胞因子表达;流式细胞术检测小鼠外周血与脾脏中CD4+、CD8+和CD19+淋巴细胞比例;免疫荧光及β-半乳糖苷酶染色检测小鼠脾脏的凋亡与衰老.结果 与野生型小鼠相比,Day14±2时Npc1-/-小鼠脾脏和胸腺重量差异无统计学意义,Day42±2时,Npc1-/-小鼠脾脏重量显著增加,而胸腺重量却显著降低,至Day63±2时,脾脏重量显著降低;其次,Day42±2时Npc1-/-小鼠中性粒细胞数量的显著增加,淋巴细胞绝对数量虽与野生型小鼠相比差异无统计学意义,但所占百分比显著降低;其次,Day42±2时Npc1-/-小鼠血液白细胞中细胞因子(IL-1、IL-2、IFN-γ、TNFα、IL-4、GA及GB)的基因表达与野生型小鼠相比具有明显异常;进一步,流式细胞术检测发现,Day42±2时Npc1-/-小鼠无论在血液还是脾脏中,T(CD4+和CD8+)淋巴细胞数量较野生型小鼠显著减少,而B(CD19+)淋巴细胞却显著增多;终,通过对小鼠脾脏组织的凋亡和衰老染色发现,Day63±2时Npc1-/-小鼠脾脏细胞凋亡和衰老明显.结论 Npc1基因突变引起的脂质代谢异常,导致Npc1-/-小鼠在其生长过程中免疫系统及功能活性与野生型小鼠存在明显异常.该结果可为NPC1患者在临床上的用药与治疗提供借鉴,大限度地改善患者生活质量并延长患者生存时间.
关键词： C1型尼曼-匹克氏症 Npc1基因 免疫功能异常 衰老 -
C1型尼曼-匹克氏症小鼠嗅球胶质细胞的活性变化
本文观察Npc1基因突变对于小鼠嗅球神经胶质细胞活性的影响,探讨C1型尼曼-匹克氏症的病理机制.提取鼠尾基因组DNA,采用PCR检测基因型;采用免疫荧光组织化学染色观察出生后30 d的小鼠嗅球中小胶质细胞和星形胶质细胞的活性反应;采用免疫印迹方法检测嗅球中NeuN、神经丝蛋白(neurofilament,NF)、双皮质素(Doublecortin,DCX)、CD68和GFAP的蛋白表达情况.结果显示,Npc1基因突变导致小鼠嗅球中CD68和GFAP蛋白表达显著上调,小胶质细胞和星形胶质细胞的活性明显增强;磷酸化NF的表达也明显增加,而DCX的表达量显著下调.以上结果提示,Npc1基因突变在早期能够引起小鼠嗅球发生一些变化.
关键词： C1型尼曼-匹克氏症 嗅觉障碍 小胶质细胞 星形胶质细胞 神经胶质细胞
