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新型结核病疫苗菌株在小鼠体内的毒性及安全性研究
目的 观察由卡介苗(简称BCG)和结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra(简称H37Ra菌株)为亲本菌株构建的融合菌株(简称B/R菌株)接种C57BL/6小鼠后在小鼠体内的毒性及其安全性. 方法 将204只C57BL/6小鼠随机分为生理盐水组(36只)、BCG组(56只)、B/R组(56只)和H37Ra组(56只);分别皮内接种无菌生理盐水、BCG菌悬液、B/R菌株菌悬液、H37Ra菌株菌悬液0.1 ml(含活菌数为1.0×106个),观察各组小鼠生存基本情况并记录接种后第3、6、9、12、15、18周小鼠体重;分别于接种后第2、3、6、9、12周取BCG组、B/R组、H37Ra组小鼠各4只,处死后摘取小鼠完整肺脏和脾脏称重后分别制成脏器组织匀浆,接种于罗氏培养基培养20 d,计数各脏器菌落数(CFU);分别于接种后第3、6、9、12、15、18周,四组分别随机各取6只小鼠,脱颈处死后称取体重,摘取小鼠肺脏及脾脏在组织固定液中固定(固定前脾脏称重),48 h后制作病理切片,HE染色后观察小鼠肺脏、脾脏的病理变化,并计算各组小鼠各时间点的脾脏系数. 结果 (1)4组小鼠接种后一般生存状态良好,接种部位未出现明显溃疡、脓疱等.从接种后第1 d～18周各组小鼠均无死亡,生存率为100％.接种后第3周、6周,四组之间小鼠体重相比差异无统计学意义(P＞0.05),接种后第9周、15周,H37Ra组小鼠体重低于生理盐水组(P＜0.05),接种后第12周,BCG组小鼠体重低于生理盐水组(P＜0.05),接种后第18周,H37Ra组小鼠体重分别与生理盐水组、BCG组、B/R组相比均降低(P＜0.05);(2)接种后第2周、3周、6周时小鼠脾脏定植细菌数(Log10 cfu),H37Ra组、B/R组均较BCG组升高(P＜0.05);B/R组与H37Ra组比较差异无统计学意义(P＞0.05).接种后第9周小鼠脾脏定植菌数(Log10cfu),H37Ra组较BCG组升高(P＜0.05),B/R组分别与H37Ra组、BCG组相比差异无统计学意义(P＞0.05).接种后第12周小鼠脾脏定植细菌数(Log10cfu),H37Ra组、B/R组均较BCG组升高(P＜0.05),B/R组较H37Ra组降低(P＜0.05).(3)在接种后第2周小鼠肺脏定植菌数(Log10cfu),B/R组较BCG组升高(P＜0.05);B/R组、BCG组分别于H37Ra组相比差异无统计学意义(P＞0.05).接种后第3周三组小鼠肺脏定植菌数(Log10cfu)之间相比差异无统计学意义(P＞0.05);接种后第6周小鼠肺脏定植菌数(Log10 cfu),H37Ra组较BCG组升高(P＜0.05),B/R组分别与H37Ra组、BCG组相比差异无统计学意义(P＞0.05);接种后第9周小鼠肺脏定植菌数(Log10cfu),H37Ra组较BCG组升高(P＜0.05);B/R组较H37Ra组降低(P＜0.05),B/R组与BCG组相比差异无统计学意义(P＞0.05);接种后第12周小鼠肺脏定植菌数(Log10 cfu),B/R组、H37Ra组均较BCG组升高(P＜0.05),B/R组与H37Ra组相比差异无统计学意义(P＞0.05);(4)各时间点生理盐水组小鼠肺脏、脾脏均呈现正常病理征象.接种后第3～18周BCG组、H37Ra组及B/R组小鼠肺脏均表现出不同程度的炎细胞浸润和气道上皮细胞局部脱失,肺泡间隔增宽,部分肺间质水肿,但肺泡腔无改变,均未出现结核结节,第3～18周BCG组、H37Ra组和B/R组小鼠脾脏均有不同程度白髓比例升高,淋巴小结体积增大,动脉周围淋巴鞘增厚;红髓扩张淤血,巨噬细胞增多等改变;(5)接种后第3周、6周小鼠脾脏系数,BCG组、H37Ra组及B/R组均较生理盐水组明显升高(P＜0.05);接种后第9周小鼠脾脏系数,H37Ra组及B/R组均较生理盐水组明显升高(P＜0.05),BCG组与生理盐水组相比差异无统计学意义(P＞0.05),接种后第12周小鼠脾脏系数,H37Ra组较生理盐水组显著升高(P＜0.01),B/R组较生理盐水组升高(P＜0.05);BCG组较H37Ra组降低(P＜0.05).接种后第15周、18周四组小鼠脾脏系数之间比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 B/R菌株的毒性较H37Ra菌株降低,与卡介苗相当,其使用安全性较好.
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新型结核病疫苗融合菌株制备及其免疫学特性的研究
目的 观察由卡介苗(BCG)与结核分枝杆菌国际标准弱毒株H37Ra(H37Ra菌株)构建的融合菌株(B/R菌株)生长特性及其在免疫小鼠体内的生长情况. 方法 分别测定用7H9培养基培养3、6、9、12、15、18、21、24、27和30d的B/R菌株、BCG和H37Ra菌液在波长600 nm处的A值,以时间为横坐标,A600值为纵坐标,绘制细菌生长曲线.将C57BL/6小鼠随机分为B/R菌株、BCG和H37Ra菌株3组,每组30只,分别皮下接种B/R、BCG和H37Ra菌液0.1ml(含活菌数为1.0×106个),免疫15、30、45、60和75 d后无菌条件下取小鼠肝脏、脾脏和肺脏,制成脏器组织匀浆,接种罗氏固体培养基斜面,培养20 d后计数各脏器菌落数(Log10cfu). 结果 细菌生长曲线显示,B/R菌株的适应调整期较长,6d后进入生长对数期,27 d后进入稳定期,生长周期约30 d左右.免疫15、30、45、60和75 d小鼠肝脏、脾脏、肺脏定植细菌数(Log10cfu)B/R菌株组高于BCG和H37Ra菌株组.小鼠肝脏定植细菌数(Log10cfu) B/R菌株组与BCG和H37Ra菌株组比较差异无统计学意义(P＞0.05);免疫15、60及75 d小鼠脾脏定植细菌数(Log 10cfu)B/R菌株组与BCG和H37Ra菌株组比较差异有统计学意义(P＜0.05),免疫30和45 d小鼠脾脏定植细菌数(Log1 0cfu) B/R菌株组与BCG组比较差异有统计学意义(P＜0.05),与H37Ra菌株组比较差异无统计学意义(P＞0.05);免疫15和45 d小鼠肺脏定植的细菌数(Log10cfu) B/R菌株组与BCG和H37Ra菌株组比较差异有统计学意义(P＜0.05),免疫30、60和75d小鼠肺脏定植细菌数(Log10cfu)B/R菌株组与BCG组比较差异有统计学意义(P＜0.05),与H37Ra菌株组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 B/R菌株的生长周期为30 d,在小鼠体内至少存活2个月,定植能力较强.
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结核分枝杆菌基因组单核苷酸多态性研究进展
目前,随着结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tuberculosis)H37Rv、CDC1551、H37Ra、F11和KZN 1435等菌株全基因组测序工作的完成,以及新一代核酸测序技术的飞速发展,使得结核分枝杆菌研究进入新阶段,即可以从基因组水平对其进行更深入的研究[1～3].
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活菌H37Ra与灭活菌H37Rv感染小鼠腹腔巨噬细胞的实验研究
目的:探讨小鼠腹腔接种结核分枝杆菌活菌H37Ra、灭活菌H37Rv后,诱导巨噬细胞免疫物质的表达差异,探讨活菌H37Ra及灭活菌H37Rv作为新的结核候选疫苗的可行性.方法:分别培养BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,用活菌H37Ra,灭活菌H37Rv感染10小时后用抗酸染色方法,观察各组巨噬细胞吞噬情况并计算吞噬率.将活菌H37Ra、灭活菌H37Rv、生理盐水分别接种BALB/c小鼠腹腔,免疫30天后取小鼠腹腔巨噬细胞,RT-PCR法检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-12P40、TNF-α、IFN-γ的基因转录水平;ELISA法检测细胞因子IL-12P40、TNF-α、IFN-γ的表达;Griess法、化学法检测小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO、H2O2水平;流式细胞仪检测IFN-γ诱导的CD40L的变化情况.结果:巨噬细胞对活菌H37Ra和灭活菌H37Rv的吞噬率分别为(55.71±8.42)%、(14.82±2.12)%.与灭活菌相比,活菌H37Ra有更强的被吞噬能力(P＜0.01).活菌H37Ra免疫小鼠腹腔巨噬细胞后能显著诱导巨噬细胞的IL-12P40、TNF及IFN-γ基因的转录;细胞因子IL-12P40、TNF-α、IFN-γ、NO及H2O2高水平分泌;同时活菌H37Ra刺激IFN-γ诱导的巨噬细胞表面CD40L的高表达.结论:活的结核分枝杆菌H37Ra能显著诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生更多的保护性免疫物质,有利于免疫应答,有可能作为新的结核候选疫苗,而灭活菌H37Rv不能显著激活小鼠腹腔巨噬细胞分泌保护性免疫物质,不宜作为新的结核候选疫苗.
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结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力
目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性免疫应答以及保护效果.方法:BALB/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,免疫8周后处死部分小鼠,取脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测淋巴细胞的刺激指数,ELISA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-4水平.另一部分免疫小鼠经腹腔感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)毒株H37Rv,4周后处死,测定小鼠脏器重量指数.取稀释的小鼠脾脏和肺脏匀浆接种于改良罗氏培养基,培养21天后计数脏器荷菌量.结果:H37Ra和BCG免疫小鼠脾淋巴细胞刺激指数、IFN-γ和IL-4水平均显著高于NS对照组.感染4周后H37Ra和BCG组小鼠脏器重量指数较NS对照组均显著降低.H37Ra组小鼠脾脏和肺脏荷菌量与NS对照组比较分别下降了1.228log10CFU和0.954log10CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性.结论:H37Ra免疫小鼠后可以诱导产生Th1型免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相当.
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结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的免疫应答
目的 检测结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫和体液免疫应答水平.方法 将BALB/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,分别进行免疫,免疫8周后处死小鼠,分离血清,ELISA间接法测定血清特异性抗PPD IgG抗体的水平,流式细胞分析仪检测脾脏T淋巴细胞亚群的变化.脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数,ELJSA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-4的水平.结果 H37Ra免疫小鼠血清中抗PPD IgG抗体、脾脏CD3+T细胞和CD4+T细胞的百分率、脾淋巴细胞刺激指数、IFN-γ和IL-4水平均显著高于NS对照组,但与BCG组差异无显著意义.各组间脾脏CD8+T细胞、CD4+T/CD8+T比值差异均无显著意义.结论 H37Ra免疫小鼠后,可以产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答,有望成为结核疫苗的候选抗原.
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减毒结核菌株H37Ra预防小鼠结核病的实验研究
为研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性免疫应答以及保护效果,将C57BL/6小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,免疫8周后处死部分小鼠,取脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI),ELISA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-2水平.另一部分免疫小鼠用结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)毒株H37Rv经腹腔感染,4周后处死,取稀释的小鼠肺脏匀浆接种于改良罗氏培养基,培养21 d后计数肺组织中的MTB菌落数,同时对小鼠部分肺组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度.结果显示,H37Ra和BCG免疫小鼠脾淋巴细胞SI、IFN-γ和IL-2水平均显著高于NS对照组(P＜0.05).感染4周后,H37Ra组小鼠肺组织荷菌量比NS对照组下降了0.95log10 CFU(P＜0.05),肺组织病理变化明显减轻.提示H37Ra免疫小鼠后可以诱导产生特异性细胞免疫应答,能够抵抗MTB毒株H37Rv的攻击,可作为新型结核疫苗的候选组分.
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结核菌H37Ra皮内接种对小鼠巨噬细胞的激活效应
目的探讨小鼠皮内接种结核菌H37Ra后,腹腔MФ是否被免疫激活以及激活后氮氧化物的产生、抗结核细胞因子的表达,从而了解H37Ra的免疫应答过程及对MФ的抗菌免疫作用.方法用H37Ra、BCG皮内免疫小鼠后第30、60天,分别采用Griess法、化学法、ELISA法检测小鼠腹腔MФ在受到、未受到IFN-γ刺激后NO、H2O2的产生以及IL-12、TNF-α的表达水平.结果①H37Ra免疫小鼠后能显著诱导MФ分泌表达IL-12、TNF-α,与BCG皮内接种组、未免疫组比较,其差异均有统计学意义(P＜0.05);也能诱导MФ产生NO、H2O2,与未免疫组比较具有统计学意义(P＜0.05),与BCG皮内接种组比较,无明显差异;②IFN-γ对巨噬细胞氮氧化物的产生、细胞因子的表达具增强效应.结论H37Ra皮内接种小鼠后能诱导巨噬细胞活化并产生较强的激活效应,且该效应略优于BCG.
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结核分枝杆菌H37Ra抗结核作用相关研究进展
结核分枝杆菌H37Ra菌株(H37Ra)是人型结核分枝杆菌减毒株,它毒力极弱,对宿主相对安全,具备活菌疫苗的条件.与卡介苗(BCG)相比H37Ra菌株具有更完整的免疫原性,并包含一些BCG中丢失的抗原性成分.同时,H37Ra菌株能够充分活化巨噬细胞,刺激机体产生特异性免疫应答,在防治结核病中起到重要作用.因此,H37Ra菌株对机体抗结核的保护作用是否强于BCG,是否能作为抗结核的候选活疫苗已受到学者的关注,为今后研制新型、安全、高效的结核病苗奠定基础.本文对H37Ra菌株抗结核的相关研究进行了综述.
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结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的抗结核细胞免疫应答的研究
目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫应答及其对结核分枝杆菌(Mycobacteriun tubetculosisMTB)毒株感染的保护力.方法:Balb/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,皮内免疫8周后处死小鼠,流式细胞分析仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化;取小鼠脾淋巴细胞体外培养并用PPD刺激,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI);ELISA法检测培养上清液中IFN-?;免疫后第8周,用MTB毒株H37Rv经小鼠腹腔注射,4周后处死小鼠,测定小鼠肺脏荷菌量,观察免疫小鼠对MTB抵抗作用.结果:H37Ra免疫小鼠脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞的百分率分别为(41.63±1.68)%、(27.08±0.58)%,显著高于NS对照组(38.34±0.74)%、(24.37±1.60)%(P<0.05). H37Ra免疫组脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD8+T细胞的百分率均不同程度地高于BCG免疫组,但差异无统计学意义.脾淋巴细胞SI和IFN-?水平检测均发现H37Ra免疫组显著高于NS对照组(P<0.05),略高于BCG免疫组.感染4周后H37Ra组小鼠肺脏荷菌量与NS对照组比较下降0.954log10CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性(P>0.05).结论:H37Ba免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗结核的细胞免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相近.
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Ag85B DNA/H37Ra序贯免疫效果的探讨
目的:初步探讨含结核分枝杆菌Ag85B成熟蛋白的DNA(pTB30m)和结核菌H37Ra序贯免疫小鼠产生的特异性免疫应答.方法:重组质粒pTB30m用碱裂解法制备后进行质量鉴定.用pTB30m肌注初次免疫小鼠2周后,H37Ra皮内加强免疫作为DNA-85B/H37Ra组,同时设定DNA-85B/BCG组、H37Ra组、BCG组及未免疫组.免疫4周或8周后,用ELISA法检测小鼠血清中抗PPD IgG抗体的水平和MTT法检测其脾淋巴细胞的刺激指数(SI).结果:酶切鉴定pTB30m所含外源基因片段大小正确,并且纯度较高.DNA-85B/H37Ra组小鼠血清中抗PPD IgG水平、脾淋巴细胞的SI均显著高于未免疫组(P＜0.05);其抗PPD IgG水平稍高于DNA-85B/BCG组、H37Ra组及BCG组,但它们之间无显著性差异(P＞0.05);其脾淋巴细胞的SI显著高于H37Ra、BCG组(P＜0.05),而与DNA-85B/BCG组比较,仅在4周有显著性差异.在DNA-85B/H37Ra组内,SI在4周显著高于8周(P＜0.05),而血清中抗PPD IgG水平8周均显著高于4周(P＜0.05).结论:DNA-85B/H37Ra序贯免疫策略可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫,初步证明其免疫效果略优于BCG.
关键词： 结核分枝杆菌 序贯免疫策略 初免-加强免疫接种策略 抗原Ag85B H37Ra -
结核菌H37Ra免疫小鼠后巨噬细胞TNF-α表达的初步探讨
目的:探讨小鼠接种结核菌H37Ra株后,巨噬细胞表达TNF-α的活性情况.方法:H37Ra皮内、腹腔途径免疫小鼠后第30、60天,采用生物学活性方法检测小鼠腹腔巨噬细胞表达的TNF-α活性.结果:小鼠接种H37Ra后,30天时TNF-α活性分别为22.06U/ml(腹腔)和22.63U/ml(皮内);60天时TNF-α的活性分别为36.76U/ml(腹腔)和33.78U/ml(皮内),明显高于未免疫组(P＜0.01);与BCG皮内免疫组比较,30天时无显著性差异(P＞0.05),60天时有明显差异(P＜0.05).结论:H37Ra免疫小鼠后能诱导机体产生TNF-α.
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结核菌H37Ra免疫小鼠后PPD刺激淋巴细胞增殖转化的探讨
目的:探讨小鼠接种H37Ra后,PPD刺激鼠淋巴细胞的增殖转化情况.方法:用H37Ra皮内、腹腔免疫小鼠后30、60天,检测小鼠脾淋巴细胞受PPD刺激后的转化率.结果:小鼠接种H37Ra后,30天淋转率分别为21.98%(腹腔)和24.85%(皮内);60天淋转率分别为25.50%(腹腔)和25.02%(皮内),明显高于未免疫组(P＜0.01);与BCG皮内免疫组比较,无显著性差异(P＞0.05);H37Ra腹腔和皮内不同途径接种,淋巴细胞转化率无明显差异.结论:H37Ra免疫小鼠后能诱导机体产生抗结核的免疫应答.
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结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠后细菌在体内定植的研究
目的:了解H37Ra(人型结核分枝杆菌标准无毒株)免疫小鼠后在体内生长情况.方法:将H37Ra和BCG分别皮内接种C57BL/6小鼠,免疫后15天、30天及60天,取稀释小鼠脾脏和肺脏匀浆接种罗氏培养基,培养18天后计菌落数(CFU).结果:免疫后15天、30天及60天,H37Ra在小鼠脾脏、肺脏定植的平均Log10CFU为1.95、1.57、2.54和1.37、1.08及0.94;BCG在小鼠脾脏、肺脏定植的平均Log10CFU则为1.72、1.39、1.06和1.16、0.96及0.50.免疫后15天及30天,脾脏及肺脏定植的H37Ra和BCG无显著性差异(P＞0.05);免疫后60天,脾脏及肺脏定植的H37Ra显著多于BCG(P＜0.05).H37Ra和BCG在脾脏定植的细菌数显著多于肺脏(P＜0.05).结论:H37Ra在C57BL/6小鼠体内至少可以存活2个月.
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结核菌H37Ra免疫小鼠后机体抗结核细胞免疫功能的研究
目的探讨小鼠皮内接种H37Ra后,细菌在体内的定植及机体能否产生针对结核菌的免疫力. 方法用H37Ra皮内免疫小鼠后15、30、60 d,检测结核菌在小鼠体内脏器的定植;免疫后第30、60天,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞受PPD刺激后的增殖转化刺激指数、ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞受PPD刺激后IL-2、sIL-2R的表达量. 结果小鼠脾、肺脏中有结核菌定植,并至少存活60 d;脾淋巴细胞30、60 d的刺激指数分别为(2.81±0.63)、(2.16±0.52),与BCG皮内接种组无显著性差异,与未免疫组有显著性差异(P<0.05);脾淋巴细胞IL-2、sIL-2R表达量分别为(126.88±8.11)、(91.26±7.29)pg/ml和(138.58±7.67)、(127.09±5.47)pg/ml,与BCG皮内接种组、未免疫组比较均有显著性差异(P<0.05). 结论 H37Ra免疫小鼠后能诱导机体产生特异性的抗结核免疫力,且免疫效果略优于BCG.
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结核杆菌Ag85B-DNA与H37Ra序贯免疫小鼠后细胞免疫的探讨
[目的]探讨用结核分枝杆菌Ag85B-DNA(pTB30m)和结核菌H37Ra序贯免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫. [方法]用碱裂解法制备Ag85B成熟蛋白的真核表达质粒(pTB30m),初次免疫小鼠2周后,用H37Ra皮内加强免疫(DNA-85B/H37Ra组),同时设定AgB5B-DNA/BCG组、H37Ra组、BCG组及未免疫组.加强免疫4 w和8 W后,检测小鼠脾淋巴细胞被PPD刺激指数(SI)及其IFN-γ、IL-2的表达水平. [结果] (1)酶切鉴定pTB30m所含外源基因片段大小正确,纯度较高. (2)DNA-85B/H37Ra组小鼠脾淋巴细胞的SI均显著高于H37Ra组、BCG组和DNA-85B/BCG组(P＜0.05) (3)所有免疫组IFN-γ及IL-2表达与未免疫组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),DNA-85B/H37Ra组与DNA-85B/BCG组均高于H37Ra组和BCG组(P＜0.05).DNA-85B/H37Ra略高于DNA-85B/H37Ra,但差异无统计学意义(P＞0.05). [结论] DNA-85B/H37Ra序贯免疫效果略优于DNA-85B/BCG组,明显优于H37Ra组和BCG组.
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结核菌H37Ra和BCG感染巨噬细胞的实验研究
目的:探讨H37Ra和BCG诱导巨噬细胞产生一氧化氮(NO)的能力,细菌在巨噬细胞内生存和破坏巨噬细胞的能力.方法:H37Ra和BCG分别感染BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7细胞株及THP-1细胞株,24h后取培养上清液,Griess法检测NO的释放量;分别于感染后的0、4 d及7 d用1%Triton X-100裂解巨噬细胞后接种罗氏培养基,培养18 d后计数菌落形成单位(CFU);同时于每个时间点,用MTT法检测巨噬细胞存活率的变化.结果:H37Ra和BCG均可诱导BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7细胞株及THP-1细胞株产生多量的NO,两组均显著高于对照组(P＜0.05);H37Ra感染组稍高于BCG感染组,但差异无统计学意义(P＞0.05);H37Ra和BCG均可在巨噬细胞内生存繁殖,H37Ra或BCG的感染均降低巨噬细胞的存活率,随着感染时间的延长细菌破坏巨噬细胞的效果越来越显著.结论:H37Ra和BCG均可增强巨噬细胞的抗微生物活性,它们对巨噬细胞均具有一定的毒力;H37Ra的毒力低于BCG.
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结核菌H37Ra诱导迟发型超敏反应的探讨
[目的]探讨结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠后能否诱发迟发型超敏反应及佳的观测时间.[方法]Balb/c小鼠随机分为3组.分别用H37Ra、BCG和NS皮内免疫,6周后每组小鼠皮内注射PPD,游标卡尺测定24、48和72h局部皮肤红肿、硬结直径.[结果]H37Ra组24、48和72h的局部皮肤红肿、硬结直径结果分别是(6.17±0.20)、(5.23±0.35)、(3.59±0.40)mm,24和48h反应稍弱于BCG组[(6.71±0.66)、(5.89±0.52)mm],无统计学意义(P>0.05).与NS对照组相比,H37Ra和BCG免疫小鼠后均能诱导显著的迟发超敏型反应(P<0.05).H37Ra组和BCG组均24h反应明显.[结论]结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠6周后能诱导迟发型超敏反应,较BCG弱;24h为佳观测时间.
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结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞的研究
目的:研究结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后氮氧化物的产生及细胞因子的分泌和表达情况.方法:结核杆菌H37Ra感染RAW264.7巨噬细胞株24h后收集上清液,用Griess法检测一氧化氮(NO),化学法检测过氧化氢(H2O2)的产生,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测感染后巨噬细胞IL-12和TNF-α mRNA的表达,ELISA法检测细胞因子IL-12和TNF-α的含量.结果:结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后产生的NO和H2 O2水平均显著升高,同时IL-12和TNF-α的分泌和表达也明显增加(P＜0.05).结论:结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后能产生大量的氮氧化物和抗结核细胞因子,从而产生有利于宿主的抗结核免疫应答.
