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单个人造血干细胞体外培养体系用于小分子化合物筛选
目的:探索一种高效且稳定验证小分子化合物对人造血干细胞(hHSC)调控作用的体系和方法.方法:用流式细胞术结合目前对hHSC表面标记的研究,优化hHSC分选过程,将干细胞培养精确至单个细胞水平,进而研究小分子化合物对细胞干性的影响.用已发表的对人HSC有扩增作用的小分子化合物SR1及UM171处理单个hHSC,14 d后进行细胞表型流式细胞术检测以及细胞涂片观察形态,同时利用CFC和CAFC验证培养后细胞造血功能的变化.结果:多细胞培养中2种小分子化合物及其组合作用与已知研究相符,并由此获得化合物使用浓度.多参数单细胞分选(CD34+ CD38-CD45RA-CD90+ CD49f+)及体外培养结果与多细胞培养结果一致,细胞形态分析结果与流式细胞术检测结果一致.此外,CFC和CAFC体外造血功能实验中,处理组细胞集落形成能力显著高于对照组(P<0.05).结论:建立了一个周期短且扩增作用稳定的单个hHSC体外培养体系和验证小分子化合物作用的方法,为小分子化合物筛选建立了可靠的平台并为以后的hHSC扩增研究打下基础.
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RNA干扰与高内涵筛选联合应用于药物研发的前景及其挑战
RNAi与高内涵筛选联合应用,可作为药物研发过程中大规模靶标筛选、候选靶标确证的重要方法,还可用于化合物的筛选及作用机制研究;在HCS技术平台上平行进行功能基因组学和化学遗传学研究可同时筛选靶标和先导化合物.RNAi与HCS联合应用在药物研发中显示显著优势的同时,也常被数据的捕获、管理、分析等技术挑战所限制,尤其是海量图像的自动分析,如细胞分界及细胞表型识别分类等.
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方剂学:药物相互作用网络与细胞分子信号动态转导网络的药物作用靶标
在以往的药物设计中,常用针对单一分子靶点的高特异性和高活性化合物筛选的策略(One gene,One protein,One drug),但愈益增多的研究表明,对于像肿瘤、糖尿病、炎症、高脂血症、老年性痴呆以及神经精神疾病这类设及到多基因、多蛋白质分子改变的疾病(例如,与人乳腺癌相关的突变基因就多达189个[1]),这一策略的有效性正日益受到挑战.
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059应用巯基化合物筛选产金β-内酰胺酶的革兰阴性细菌的简便方法