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微生物来源的Aurora-B激酶抑制剂的分离、结构鉴定和抗肿瘤活性研究
目的 从微生物代谢产物中分离和纯化Aurora-B激酶抑制剂并检测其抗肿瘤活性.方法 以野生型酵母菌Y300和ipll-321温度敏感型突变株为模式菌跟踪活性组分;从阳性放线菌I07A-01038发酵产物中分离纯化活性化合物并进行结构鉴定:体外酶学实验验证阳性化合物对Aurora-B激酶的抑制活性;MTT法检测阳性化合物对肿瘤细胞增殖的抑制活性;AnnexinVFITC/Pl双染法检测活性化合物对肿瘤细胞早期凋亡的诱导作用.结果 从阳性放线菌I07A-01038发酵产物中得到活性化合物酒渣碱甲酯(flazin methyl ester),酒渣碱甲酯对ipll-321突变株具有特异性抑制作用,其在野生型酵母菌株Y300和突变株ipl1-321的ICso分别为48 jLmol/L和24 pmol/L:体外酶学实验证实其对Aurora-B激酶具有抑制作用,其IC_50为10 pmol/L(ATP = 50 pmol/L):酒渣碱甲酯对HepG2、A549、Hela肿瘤细胞均具有杀伤活性,IC_50分别为13、11和10 μmol/L.并能够诱导Hela细胞发生早期凋亡.结论 得到一个微生物来源的具有抗肿瘤活性的Aurora-B激酶抑制剂-酒渣碱甲酯.
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5-氮杂-2’-脱氧胞苷对多药耐药MCF-7/ADR和KBV/200细胞增殖及细胞周期影响作用机制的研究
目的:探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dC)对肿瘤多药耐药细胞生长抑制率、细胞周期的影响及可能的作用机制.方法:采用MTT法检测5-Aza-dC对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR、口腔表皮癌多药耐药细胞KBV/200及其相应的亲本敏感MCF-7和KB细胞的生长抑制率；FCM法检测不同浓度5-Aza-dC(1、5和10 μmol/L)作用72 h及5-Aza-dC (10 μmol/L)作用24、48和72 h后,各细胞周期分布的变化;分别采用实时荧光定量-PCR及蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白cyclinA、cyclin E和p21wif1/cip1 mRNA及蛋白的表达情况.结果:5-Aza-dC对耐药细胞株MCF-7/ADR及KBV/200均呈现明显的生长抑制作用,细胞周期被阻滞在G2/M期,并呈时间及剂量依赖性；细胞周期相关蛋白cyclin A、cyclin E和p21waf1/cip1 mRNA及蛋白的表达均上调.结论:5-Aza-dC可以通过使MCF-7/ADR及KBV/200细胞的细胞周期被阻滞在G2/M期,从而抑制肿瘤多药耐药细胞的增殖；其作用机制可能与上调细胞周期相关蛋白cyclin A、cyclin E和p21wif1/cip1的表达有关.
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塞来昔布和埃罗替尼对结肠癌细胞HT-29的协同抑制作用
目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂及环氧化酶-2（COX-2）抑制剂埃罗替尼、塞来昔布及二者联合用药对结肠癌细胞HT-29增殖的抑制作用及其机制。方法将HT-29细胞分为对照组（完全培养基）、塞来昔布组（220μmol/L）、埃罗替尼组（50μmol/L）及联合用药组（塞来昔布220μmol/L、埃罗替尼50μmol/L）四组，作相应处理后均在适宜条件下培养；48 h后采用MTT法观察细胞抑制率，Real-time PCR法及Western blotting法检测EGFR、COX-2 mRNA及蛋白表达情况，ELISA法检测前列腺素E2（PGE2）含量。结果48 h后塞来昔布组和埃罗替尼组对HT-29细胞抑制率分别为（56.6±4.3）％和（56.9±3.9）％，联合用药组抑制率为（86.1±7.1）％，与单独用药组比较，联合用药组对HT-29细胞增殖的抑制作用更明显，差异有统计学意义（P<0.05或0.01）；与对照组比较，埃罗替尼组、塞来昔布组均能降低HT-29细胞中COX-2及EGFR的mRNA及蛋白表达水平，也可降低HT-29细胞PGE2的分泌，且联合用药组效果较单一用药组更显著，差异均有统计学意义（P<0.01）。结论塞来昔布和埃罗替尼均能抑制结肠肿瘤的细胞生长，可同时阻断EGFR、COX-2信号通路，二者联合应用具有协同作用，其机制可能是抑制EGFR、COX-2的表达及PGE2的分泌。
