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cGAS促进HTLV-1反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答
目的 探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(Cgas)在成人T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)的反转中间体诱导的固有免疫信号通路中的调控功能.方法 将HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫印迹试验检测Cgas在HeLa细胞中的表达变化;将Cgas表达质粒,转染入HeLa细胞,24 h后再转染入ssDNA90,real-time PCR试验检测HeLa细胞中干扰素(IFN)-β、干扰素诱导蛋白10(IP-10)、调节活化正常T细胞表达和趋化因子(RANTES)和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达,免疫印迹试验检测HeLa细胞中干扰素调节因子3(IRF3)和p65的磷酸化水平;采用 siRNA 的方法在 HeLa 和佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导分化的 THP1 (PMA-THP1)细胞中沉默Cgas的表达,24 h后再转染入ssDNA90,real-time PCR试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达,免疫印迹试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IRF3和p65的磷酸化水平.结果 ssDNA90转染后,HeLa细胞中 Cgas的表达升高;转染有Cgas表达质粒的HeLa细胞与对照组细胞相比,在ssDNA90刺激后,IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量增加,IRF3和p65的磷酸化水平升高;沉默Cgas表达的HeLa和PMA-THP1细胞与对照组细胞相比,在ssDNA90刺激后,IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量降低,IRF3和p65的磷酸化水平下降.结论 Cgas在HTLV-1的反转中间体 ssDNA90诱导的固有免疫应答中可能具有促进功能.
