首页 > 文献资料
-
云南省输入性登革热病例登革病毒1型的分离研究
[目的]对2011年8月采集的从老挝输入的登革热病人急性期血清进行登革病毒分离,以找出病原学证据.[方法]用C6/36白纹伊蚊细胞进行病毒分离,对有细胞病变的标本进行RT-PCR,检测登革病毒RNA及型别,对PCR产物测序,进行比对分析和进化树分析.[结果]从8例输入登革热病人的血清中分离到4株能引起细胞病变的病毒,均为登革病毒1型,与泰国毒株的同源性＞99％.[结论]云南省首次从输入登革热病人血清中分离到登革病毒1型,为云南省登革热的防控提供了依据.
-
登革病毒1型Ⅰ～Ⅴ基因亚型的基因组差异分析
目的 分析登革病毒1型(Dengue virus type 1,DENV-1)Ⅰ～Ⅴ基因亚型基因组全长核苷酸及氨基酸序列差异.方法 通过GenBank搜索DENV-1 5个不同基因亚型的全长基因组序列,获得其相应的氨基酸序列.采用BIOEDIT软件,统计基因亚型间核苷酸突变和氨基酸替代位点,分析其相似度,通过RNA二级结构在线预测网站预测DENV-1不同亚型间3'UTR的二级结构差异,蛋白结构在线预测网站预测主要流行于中国的Ⅰ及Ⅴ DENV-1基因亚型结构蛋白的二级结构,对其氨基酸组成及编码序列中可能存在的蛋白结合区域等进行差异分析.结果 DENV-1 5个基因亚型核苷酸相似性为91.40％～94.50％,氨基酸序列相似性为97.11％～98.38％,5个基因亚型各自编码3 392个氨基酸,其中共有195个位点有氨基酸的变化.DENV-1不同亚型的3'UTR的二级结构各不相同.DENV-1基因型为Ⅰ、Ⅴ的775个氨基酸中占组成比例多的均是苏氨酸(T),Ⅰ型可能的蛋白结合位点有26个,多聚核苷酸结合位点有9个.Ⅴ型可能的蛋白结合位点有24个,多聚核苷酸结合位点有7个.他们均有相同数量的螺旋和跨膜螺旋.结论 通过对DENV-1 5个不同的基因亚型的全长核苷酸和氨基酸序列的比较分析,及Ⅰ、Ⅴ基因亚型结构蛋白二级结构的预测,为研究DENV-1不同基因型之间的生物学和致病性差异提供参考.
-
江苏省输入性登革热1例病毒分离鉴定及分子特征分析
目的:从江苏省2012年4月1例菲律宾输入的疑似登革热患者急性期血清中分离病毒并分析其分子生物学特征,以找出病原学证据.方法:收集患者血清样本,采用胶体金法检测登革病毒的IgM、IgG抗体;用C6/36细胞分离病毒,对细胞病变的标本进行RT-PCR及荧光定量PCR检测登革病毒RNA和鉴定型别;采用高通量测序技术对该分离株进行编码区基因测序,用MEGA6.0软件对其进行序列比对和进化分析.结果:从患者血清样本中检测到登革病毒的IgM抗体,分离到的毒株经鉴定为登革病毒1型,与美国HawO3663毒株的核苷酸同源性＞98％.结论:该病例是由登革病毒1型引起的输入性病例.
-
登革1型病毒GZ2002株全基因组测序与分析
目的 对2002年分离自广州登革热患者的1型登革病毒GZ2002株进行全基因组序列测定及分析,为探讨其来源和基因组特征提供依据.方法 利用C6/36细胞增殖GZ2002株,出现典型细胞病变后收集感染细胞及病毒液提取RNA.根据5株登革病毒1型标准株AY145123、FJ176780、FJ176779、DVU88536、EF025110全序列设计6对相互覆盖的引物.采用RT-PCR法扩增覆盖GZ2002株基因组全长的6个cDNA片段,并将其分别克隆到pMD-18T载体上,通过序列测定和重叠序列拼接获得全基因组序列.结果 GZ2002株基因组全长10 735 nt,单一阅读框长10 176 nt,推测编码3 392个氨基酸,5′及3′-UTR分别为94 nt和462 nt,无显著的密码子偏嗜性.GenBank登录号:JN205310.系统进化分析显示GZ2002株属于DENV-1型基因IV型.比较不同致病性的DENV-1型毒株发现,随DENV毒株致病力的增强,编码区氨基酸突变位点明显增多.GZ2002株、泰国16007株、柬埔寨株及印度尼西亚98901530株的5′-UTR二级结构高度保守,3′-UTR分析显示强毒力泰国16007株与柬埔寨株均存在高突变区.结论 GZ2002株属于DENV-1型基因IV型,可能与1998年印度尼西亚DENV-1流行株相关,编码区株特有氨基酸变异位点及3′-UTR高突变区的生物学意义值得进一步探讨.
-
登革热患者血小板减少与血小板膜糖蛋白特异性抗体相关
[目的]了解登革热患者血小板膜糖蛋白特异性抗体(抗GPⅡb/Ⅲa和抗GPIb/Ⅸ)的表达,探讨登革热患者血小板减少是否与血小板膜糖蛋白特异性抗体相关.[方法]用改良的血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA法)检测51例登革病毒1型(DENV-1)登革热患者和50例健康者血清的抗GPⅡb/Ⅲa和抗GPIb/Ⅸ特异性抗体,分析血小板膜糖蛋白特异性抗体水平和血小板计数的相关性.[结果]51例DENV-1登革热患者血清中血小板膜糖蛋白特异性抗体抗GPⅡb/Ⅲa、抗GPIb/Ⅸ和双抗体总体阳性率分别为35.3％(18/51)、37.3％(19/51)和43.1％(22/51);与50例健康者的阳性率8.0％(4/50),6.0％(3/50)和10.0％(5/50)相比,差异有统计学意义(P＜ 0.001).重度血小板减少登革热患者(PLT＜ 50×109/L)血清中,抗GPⅡb/Ⅲa和抗GPIb/Ⅸ抗体检出率为100％ (6/6)和83.3％(5/6),血小板计数无减少登革热患者血清中抗体阳性率为14.8％(4/27)和29.6％ (8/27),差异有统计学意义(P=0.0001,P=0.015).在登革热血小板计数减少患者血清中,抗GPⅡb/Ⅲa和抗GPIb/Ⅸ抗体水平与血小板计数呈负相关(r=-0.58,P＜0.001;r=-0.44,P＜0.05).[结论]登革热患者血小板减少与血小板膜糖蛋白特异性抗体抗GPⅡb/Ⅲa和抗GPIb/Ⅸ相关;免疫因素参与登革热患者血小板减少的破坏过程.
