首页 > 文献资料
-
基于SSUrRNA基因序列的间日疟原虫LAMP检测技术的建立
目的:克隆分析间日疟原虫小亚基亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)特异性基因序列,建立间日疟原虫环介导等温扩增(LAMP)检测技术.方法:针对间日疟原虫SSUrRNA种特异性基因序列设计1对引物,采用聚合酶链反应(PCR)从血样核酸提取物中扩增SSUrRNA基因片段,纯化后与pGEM-Teasy载体连接,构建重组质粒并转化大肠埃希菌JM109,PCR与双酶切鉴定筛选阳性克隆并测序,设计6条寡核苷酸片段,LAMP检测感染血样中间日疟原虫DNA,扩增产物作琼脂糖电泳分析或直接荧光染色肉眼观察.结果:问日疟原虫SSUrRNA基因扩增片段大小约为235 bp;阳性克隆重组质粒插入的SSUrRNA基因扩增片段含有235个核苷酸,与GenBank中的Sal-1株、Belem株间日疟原虫相同序列进行比对,同源性为100%,与PV2008/TR/DEL株、PVK1294株、El Salvador株的同源性均为99%,与三日疟原虫、卵形疟原虫及恶性疟原虫的序列同源性均低于95%,将含有SSUrRNA靶基因的重组质粒以蒸馏水倍比稀释后做LAMP,试验的灵敏度为10copy/μl;特异性检验显示间疟原虫患者血样DNA呈阳性反应,恶性疟原虫、弓形虫、日本血吸虫、华支睾吸虫感染者及正常人血DNA为阴性.结论:扩增、克隆的间日原虫SSUrRNA基因序列不同地理株间同源性高,以其为靶基因建立的间日疟原虫LAMP检测技术灵敏度高、特异性好,且无需昂贵的仪器设备,具有推广应用价值.
-
23S rRNA基因在常见病原菌鉴定中的应用
目的建立基于23S rRNA基因的一种常见病原菌菌种鉴定的分子生物学方法. 方法使用地高辛标记的通用引物扩增常见病原菌的23S rRNA基因,并在尼龙膜上固定根据扩增产物序列设计的菌种特异性探针,根据反向杂交结果判断病原菌种类.选取临床分离获得的菌株验证该方法的有效性.结果通用引物可特异性扩增细菌23S rRNA.应用该方法可鉴定金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、绿脓假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌.检测临床标本结果显示,与常规培养方法的符合率为99%.结论该方法可用于常见病原菌的鉴定.
-
服用5-羟色胺能精神病药物的患者应用利奈唑胺可致严重中枢神经系统反应
美国食品和药品管理局(FDA)于2011年7月26日发布药物安全警告:服用5-羟色胺能精神病药物(serotonergic psychiatric medications)的患者应用利奈唑胺(linezolid)可能导致严重的中枢神经系统反应[1].FDA同时也发布了该类患者应用亚甲蓝有相似风险的安全警告.利奈唑胺为唑烷酮类抗生素,通过选择性结合到50S亚单位的23S核糖体核糖核酸上的位点而抑制细菌核糖体的翻译过程,防止形成包含70S核糖体亚单位的起始复合物,用于治疗各种感染,包括肺炎、皮肤感染、耐药菌(如屎肠球菌)感染.FDA已收到服用5-羟色胺能精神病药物的患者应用利奈唑胺引发严重中枢神经系统不良反应——5-羟色胺综合征的报告,包括死亡病例报告.5-羟色胺综合征主要表现为精神改变(如意识模糊,活动过度,记忆障碍)、肌肉痉挛、多汗、震颤、腹泻、共济失调和(或)发热,其发病机制尚不明确,可能为利奈唑胺可逆性非选择性抑制单胺氧化酶,进而抑制5-羟色胺的代谢,导致脑中5-羟色胺浓度增高,引发毒性反应.
-
基因检测在新生儿脓毒症早期诊断中的价值
目的 分析16S rRNA基因检测在新生儿脓毒症早期诊断中的临床价值,探讨快速、可靠地诊断该症的试验方法.方法在16S rRNA基因保守区选择一对通用引物,收集临床常见的致病菌株37株,提取细菌DNA并进行PCR检测,采用琼脂糖凝胶电泳法观察扩增结果,同时对该引物的灵敏性及特异性进行检验.对106例临床疑诊为脓毒症的新生儿于入院24 h内,在严格无菌条件下采集血标本,提取DNA进行PCR扩增,同时行血培养、血常规检查及CRP及ESR水平检测,并与同期住院的20例非感染性疾病患儿进行比较.结果 PCR检测细菌DNA均得到预期的约371 bp大小的扩增产物,该引物仅扩增细菌DNA,与病毒及人基因组DNA无交叉反应,其扩增下限为104CFU·L-1的大肠埃希菌.106例疑诊为脓毒症的患儿,血培养阳性15例,PCR检测阳性36例,PCR的阳性检出率显著高于血培养(P<0.005),20例非感染组患儿PCR结果均为阴性.依据新生儿脓毒症诊断标准,PCR的敏感性、特异性及诊断指数分别为82.93%、96.92%和179.85,优于血培养及5项非特异指标至少2项异常的诊断方法.PCR方法6～8 h即能检测出结果,改良核酸提取技术可以将检测时间缩短至4～6 h.结论 PCR方法检测细菌16S rDNA能迅速判断临床标本中是否存在细菌,对于早期诊断新生儿脓毒症具有较高的敏感性及特异性.
