首页 > 文献资料
-
PAX5基因在成人急性淋巴细胞白血病中的突变和表达特征研究
PAX5是paired-box (PAX)家族重要转录因子.本研究旨在深入探究PAX5基因在成人急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)中的突变、表达特征及其临床意义.应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、基因组PCR、克隆和测序技术等检测101例成人ALL患者PAX5基因片段缺失、PAX5基因外显子(exon)2-10的突变;采用定量PCR方法检测PAX5基因表达特征;并研究PAX5突变和表达与临床特征、实验室指标的相关性及其预后意义.结果显示,本组成人ALL患者PAX5突变率7.9％,均发生于B-ALL;共发现PAX5突变类型9种(缺失突变4种、点突变4种和插入突变1种);PAX5突变组年龄≥50岁患者数显著多于无突变组(62.5％ vs 21.5％)(P=0.031);PAX5高表达与低表达组之间的B细胞亚型、初诊血小板计数和免疫表型有显著统计学差异(P＜0.05);首次诱导治疗完全缓解率在PAX5高表达组高于低表达组(86.7％ vs 62.5％)(P =0.030),6个月总生存率PAX5高表达组高于低表达组(75.0％ vs 50.0％)(P =0.034).结论:PAX5基因在成人B-ALL患者中存在缺失、插入和点突变等多种类型突变和异常表达,并与临床参数相关联,具有重要的临床意义.
-
转录因子Pax5可不依赖与启动子结合促进B细胞淋巴瘤生长
目的:研究B淋巴细胞转录因子Pax5是否可以经过不依赖与启动子直接结合方式控制B细胞淋巴瘤的生长.方法:将可以产生各种突变型pax5并带GFP荧光的逆转录病毒感染小鼠淋巴瘤细胞系myc3和38B9,48 h后应用流式细胞术检测GFP+淋巴瘤细胞的比例,然后将GFP+和GFP-淋巴瘤细胞一起继续培养或皮下移植至小鼠体内生长,体外每隔3d或体内成瘤后重新检测GFP+细胞比例并确定其细胞周期参数和凋亡细胞的数量.结果:与正常对照组(migR-GFP,空载体)相比,突变型Pax5 mt 1-357及缺乏DNA结合功能的突变型Pax5 mt 304-358和野生型Pax5一样均能明显增加GFP+细胞比例(P＜0.01),且S及G2/M期GFP+肿瘤细胞明显增多(P＜0.01),但只有DNA结合功能的Pax5 mt 1-143与空载体对照一样无法使GFP+细胞比例增加(P＞0.05),细胞周期也无明显改变(P＞0.05).结论:Pax5可以经过不依赖与起动子直接结合方式促进B细胞淋巴瘤在体内体外的生长,其主要功能是加速肿瘤细胞分裂而不是降低细胞凋亡.本研究为以Pax5蛋白特定区域作为治疗B细胞淋巴瘤新靶点提供了理论依据.
-
转录因子PAX5在儿童急性白血病细胞中的表达
为了观察了解儿童急性白血病细胞中转录因子PAX5的表达特性,采用实时定量RT-PCR方法测定了6个血液肿瘤细胞株以及6例正常儿童、58例初发和4例复发急性白血病儿童(其中包括39例B-ALL,10例T-ALL和13例AML)骨髓细胞中PAX5和CD19 mRNA的表达水平.结果表明:在Namalwa(B细胞系)细胞株中,PAX5和CD19 mRNA相对表达量分别为2.35%和2.52%;而在T-和髓系细胞株中几乎不表达.在临床样本中B-ALL组比T-ALL组和AML组的PAX5 mRNA表达高(P=0.029和P=0.013).T-ALL组和AML组的PAX5mRNA表达水平均低于正常对照组,而T-ALL组与AML组之间的表达差异无显著意义.在B-ALL患儿中,PAX5 mRNA表达的个体差异很大.此外还发现,初发治疗前组和复发组的B-ALL患儿PAX5 mRNA表达高于化疗完全缓解组(P=0.011和P=0.006).由于在CD19基因的启动子上有B细胞特异性激活蛋白的结合位点,研究发现在B-ALL中PAX5表达水平与同样用实时定量RT-PCR检测的CD19表达水平之间存在明显的相关性.结论:运用实时定量RT-PCR方法能快速准确地在B-ALL的临床标本中检测和定量PAX5基因的表达.研究中发现部分B-ALL中PAX5 mRNA表达明显升高,因此它可将其作为进一步研究B-ALL发病机理的另一个切入点.
-
RNAi阻断pax5基因的表达对B系恶性淋巴瘤细胞生物学特性的影响
本研究目的在于了解pax5基因对B系血液肿瘤细胞的免疫表型、细胞增殖及凋亡等生物学特性的影响.应用体外转录RNAi方法合成pax5特异的shRNA,用实时荧光定量PCR和Western blot技术评价基因沉默效果、筛选有效的shRNA,利用流式细胞术、MTT实验以及real-time PCR等技术检测沉默前后细胞免疫表型、增殖、凋亡等变化.结果表明:应用体外转录RNAi方法合成的shRNA抑制了B系恶性淋巴瘤细胞株中pax5在mRNA和蛋白水平的表达;pax5阻断表达后的淋巴瘤细胞免疫表型发生了变化,信号分子CD19的mRNA和蛋白表达水平均相应降低,而细胞膜表面分子IgM未发生明显改变;pax5的沉默表达对淋巴瘤细胞增殖效率和凋亡的影响无显著性差异(p＞0.05).结论:pax5基因对B细胞的晚期分化起着重要作用,pax5基因可能参与淋巴瘤细胞的信号转导,未检测到pax5瞬时缺失表达对淋巴瘤细胞生长增殖及凋亡的影响,对其机制有必要进一步深入研究.
-
Pax5在B淋巴细胞中的表达及意义
转录因子pax5在造血原始细胞定向分化到B细胞谱系的过程中起着重要作用.在整个B细胞发育过程中需要pax5表达以加强其定向分化,若pax5失活可导致成熟B细胞去分化至原始细胞阶段,从而具有多谱系分化潜能,可导致白血病发生.人类急性淋巴细胞白血病中pax5基因突变是常见的遗传病变之一.
-
实时荧光定量RT-PCR检测血液肿瘤细胞株PAX5 mRNA表达
目的建立实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测6个血液肿瘤细胞株中PAX5和CD19的mRNA相对表达量.方法一系列稀释的反转录自NAMALWA细胞株总RNA的cDNA被用于构建PAX5、CD19和GAPDH扩增的标准曲线.实验证实靶基因(PAX5和CD19)与管家基因(GAPDH)的扩增效率一致,因此可以用比较循环数(Ct)法对PAX5和CD19的表达进行相对定量.结果在NAMALWA(B细胞系)细胞株中,PAX5和CD19 mRNA相对表达量分别为2.35%和2.52%;而在其他T细胞和髓系细胞株中几乎不表达.结论本研究中所建立的实时定量RT-PCR能简单、快速、方便地对PAX5和CD19 mRNA表达水平进行定量,且适用于对大量、不同种血液恶性肿瘤患者进行观察研究.
关键词： 实时逆转录聚合酶链反应 PAX5 血液肿瘤细胞株 -
Pax5在早期B细胞定向分化发育中的作用
B细胞的定向分化是多个转录因子参与的复杂调控过程,其中Pax5基因编码的B细胞特异性激活蛋白(BSAP)在B细胞的早期定向分化中起着决定性作用.本文着重从Pax5激活多个B系特异性基因、抑制非B系基因的表达和Pax5-/-pro-B细胞的多向分化潜能等方面,综述Pax5在B细胞早期定向分化中的作用.
关键词： PAX5 B细胞特异性激活蛋白 B淋巴细胞 分化 -
PAX5缺失对于儿童无特殊重现染色体异常B系急性淋巴细胞白血病的预后意义
目的：初步了解PAX5缺失在无特殊重现染色体异常的B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL）患儿中的发生情况，并进一步分析PAX5基因缺失与ALL预后的相关性。方法用多重连接探针扩增（MLPA)技术检测2008年4月至2013年4月初诊无特殊重现染色体异常的B-ALL患儿及对照组（同期非血液系统疾病及肿瘤儿童）的PAX5基因拷贝数情况。根据有无PAX5基因缺失分为缺失组和非缺失组。结果86例患儿中18例（21%）发生了PAX5缺失。缺失组初诊时白细胞总数明显高于非缺失组（P=0.001）。Kaplan-Meier法分析显示：缺失组无病生存（DFS）率明显低于非缺失组（0.69±0.12 vs 0.90±0.04，P=0.017），但两组患儿的总生存（OS）率差异无统计学意义（P=0.128）。Cox法分析显示，PAX5缺失为影响DFS的不利因素（P=0.03）。结论 PAX5缺失为无特殊重现染色体异常B-ALL患儿DFS的独立危险因素。
关键词： PAX5 B-急性淋巴细胞白血病 多重连接探针扩增 预后 儿童 -
B细胞特异激活蛋白基因Pax5原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究
目的 克隆人B细胞特异激活蛋白基因Pax5,并实现Pax5的原核表达、纯化及多克隆抗体制备.方法 从人淋巴瘤细胞株Raji提取总RNA,用RT-PCR扩增Pax5基因片段,克隆至pMD19-T载体,双酶切及基因测序鉴定后,再定向插入原核表达载体pET28a中,并转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达目的 蛋白,进行SDS-PAGE分析,纯化后进行Western b1ot分析,用原核表达蛋白制备兔抗Pax5抗血清.利用免疫荧光染色法观察Raji细胞中的Pax5表达情况.结果 克隆得到的目的 基因片段大小与预期相符,测序结果 与GenBank中报道的序列完全一致,成功构建了重组表达质粒pET28a-Pax5,并获得目的 蛋白.Western blot检测原核表达Pax5蛋白相对分子质量约为42 000,经镍离子金属螯合柱纯化后,纯度达95%以上.兔抗Pax5抗血清ELISA效价可达1:256 000.免疫荧光染色结果 显示Raji细胞中Pax5高表达.结论 本研究在原核系统中成功表达了Pax5重组蛋白,并制备多克隆抗体,为开发B淋巴细胞白血病诊断试剂盒提供了实验数据.
-
E2A、EBF和PAX5在早期B细胞分化发育中的作用
早期B细胞分化发育受到各种转录因子调控,别是转录因子E2A、早期B细胞因子(EBF)及PAX5的调控尤为重要.一本文以E2A、EBF与PAX5三个转录因子为综述对象,一阐述其在早期B细胞分化发育中的作用,对3个转录因子在早期B细胞分化发育中的协同作用进行了综述.本文将为"B淋巴细胞分化发育调控机理研究"提供参考.
-
PAX5表达对神经内分泌肿瘤临床病理特征和预后的影响研究
目的：探讨 PAX5表达与神经内分泌肿瘤临床病理特征和预后的关系。方法收集神经内分泌肿瘤病例的临床资料和石蜡包埋的档案肿瘤组织，用免疫组化染色检测 PAX5的表达，随访研究病例，分析 PAX5表达与神经内分泌肿瘤临床病理特征和预后的关系。结果 PAX5的总阳性表达率为50％；PAX5表达在不同部位的NEN 中有明显差异，以肺 NEN 的阳性表达率高（68．2％）；PAX5表达在神经内分泌癌（NEC）与神经内分泌瘤（NET）病例之间、早期（Ⅰ期和Ⅱ期）与晚期（Ⅲ期和Ⅳ期）病例之间、淋巴结转移与无转移病例之间差异有统计学意义（P ＜0．05）。在晚期临床分期、NEC 病例和伴有淋巴结转移的 NEN 中 PAX5表达明显增多。生存分析：NENs 的获访率98．2％（55／56），多因素 Cox-Regression 分析发现肿瘤分级（P ＝0．003）、分期（P ＝0．049）、部位（P＝0．000）、淋巴结转移（P ＝0．014）、PAX5（P ＝0．015）是神经内分泌肿瘤患者预后的独立影响因素。PAX5阳性与阴性表达的 NEN 病例的生存状况差异有统计学意义（P ＜0．05），阳性表达病例的生存状况较差。结论 PAX5阳性表达对 NENs 的临床病理特征有一定影响，可能是 NEN 不良预后的相关因子。
