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EBV特异性细胞毒性T淋巴细胞体外诱导培养及杀伤效果鉴定
本研究旨在探讨EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(EBV-CTL)体外诱导和扩增培养的方法,并检测其特异性杀伤的效果.采集EBV血清抗体阳性的6例正常供体的外周血单个核细胞(PBMNC),用EBV转化的B淋巴细胞系(BLCL)作为抗原递呈细胞及抗原刺激剂,经辐照灭活后不断刺激培养自体PBMNC,诱导产生EBV-CTL,并将其扩增培养;采用流式细胞仪鉴定其免疫表型,然后检测不同效靶细胞比例条件下EBV-CTL对自体BLCL(autoBLCL)、自体植物血凝素培养的B淋巴母细胞(PHA-blast)、HLA不合供体的BLCL (alloBLCL)、K562细胞株的杀伤效果.结果表明,6例EBV血清抗体阳性正常供体来源的PBMNC在体外成功筛选并扩增培养了EBV-CTL,扩增效率为PBMNC数的18.6-55.0倍.刺激10次培养后的EBV-CTL对aumBLCL在20∶1、10∶1、5:1三种效靶细胞比例条件下特异性杀伤效率的平均值分别为59.4％、43.2％、29.0％;对PHA-blast、alloBLCL、K562的非特异性杀伤率在上述三种效靶细胞比例下平均值依次为7.1％、9.4％、10.3％ (P ＜0.05),6.6％、8.3％、8.1％(P＜0.05),5.4％、7.3％、6.3％(P＜0.05).结论:EBV-CTL能有效在体外筛选培养并扩增,并能有效杀伤HLA相合的BLCL,可望成为EBV相关性移植后淋巴细胞增殖性疾病的过继免疫治疗的有效方法.
关键词： EB病毒 特异性细胞毒性T淋巴细胞 移植后淋巴细胞增殖性疾病 -
PTD-HBcAg融合蛋白诱导特异性CTL抑制转基因小鼠HBV复制
目的:探讨经PTD-HBcAg融合蛋白体内诱导的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对HBV转基因小鼠病毒的抑制作用.方法:20只HBV转基因小鼠随机分组, 融合蛋白PTD-HBcAg及对照蛋白HBcAg经皮下免疫小鼠, 每周1次, 共3次. 流式细胞仪检测脾细胞中胞内细胞因子水平; 微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平; 荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA水平; 肝脏HE染色及免疫组织化学方法检测HBsAg表达.结果:PTD-HBcAg融合蛋白免疫转基因小鼠后, 能有效上调特异性CTL数量, 肝组织中炎性细胞的数量明显增多, 同时对小鼠血清中HBsAg及HBV DNA水平有明显的抑制作用.肝组织HBsAg免疫组织化学蛋白平均吸光度分析显示, 50 μg和100 μg PTD-HBcAg融合蛋白组中平均吸光度值与空白组和50 μg HBcAg组相比明显降低(127.77±4.92, 117.71±5.18vs 156.84±4.94, 138.70±5.92, 均P<0.05), 且组间比较差异有统计学意义.结论:PTD-HBcAg融合蛋白免疫HBV转基因小鼠后能增加特异性CTL数量, 显著降低血清中HBsAg及HBV DNA水平, 同时抑制肝脏中HBsAg的表达, 在HBV免疫治疗中具有抗病毒作用.
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细胞毒性T淋巴细胞在乙型肝炎中的作用研究
乙型肝炎病毒(HSV)感染后,决定病情严重程度及病程转归的一个主要因素是机体的免疫反应能力.由于患者体内抗病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在清除病毒方面发挥重要功能,CTL通过非细胞裂解机制控制HBV感染,本文就CTL在乙型肝炎中作用,针对HBV的主要组织相客性复合体Ⅰ类分子的CTL反应特异性,CTL的细胞效应机制以及慢性乙型肝炎患者HBV特异性CTL反应低下的原因等几方面的研究近况进行了综述.
关键词： 乙型肝炎 乙型肝炎病毒 特异性细胞毒性T淋巴细胞 穿孔素 -
丙型肝炎病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞功能的研究
目的 研究慢性丙型肝炎患者丙型肝炎病毒(HCV)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的功能及其与临床疾病状态的关系.方法 表达HCV核心蛋白的真核表达质粒pcDNA3.1-core通过Lipofecta-mineTM基因转染法转染HepG2细胞,经G418筛选获得稳定转染HepG2细胞(Hep-core),经Western blot证实有HCV核心蛋白表达;分离患者外周血单个核细胞,经体外诱导扩增获得HCV特异性CTL(HCV-CTL),以Hep-Core细胞和HepG2细胞作靶细胞,乳酸脱氢酶释放法检测HCV-CTL活性,用酶联免疫吸附法检测培养上清液中干扰素-γ(IFN-γ)含量,以正常人作为对照.结果 慢性丙型肝炎患者组HCV-CTL活性值为(23.9±4.8)%,明显低于对照组(42.6±6.5)%(t=7.22,P=0.011).高病毒载量组HCV-CTL活性值(18.9±4.8)%,明显低于低病毒载量组的(33.7±3.2)%(t:8.22,P=0.003);基因1型患者HCV-CTL活性值(20.8±2.1)%明显低于基因2或3型的(32.4±2.5)%(t=11.7,P=0.001);ALT升高患者HCV-CTL活性值(29.3±3.1)%与ALT正常患者(25.7±3.4)%相比无统计学差异(t=0.93,P＞0.05).慢性丙型肝炎患者培养上清液中的IFN-γ量(957±241)pg/ml明显低于对照组的(3117±673)pg/ml(t=8.87,P=0.001).结论 慢性丙型肝炎患者HCV-CTL活性降低,CTL的免疫功能低下与病毒水平和基因型相关而与ALT水平无关.
关键词： 丙型肝炎病毒 特异性细胞毒性T淋巴细胞 干扰素-γ -
不同化疗药物和特异性细胞对MCF-7细胞系中CD55high亚群杀伤作用的比较
目的 探讨化疗药物、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)、特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对乳腺癌MCF-7细胞CD55high亚群的杀伤效果.方法 用不同血药浓度的化疗药物多西他赛、表阿霉素和氟尿嘧啶杀伤乳腺癌MCF-7细胞；抽取人外周血诱导培养CIK细胞,杀伤CD55high细胞和CD55lo细胞；术中取患者腋下淋巴结体外诱导培养肿瘤特异性CTL,检测CTL对CD55high细胞和CD55low细胞体外杀伤活性,分析化疗药物、CIK细胞、特异性CTL对CD55high亚群细胞的杀伤效果.结果 多西他赛、表阿霉素和氟尿嘧啶对CD55high亚群细胞杀伤率明显低于其对MCF-7细胞杀伤率；CIK细胞CD55high亚群细胞杀伤率(42.72±4.36)％；特异性CTL对CD55high、CD55low和MCF-7细胞杀伤率分别为(52.86±4.45)％、(22.41±2.83)％、(21.67±4.15)％,CD55high组明显高于CD55low和MCF-7组细胞的杀伤率(P＜0.01).特异性CTL组与CIK细胞组和多西他赛(0.4μg/mL)组3组比较,有显著性差异(P＜0.01).结论 特异性CTL对CD55high细胞具有特异性杀伤效果.
关键词： 乳腺癌 CD55high细胞 化疗药物 CIK 特异性细胞毒性T淋巴细胞 -
丙型肝炎病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞功能分析
目的:研究丙型肝炎患者丙型肝炎病毒(HCV)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的功能.方法:将表达丙型肝炎病毒核心蛋白的真核表达质粒通过基因转染法转染HepG2细胞,并通过筛选获得稳定的转染Hep-Core细胞,使用蛋白质印迹法检测证实有HCV核心蛋白表达;分离患者外周血中的单个核细胞,经体外诱导扩增后得到HCV特异性CTL(HCV-CTL),以Hep-Core细胞和HepG2细胞作为靶细胞,运用乳酸脱氢酶释放法检测HCV-CTL的活性,用酶联免疫吸附法检测培养上清液中干扰素-γ(IFN-γ)的含量,选择10例正常人作为对照组.结果:丙型肝炎组患者HCV-CTL活性为(24.1±4.6)％,正常对照组为(43.2±6.1)％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).丙型肝炎组患者靶细胞培养上清液中IFN-γ的浓度为(961±239) pg/ml,正常对照组为(3125±676) pg/ml,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:慢性丙型肝炎患者HCV-CTL活性降低,CTL的免疫功能低下与病毒水平和基因型有一定关系.
关键词： 丙型肝炎病毒 特异性细胞毒性T淋巴细胞 功能
