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CD48表达可作为区分造血干细胞分裂方式的活性标志
造血干细胞在细胞分裂时具有维持自我更新和产生定向分化的能力,其依赖于三种细胞分裂方式,一个干细胞产生两个新的干细胞(对称的更新分裂)、两个分化细胞(对称的分化分裂)或者一个干细胞和一个分化细胞(不对称分裂).本研究旨在探索一种高效、稳定的区分造血干细胞分裂方式的方法.前期研究表明,Numb蛋白的分布情况可以作为许多细胞辨别分裂方式的标志,本研究利用免疫荧光技术检测Numb蛋白在小鼠分裂期CD48-CD150+ LSK细胞中的分布情况,探索Numb蛋白与中心体的关系.由于CD48表达阳性标志着细胞失去了骨髓重建能力,因此本研究把CD48的表达作为区分造血干细胞自我更新或定向分化的一个活性标志.从小鼠全骨髓细胞中分选出CD48-CD150+ LSK细胞,培养体系中加入自行制备的AF 488-conjugated anti-CD48抗体,培养3d后共聚焦荧光显微镜观察及流式细胞分析是否存在AF488+细胞及其所占比例,然后二次分选AF488+和AF488-细胞进行细胞集落形成实验(colony forming cell assay,CFC)与细胞增殖能力比较.结果表明:Numb蛋白在处于分裂期的CD48-CD150+ LSK细胞中对称或不对称分布在细胞分裂平面两侧,这提示Numb蛋白染色可以作为一种区分造血干细胞分裂方式的方法.此外,CD48-CD150+ LSK细胞在含有自行制备的AF488-conjugatedanti-CD48抗体的培养体系中培养3d后产生约40％ AF488+细胞,共聚焦荧光显微镜统计的阳性细胞比例与流式细胞分析检测结果一致.二次分选AF488+和AF488-细胞,AF488+细胞群的集落形成能力显著高于AF488-细胞群(P＜0.05),AF488-细胞群的增殖能力显著高于AF488+细胞群(P＜0.05).结论:CD48表达作为细胞干性丢失的活性标志,可区分造血干细胞的分裂方式.该方法与Numb蛋白染色方法相比,具有用于活细胞的优势,它为后续的细胞培养与细胞移植等研究工作提供了更大的便利.
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辐射对EL-4、J774A.1细胞CD2、CD48表达的影响
目的通过时程及量效研究观察不同剂量X射线照射对EL-4和J774A.1细胞株中表面分子CD2、CD48的影响.方法采用荧光免疫流式细胞术检测蛋白表达的变化.结果 (1)EL-4细胞CD2分子表达结果显示,0.075 Gy X射线照射后CD2合成在照射后4 h即开始升高,至8～16 h达峰值(P＜0.05～0.01),2 Gy照射后则从照射后4 h开始下降,至8 h达低点(P<0.01),一直持续较低至48 h恢复;8 h量效结果显示,在低剂量区0.050,0.075 Gy使CD2表达上调,而高剂量范围中1,2 Gy使CD2表达下调.(2)J774A.1细胞CD48分子表达结果显示,0.075 Gy X射线照射后CD48合成在照射后2 h即开始升高,至4 h达峰值(P<0.05),随后急剧下降,8 h恢复至假照射水平,16～48 h下降明显低于假照射水平(P<0.05),2 Gy照射后则从照射后2 h开始下降,至8 h达低点(P<0.01),随后有所恢复,但直至48 h仍未能恢复至假照射水平.4 h量效结果显示,在低剂量区0.050,0.075,0.100 Gy使CD48表达上调,而高剂量范围中1～6 Gy均使CD48表达下调(P<0.05～0.01).结论 X射线照射可引起CD2、CD48不同的辐射效应,两者的相互作用体现出低剂量辐射具有不同于高剂量辐射的兴奋效应.
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低剂量X射线全身照射对小鼠IL-12和CD2、CD48表达的影响
目的检测低剂量辐射(LDR)对小鼠腹腔巨噬细胞IL-12的影响,同时观察胸腺细胞CD2及腹腔巨噬细胞表面分子CD48的变化并分析其与IL-12变化的关系.方法分别采用Northernblot和ELISA检测了0.075 Gy X射线全身照射后IL-12转录水平、蛋白水平的变化;采用荧光免疫流式细胞术检测CD2、CD48蛋白表达的变化.结果(1)IL-12的改变:0.075 Gy X射线全身照射后1 h巨噬细胞中IL-12、p35及p40亚基mRNA水平均迅速升高,分别达到假照组的131%和192%(P＜0.05),而后开始回降直至照后16～48 h恢复正常;巨噬细胞分泌IL-12在照后4～8 h明显增高(P＜0.05).(2)CD2、CD48表达变化:0.075 Gy X射线照射后4 h胸腺细胞CD2表达即开始升高,至8 h达峰值(P＜0.05～0.01);巨噬细胞CD48表达在照射后2 h开始升高,至48 h仍明显高于假照水平(P＜0.05～0.01);4 h量效结果显示,50,75,100和200 mGy 均使CD2、CD48表达上调(P＜0.05).结论LDR可引起IL-12表达上调,CD2、CD48分子与IL-12的变化具有一致性,提示两者可能参与IL-12的免疫调控.
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CD48在类风湿关节炎患者外周血CD8+T细胞上的表达及意义
目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者CD8+T细胞上CD48的表达及意义.方法 选择30例RA患者(RA组)和30名健康人(对照组),采用流式细胞仪测定两组外周血CD8+T细胞表面上CD48的平均荧光强度,分析RA患者CD48在CD8+T细胞上表达的临床意义.结果 RA组CD48+CD8+T细胞表面平均荧光强度明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).而两组CD48+CD4+T细胞的表面平均荧光强度差异无统计学意义.结论 RA患者CD8+T细胞上CD48的表达低于对照组,CD48的表达减低使抑制性T细胞减少可能在RA的发病过程中起作用.
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NZB和NZW小鼠脾淋巴细胞CD48和CD244分子表达及其基因多态性研究
目的:了解NZB小鼠中是否存在与其CD8+T细胞增殖相关的CD48和CD244分子表达异常及其机制.方法:利用流式细胞分析技术检测NZB和NZW小鼠脾淋巴细胞表面CD48和CD244分子的表达.利用DNA序列测定进行CD48和CD244基因多态性分析.结果:NZB小鼠活化的CD8+T细胞表面CD48和CD244分子表达水平均高于NZW小鼠.DNA序列分析显示CD48和CD244 cDNA序列在NZB和NZW小鼠间不存在多态性,但是NZB小鼠的CD48基因转录起始点上游-119 bp处存在5个碱基缺失.结论:NZB小鼠活化的脾淋巴细胞高水平表达CD48和CD244分子可能是其CD8+T细胞增生的原因之一.NZB CD48基因转录调控区域异常可能与其高水平表达CD48分子有关.
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人CD48基因转染细胞株的构建
目的 克隆人CD48基因,构建稳定表达CD48分子的基因转染细胞株.方法 提取人外周血单个核细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人CD48基因,将人CD48基因重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体,进而感染L929细胞,构建稳定表达人CD48分子的基因转染细胞株.结果 成功克隆人CD48基因和构建PGEZ/CD48逆转录病毒表达载体,进而成功获得稳定表达人CD48的基因转染细胞株L/CD48.结论 成功克隆了人CD48基因及其逆转录表达载体,并构建了稳定表达CD48分子的基因转染细胞株,为探讨CD48生物学功能的研究奠定了物质基础.
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高压芒刺静电场对小鼠胸腺细胞和腹腔巨噬细胞中CD2、CD48表达的影响
目的:通过时程/量效研究观察不同强度芒刺高压静电场对表面分子CD2、CD48表达的影响.材料和方法:采用不同强度芒刺高压静电场对小鼠进行全身辐射,荧光免疫流式细胞术检测小鼠胸腺细胞CD2蛋白和腹腔巨噬细胞CD48蛋白表达的变化.结果:剂量-效应结果显示,在10 kV～20 kV之间处理组的CD2、CD48表达量显著高于对照组(P＜0.01);在30 kV以上电压表达量明显低于对照组(P＜0.01);15 kV电压时间进程研究结果表明,CD2于处理后2 h表达开始增加,在4 h～8 h表达量达到高峰,与对照组比较差异显著(P＜0.001),24 h时表达量趋于恢复,接近对照组;CD48于处理后4 h开始增加,高峰出现在8 h,与对照组比较差异显著(P＜0.001),24 h时的表达量接近对照组;35 kV电压时间进程研究结果表明,CD2于处理后2 h表达量即达到低值,之后表达量逐步回升,但持续到24 h未能恢复到对照组水平;CD48表达量的下降晚于CD2,在4 h开始下降,低值出现在处理后8 h,其后逐步回升.结论:不同强度高压芒刺静电场可引起CD2、CD48表达量不同的生物效应,二者的相互作用在免疫调节反应中发挥重要功能.
