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TaqMan-MGB荧光探针法检测北京地区幽门螺杆菌gyrA基因第87位密码子和第91位密码子耐药突变
目的 采用TaqMan-MGB荧光探针法检测北京地区幽门螺杆菌喹诺酮类耐药位点gyrA基因第87位密码子和第91位密码子突变情况,比较与药敏试验和一代测序法的一致性.方法 收集北京大学第一医院消化内科门诊尿素酶试验阳性的患者252例,所有患者均使用MGB荧光探针法和一代测序法对喹诺酮类耐药位点gyrA基因第87位密码子和第91位密码子进行检测.其中158例患者同时进行药敏试验检测,同时分析耐药位点突变发生率与耐药表型的关系.结果 158例传统培养联合药敏法检测的标本中成功培养出85例,占53.8%,其中耐药型菌株40例,敏感型菌株42例.而MGB荧光探针法成功检出155例,占98.1%,其中野生型93例,突变型62例.在药敏试验检测出的85例阳性标本中,两种方法检出的符合率为94.1%.252例标本中,一代测序法成功检测出234例,占92.9%,其中野生型160例,突变型74例.在74例突变型标本中,含gyrA基因第87位密码子突变的标本占60.8%,含gyrA基因第91位密码子突变的标本占39.2%.MGB荧光探针法成功检测出250例,占99.2%,其中野生型161例,突变型89例.在89例突变组标本中,含gyrA基因第87位密码子突变的标本占64.0%,含gyrA基因第91位密码子突变的标本占36.0%.一代测序法和MGB荧光探针法在区分是否含有突变上的符合率为95.3%.结论 TaqMan-MGB荧光探针法可快速、敏感地检测患者胃黏膜标本中幽门螺杆菌喹诺酮类耐药位点gyrA基因第87位密码子和第91位密码子的突变情况,与药敏试验和一代测序法有较高的符合性.
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携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌对喹诺酮类耐药机制研究
目的：了解临床分离的携带blaKPC‐2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物的耐药机制，为临床治疗提供参考依据。方法在2008年11月－2009年7月从住院患者中分离19株携带 blaKPC‐2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌，采用聚合酶链反应（PCR）及序列分析的方法分析两种喹诺酮类药物作用靶位编码基因（gyrA、parC）和5种质粒介导的喹诺酮类耐药相关基因。结果19株携带 blaKPC‐2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌 gyrA和parC基因PCR扩增均阳性，1株（5．3％）aac（6′）‐Ⅰ b‐cr基因阳性，qnrA、qnrB、qnrS和qepA 基因均阴性；序列分析结果表明，19株 gyrA和parC基因均发生突变，分别导致 gyrA 基因喹诺酮耐药决定区（QRDR）出现两个位点错义突变，导致第83位丝氨酸（Ser）被异亮氨酸（Ile）取代、第87位天冬氨酸（Asp）被甘氨酸（Gly）取代，parC基因QRDR出现1个位点错义突变，导致第80位丝氨酸被异亮氨酸取代。结论染色体介导的耐药机制仍是临床分离的携带 blaKPC‐2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物耐药主要机制。
关键词： 肺炎克雷伯菌 喹诺酮类耐药 blaKPC-2型基因 -
临床分离大肠埃希菌质粒介导喹诺酮耐药基因和β内酰胺酶基因检测
目的 探讨大肠埃希菌临床分离株质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因的流行情况,及其与p内酰胺酶基因相关性.方法 收集2013年7-12月福建医科大学附属协和医院临床分离的对左氧氟沙星和/或环丙沙星耐药的大肠埃希菌200株,采用PCR检测qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6')-Ib-cr、qepA和oqxAB基因,对PMQR基因阳性菌株扩增常见β内酰胺酶基因;采用琼脂稀释法对PMQR基因阳性菌株进行药敏试验,以及PCR法对菌株进行系统发育分型;利用肠杆菌基因重复一致序列分析(ERIC-PCR)进行菌株同源性分析.结果 PCR扩增结果显示实验菌株PMQR阳性率为29.0％(58/200).其中qnr阳性率为5.5％ (11/200),aac(6')-b-cr阳性率为20.5％(41/200),oqxAB阳性率为8.0％(16/200),qepA阳性率为0.5％(1/200).58株PMQR基因阳性菌株中CTX-M-1组32株(55.2％)、CTX-M-9组17株(29.3％)和TEM型1株(1.7％),未检出SHV型β内酰胺酶基因.PMQR阳性菌呈现多重耐药现象;系统发育分型结果显示A型有21株(36.2％),D型17株(29.3％),B2型11株(19.0％),B1型9株(15.5％).ERIC-PCR显示PMQR大肠埃希菌可分为50个不同的型别,其中1株未能分型.结论 该院大肠埃希菌中PMQR基因以aac(6')-Ib-cr、qnr和oqxAB为主,且与β内酰胺酶耐药基因高度相关;此外PMQR菌株以非克隆播散方式在该院中流行.
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喹诺酮抗性决定区域位点突变诱导解脲脲原体耐喹诺酮类药物的系统评价
目的 系统性评价解脲脲原体(Uu)对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制.方法 信息检索PubMed、Web of Science、万方数据库和中国知网等数据库,检索时限均从2000年至2014年5月,查找研究Uu对喹诺酮类耐药机制的文献,按照纳入与排除标准筛选文献后,进行系统评价.结果 共纳入14篇文献,合计176株耐喹诺酮类Uu.统计分析结果显示,GyrA、yrB、ParC和ParE基因的突变率分别为65.3％、0.0％、62.8％和9.0％,共报道23种氨基酸改变.结论 Uu对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制以Gyr4、ParC基因或GyrA/ ParC双基因突变导致相应氨基酸改变为主,ParE介导的耐药较为少见,GyrB基因突变尚未发现.
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近期喹诺酮使用对前列腺穿刺后感染的影响
目的:分析B超引导下经直肠前列腺穿刺活检术预防感染措施对术后急性感染发生的影响,探讨目前预防感染措施的可能的不足之处.方法:对2009-2012年间在泌尿外科门诊及住院男性患者,共236例,进行前列腺穿刺活检.调查他们近期喹诺酮类使用史,糖尿病史、慢性便秘史、术前是否灌肠、术后急性感染发生率,对术后发生感染者的血、尿样本进行培养及药物敏感试验,对统计结果进行分析.结果:近期使用喹诺酮类抗生素的患者较近期未使用者在前列腺穿刺活检术后更容易发生急性感染(P=0.017),对喹诺酮类耐药的比例较高、糖尿病史、慢性便秘史、是否灌肠、先前穿刺史对前列腺穿刺活检术后发生急性感染无明显影响.结论:近期喹诺酮类使用史是前列腺穿刺活检术后急性感染的危险因素,目前前列腺穿刺预防使用抗生素方案可能需要改进.
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天津地区大肠埃希菌临床株质粒介导的喹诺酮类耐药机制的研究
目的 了解天津地区临床分离的大肠埃希菌中qnr,aac(6')-Ib-cr及gepA基因的流行情况,分析阳性菌株感染的微生物学及临床特征.方法 从天津某三甲医院收集环丙沙星耐药(CPLX,MIC 4gg/mL)的大肠埃希菌共75株,采用PCR法检测gnrA,gnrB,gnrS,aac(6')-Ib及gepA基因,对aac(6'),-Ib基因阳性菌株用Fok I酶切确认aac(6')-Ib-cr基因,接合试验验证qnr的转移性.所有阳性菌株用PCR法检测p-内酰胺酶基因,并收集阳性菌株感染患者临床资料进行分析.结果 75株环丙沙星耐药的大肠埃希菌中共有18株(24%)携带qnr基因和(或)aac(6)-Ib-cr基因,其中gnrB,gnrS和aac(6')-Ib-cr检出率分别为5.3%,4%和21.3%,未检出gnrA和gepA o 5株qnr阳性菌株均接合传递成功.18株gnr1aac(6')-1b-cr阳性的大肠埃希菌中均检测出R-内酸胺酶基因.阳性菌株对喹诺酮类和头孢菌素类药物高度耐药且主要来源于泌尿系感染,感染患者均为中老年人.结论 天津地区临床存在qnr和aac(6')-Ib-cr阳性菌株的流行,这是首次在天津发现qnr介导的喹诺酮类耐药.
