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STAg联合ESA鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用
观察弓形虫可溶性速殖子抗原(Soluble tachyzoite antigen,STAg)与排泄-分泌抗原(Excreted/secreted antigens,ESA)单独或联合鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用.分别用PBS 20 μL和STAg 20 μg、ESA 20 μg及联合抗原(STAg 10 μg+ESA 10 μg)鼻内免疫BALB/c处女鼠2次,间隔2周.末次免疫后第13天处女鼠与雄鼠以2:1同居.妊娠第8天用弓形虫速殖子(8 000个/只)灌胃攻击所有孕鼠.妊娠第18天处死,计算活胎率,并测定孕鼠肝、胎盘和胎鼠脑组织弓形虫抗原和孕鼠脾组织内虫荷,同时测定孕鼠小肠冲洗液SIgA、血清IgG水平.结果表明,ESA组和联合抗原组活胎率显著高于PBS组,STAg组、ESA组和联合抗原组胎盘及胚胎感染率均低于PBS组,联合抗原组低.孕鼠在弓形虫速殖子攻击后,PBS组明显出现竖毛、倦怠、腹部塌陷等异常表现,感染率为100%,死亡率为22.22%,而STAg组、ESA组和联合抗原组有轻微症状.感染率分别为85.71%、57.14%、57.14%,死亡率分别为16.67%、0%、0%.STAg组、ESA组和联合抗原组脾组织内虫荷均显著低于PBS组,减虫率分别为72.19%、72.29%、78.45%,ESA组和联合抗原组小肠冲洗液特异性SIgA均显著高于PBS组,联合抗原组高,血清特异性IgG抗体水平差异不显著.由此可见,ESA单独或与STAg联合免疫可诱导孕鼠小肠液高水平SIgA,显著降低脾组织虫荷,显著提高胚胎存活率,表现出明显的垂直传播阻断的作用.
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弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的Peyer's patches持续性细胞免疫应答
目的 以可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素 (cholera toxin,CT)佐剂制备的弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫小鼠,观察肠粘膜诱导部位Peyer's patches(PP)的细胞免疫应答及持续时间,探讨其免疫机制.方法 BALB/c小鼠96只,随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20 μg/只)为抗原,CT(1 μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组PBS滴鼻.滴鼻2次(间隔2周)后,每组6只小鼠分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死.计数PP个数,制备PP淋巴细胞悬液,计数并涂片;免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群.结果 实验期间两组小鼠PP数目均无明显变化;实验组免疫后PP淋巴细胞数量明显增生,第2周达高峰,第1、2、3周显著高于对照组(P＜0.05),其中以CD4+T细胞增生为主,第1周～第8周高于对照组(P＜0.01),CD8+T细胞第1周～第4周显著增高(P＜0.01),CD4+/CD8+比值无显著变化(P＞0.05).结论 弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导肠PP部位持续性的免疫应答,从而激活肠粘膜效应部位淋巴细胞的抗弓形虫感染作用.
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弓形虫STAg不同途径免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答动态变化
目的 动态观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻和皮下免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答. 方法6周龄BALB/c小鼠90只随机分为3组,分别以20 μg STAg滴鼻或皮下注射免疫小鼠2次,间隔2周,对照组不做处理.末次免疫后1、2、3、4和5周,每组随机处死6只小鼠.ELISA法测定小肠冲洗液sIgA和血清IgG,分离并计数小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)和脾淋巴细胞. 结果对照组小鼠小肠冲洗液sIgA水平和IEL数及血清IgG水平和脾淋巴细胞数均维持在较低水平.滴鼻免疫组小鼠小肠冲洗液sIgA水平升高,与对照组比较差异有统计学意义(FsIgA=10.074.FIEL=14.747,P<0.01),其中第5周sIgA水平、第2～5周IEL数量与皮下免疫组比较差异有统计学意义(FsIgA=7.862,FIEL=9.807,P<0.05).皮下免疫组小鼠血清IgG水平和脾淋巴细胞数均升高,与对照组比较差异有统计学意义(FIgG=8.207,F脾细胞=11.209,P<0.05),第5周脾淋巴细胞数与滴鼻组比较差异有统计学意义(F=6.826,P<0.05). 结论 20 μg STAg滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答水平优于同剂量的皮下免疫,同时也诱导了较高水平的系统免疫应答.皮下免疫可诱导较高水平的系统免疫应答,但其诱导的黏膜免疫应答较弱.
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STAg联合CpG ODN和CT鼻内免疫小鼠诱导的特异性抗体应答和脾淋巴细胞的特异性增殖反应
目的 观察可溶性速殖子抗原(STAg)联合CpG寡核苷酸(CpG ODN)和/或霍乱毒素(CT)鼻内免疫BALB/c小鼠后血清IgG、肠冲洗液IgA抗体水平及脾淋巴细胞体外特异性增殖反应,探讨CpG ODN和CT的佐剂效应. 方法 6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为5组,分别用20 μl PBS(PBS组)、20 μg STAg(抗原组)、20 μg STAg +10 μg CpG ODN(CpG佐剂组)、20 μg STAg + 1 μg CT(CT佐剂组)、20 μg STAg + 1 μg CT +10 μg CpG ODN(联合佐剂组)滴鼻,间隔2周,免疫2次.末次免疫后第20 d颈椎脱臼处死小鼠,收集血清和肠冲洗液,ELISA法检测血清弓形虫特异性IgG和肠冲洗液IgA.分离脾淋巴细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测致敏脾淋巴细胞体外增殖活性. 结果 ELISA法测定PBS组、抗原组、CpG佐剂组、CT佐剂组及联合佐剂组小鼠血清IgG A值分别为0.025 6±0.012 1、0.054 2±0.024 4、0.109 4±0.007 5、0.110 1±0.009 1和0.124 6±0.013 7,肠冲洗液IgA A值分别为0.141 8±0.030 2、0.415 2±0.080 7、0.526 9±0.075 4、0.846 5±0.115 5和1.128 9±0.100 3,脾淋巴细胞刺激指数SI分别为1.159 0±0.275 5、1.364 0±0.349 8、1.582 0±0.375 3、1.928 0±0.278 9和2.371 0±0.646 9,差异均有统计学意义(P＜0.01);联合佐剂组肠冲洗液IgA水平和脾淋巴细胞的SI值与CpG佐剂组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 STAg联合CpG ODN和/或CT鼻内免疫小鼠可有效诱导机体免疫反应,两种佐剂联合免疫的效果优于单一抗原或抗原联合单一佐剂.
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弓形虫排泄-分泌抗原和可溶性速殖子抗原免疫原性的观察
目的 观察弓形虫速殖子排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen, ESA)和可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen, STAg)鼻内免疫小鼠的免疫原性. 方法 BALB/c小鼠随机分为4组,分别用PBS 20 μl/只、体外排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in vitro, ESAv)、腹腔排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in mice, ESAm)和STAg各20 μg/只鼻内免疫2次,间隔14 d.分别于末次免疫后14 d和44 d每组处死8只小鼠,计数肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes,iIEL)和脾淋巴细胞,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA抗体水平. 结果 实验期间,ESAm组小鼠于二次免疫后状态欠佳,其他各组小鼠健康状况良好.末次免疫后14 d,各抗原组脾淋巴细胞及iIEL均增殖活跃,细胞数与PBS组比较,差异具统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);至免疫后44 d,两种ESA组脾淋巴细胞及iIEL数与PBS组比较差异具统计学意义(P＜0.05).各抗原组血清IgG水平在免疫后14 d和44 d均明显增高,与PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).免疫后14 d肠液sIgA水平ESAv、ESAm和STAg组与PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),ESAm和STAg组与ESAv组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),两种ESA组在免疫后44 d与PBS组比较差异仍具统计学意义(P<0.05). 结论 ESAv、ESAm和STAg鼻内免疫均可诱导粘膜及系统的细胞和体液免疫应答,有较强的免疫原性.但ESAm可能对机体有毒副作用,不适宜直接鼻内免疫.
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利用弓形虫病人血清筛选弓形虫速殖子特异性抗原
目的 筛选能引起人体免疫反应的弓形虫抗原标记.方法 利用实验室保存的9份弓形虫病人血清标准品、6份阴性血清标准品,以及2份弓形虫病人血清国际标准品作为一抗,分别与刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)进行免疫印迹反应.结果 发现STAg中有10条蛋白带与所用阳性血清均发生免疫反应;ESA中有4条蛋白带能与所有阳性血清发生免疫反应,这些蛋白与阴性血清均不发生免疫反应.其中分子量为30、35、49、50、54kDa的STAg抗原以及分子量为23、24、28kDa的ESA抗原能与所用阳性血清发生较强免疫反应.结论 本实验结果将有助于寻找在弓形虫病人体内能够引起免疫反应的弓形虫诊断抗原和免疫保护性抗原,为弓形虫诊断试剂以及疫苗开发奠定初步基础.
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弓形虫STAg免疫小鼠后血清抗体水平的动态检测
目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)免疫小鼠后,小鼠血清IgG抗体水平的动态变化,探索STAg抗原的佳免疫次数.方法 5～6周龄BALB/c小鼠20只,随机分成对照组和实验组,其中对照组头背部皮下注射生理盐水,实验组头背部皮下注射20 μg STAg,免疫5次,每次免疫1周后取5只小鼠,采血并分离血清,通过ELISA法测定IgG抗体；通过Western Blot方法检测血清中产生的IgG和IgM抗体条带.结果 第二次免疫后小鼠血清IgG值明显高于初次免疫小鼠的血清IgG值,差异有统计学意义；但是.Western Blot检测的IgG抗体条带颜色未明显增强.第四次免疫后小鼠血清IgG再次增高并达到峰值,同时第四次免疫后小鼠血清中的IgG抗体条带的反应颜色也明显变深.结论 利用STAg免疫小鼠,免疫2次就会产生明显的免疫效果,但是免疫4次可进一步有效提高小鼠的免疫力.
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ESA和STAg鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染作用
目的 观察弓形虫速殖子排泄一分泌抗原(excreted/secreted antigen,ESA)和可溶性速殖子抗原(solubletachyzoite antigen,STAg)鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用.方法 BALB/c小鼠64只随机分为4组,每组16只,分别用磷酸盐缓冲液(PBS)(对照组)20μl/只、体外排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in vitro,ESAv)20μg/只、腹腔排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in mice,ESAm)20μg/只和STAg20μg/只滴鼻免疫小鼠2次,间隔14 d.末次免疫后14 d每组处死8只小鼠,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA.每组剩余8只小鼠用RH株弓形虫速殖子1×106个/只灌胃攻击,记录小鼠健康情况.攻击后30 d处死小鼠,计数脾、脑组织内弓形虫虫荷(速殖子数).结果 ESAm组小鼠于2次免疫后出现轻微竖毛、倦怠等症状,其他各组小鼠健康状况良好.免疫后14 d,各抗原组血清lgG水平均明显高于对照组(P<0.001);ESAv(P<0.05)、ESAm(P<0.001)和STAg(P<0.001)组肠液sIgA水平明显高于对照组,EsAm(P<0.001)和sTAg(P<0.05)组高于EsAv组.弓形虫攻虫后:30 d,各抗原组小鼠脾、脑组织内虫荷显著低于对照组(P<0.01),EsAv、ESAm和sTAg组脾内速殖子减虫率分别为49.2%,49.52%和51.94%,脑内减虫率分别为46.83%,50.81%和51.18%.结论 ESAv、ESAm和STAg鼻内免疫均能产生抗弓形虫感染的部分保护,但ESAm可能对机体有毒副作用,不适宜直接鼻内免疫.
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弓形虫复合疫苗滴鼻免疫小鼠诱导肠淋巴细胞变化
目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)联合蜂胶和γ干扰素(IFN-γ)滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导肠上皮内淋巴细胞及其亚群的动态变化.方法 将96只5～6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为免疫组和对照组,免疫组以弓形虫复合疫苗(20 μg STAg+ 40 μg蜂胶+1 000 U IFN-γ)滴鼻免疫,对照组以磷酸盐缓冲液滴鼻；分别于滴鼻2次(间隔2周)后第1、2、3、4、6、8、10和12周处死小鼠,分离肠上皮内淋巴细胞(IEL),计数并涂片；免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平.结果 免疫组小鼠IEL的T淋巴细胞增生第2周达高峰(2.27×105),之后逐渐降低；在第1、2、3和4周对照组T淋巴细胞数分别为(0.81×105)、(0.74×105)、(0.87×105)、(0.74×105)个,免疫组IEL中T淋巴细胞数分别为(1.79 ×105)、(2.27 ×105)、(2.07×105)、(1.69×105)个,2组差异均有统计学意义(F=8.42,P＜0.01)；IEL中以CD8+T淋巴细胞增生为主,对照组CD8+T细胞水平无明显变化,免疫组CD8+T细胞明显增生,第2周达峰值(50.5％),随后逐渐下降,第1、2、3、4和第6周分别为43.60％、50.51％、44.70％、40.45％、39.73％,与对照组的25.71％、26.37％、29.31％、27.54％、26.35％比较,差异均有统计学意义(F=6.38,P＜0.05)；第1、2周免疫组CD4 +/CD8+比值低于对照组,差异有统计学意义(F=5.74,P＜0.05).结论 STAg联合蜂胶和IFN-γ滴鼻免疫BALB/c小鼠,可诱导肠上皮内淋巴细胞持续性免疫应答.
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STAg与BCG-DNA和氢氧化铝佐剂联合免疫小鼠的免疫效果
目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(Soluble tachyzoite antigen,STAg)与BCG-DNA和Al(OH)3佐剂联合免疫小鼠的免疫效果.方法 将BALB/c小鼠随机分为5组,分别经小鼠头背部皮下注射20 μg STAg、50 μμg BCG-DNA+20μgSTAg、50 μg Al(OH)3+ 20 μg STAg、50 μg BCG-DNA+ 50 μg Al(OH)3+ 20 μg STAg,对照组注射生理盐水,共免疫4次.末次免疫后1周处死小鼠,采血分离血清,并制备脾细胞悬液,ELISA法测定小鼠血清IgG值及抗体效价；ELISPOT法检测分泌特异性IFNγ的淋巴细胞数量.结果 Al( OH)3+BCG-DNA+STAg组小鼠血清抗体效价和IgG值及产生特异性IFNγ的淋巴细胞数量均显著高于STAg组、BCG-DNA+ STAg组和Al(OH)3+STAg组(P＜0.05).结论 STAg联合BCG-DNA和Al(OH)3佐剂能诱导小鼠产生更强的体液免疫和细胞免疫应答,Al(OH)3与BCG-DNA佐剂对弓形虫STAg具有免疫协同效应.
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STAg联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用
目的 探讨可溶性速殖子抗原(STAg)联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用及蜂胶的适宜剂量.方法 将60只BALB/c小鼠随机分为5组,每组12只,分别用20 μg STAg、20 μg STAg+5 μg蜂胶、20 μg STAg+10 μg蜂胶、20 μg STAg+20 μg蜂胶及20 μg STAg+40 μg蜂胶鼻内免疫小鼠2次,间隔14 d.末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子灌胃攻击,4×104个/只,观察小鼠存活情况.攻击后第30天处死全部小鼠,分离计数小鼠脑、肝组织内速殖子和肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL)、脾T淋巴细胞;ELISA法检测小鼠肺冲洗液、粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG抗体水平.结果 随着蜂胶剂量的增加,小鼠脑、肝速殖子数呈下降趋势,20 μg STAg+40 μg蜂胶组显著低于20 μg STAg组,脑、肝组织减虫率分别为46.10%和60.11%;MLNL和脾T淋巴细胞增殖活性提高,其中20 μg STAg+40 μg蜂胶组小鼠MLNL和脾T淋巴细胞数分别为(2.09±0.24)×107和(1.89±0.21)×107,均显著高于20 μg STAg组;肺冲洗液、粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG抗体水平呈增高趋势,但各组间差异无统计学意义.结论 STAg联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠可有效诱导抗弓形虫感染的保护作用,适宜的蜂胶剂量为40 μg.
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弓形虫可溶性速殖子抗原联合IFNγ滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答
目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)联合IFNγ滴鼻免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答,为研制弓形虫黏膜疫苗提供实验依据.方法 将BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20μg/只)+IFNγ(1 000 U/只)滴鼻,对照组以PBS滴鼻.免疫2次,间隔2周.分别于初次免疫后0、2、4…6 8 10、12周处死小鼠,分离脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞(IEIJs)并计数;分离血清,用ELISA法测定IgA和IgG含量.结果 免疫后实验组小鼠IELs和脾淋巴细胞均有增生,IELs和脾淋巴细胞数量均于初次免疫后4周达峰值,IEL数量4、6周显著高于对照组;脾淋巴细胞数量2、4周显著高于对照组.实验组小鼠血清IsG和IgA水平均于初次免疫后4周达峰值,IgG水平2,4周显著高于对照组,至12周时仍高于对照组;lgA水平4、6周显著高于对照组.结论 STAg联合IFNγ/滴鼻免疫BALB/C小鼠,可有效诱导黏膜及系统免疫应答,且可持续较长时间.
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重组人干扰素γ联合弓形虫STAg鼻内免疫小鼠的免疫保护作用
目的 观察重组人干扰素γ(IFNγ)联合可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠诱导的黏膜和系统免疫应答及抗弓形虫感染作用.方法 将BALB/c小鼠随机分为STAg组、STAg+IFNγ组和对照组,分别用20μg STAg、20μg STAg+1 000 U IFNγ和20 μl PBS鼻内免疫2次,间隔14 d.末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子灌胃攻击(4×104个/只),观察小鼠存活情况,并计算存活率,攻击后第43天处死全部小鼠,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子虫荷,分离并计数肠上皮淋巴细胞(iIELs)、派伊尔氏结(PP)和脾淋巴细胞,ELISA法检测小鼠粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG水平.结果 IFNγ联合STAg鼻内免疫能保护小鼠抵抗弓形虫攻击,小鼠存活率(93%)明显高于STAg组(60%)和对照组(47%);小鼠iIELs(1.81×105)、PP(3.21×107)和脾(3.01×107)淋巴细胞均显著增生,明显高于STAg组和对照组;粪便中sIgA水平(A492=0.435)显著高于对照组(A492=0.047),血清IgG水平(A492=0.233)显著高于STAg组(A492=0.193)和对照组(A492=0.115);肝、脑组织内弓形虫速殖子虫荷显著减少,分别比对照组减少80.90%和64.50%.结论 IFNγ联合STAg鼻内免疫效果优于单独STAg免疫,IFNγ能协同STAg有效诱导黏膜和系统免疫应答,提高弓形虫攻击小鼠的存活率,降低肝、脑组织内虫荷.
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弓形虫STAg不同接种途径免疫小鼠诱导的免疫应答
目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)经滴鼻、灌胃和皮下注射3种途径免疫小鼠诱导的免疫应答.方法 5～6周龄BALB/c小鼠32只随机分为4组,分别以20μg STAg滴鼻、灌胃或皮下注射免疫小鼠2次.间隔2周,对照组不作处理.末次免疫后14d脱颈椎处死小鼠,分离脾淋巴细胞和肠上皮内淋巴细胞(IELs)并计数,ELISA法测定血清、肠冲洗液中的弓形虫特异性抗体.结果 滴鼻组和皮下注射组的脾淋巴细胞数量高于灌胃组和对照组,灌胃组与对照组相近.滴鼻组的IELs数量高于皮下注射组、灌胃组和对照组,皮下注射组和灌胃组与对照组一致.皮下注射组的血清IgC水平高于滴鼻组、灌胃组和对照组,滴鼻组略高于灌胃组和对照组,但差异无显著意义.滴鼻组的小肠冲洗液slgA水平高于皮下注射组、灌胃组和对照组,皮下注射注射组和灌胃组略高于对照组,差异无显著意义.结论 20μg STAg滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答优于灌胃和皮下注射;皮下注射免疫小鼠诱导的血清IgG抗体水平高于滴鼻和灌胃,但其未能诱导黏膜免疫应答.
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ESA与STAg联合滴鼻免疫小鼠诱导的特异性免疫应答
目的 观察弓形虫排泄分泌抗原(ESA)与可溶性速殖子抗原(STAg)联合或单独滴鼻免疫小鼠的免疫应答效果,筛选弓形虫黏膜疫苗候选抗原.方法 将40只BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只.实验组分别用20μg STAg、30 μg ESA及二抗原联合(15μg ESA与10 μg STAg)滴鼻免疫2次,间隔14d,对照组用PBS以20μl/只滴鼻.于末次免疫后第14天,取血清,收集小肠冲洗液,检测特异性抗体,分离肠上皮内淋巴细胞(iIEL)和脾淋巴细胞并计数.结果 整个实验期间,各组小鼠健康状况良好,体重逐渐增加.STAg组、ESA组及联合抗原组小鼠黏膜、血清中特异性抗体水平依次升高,脾淋巴细胞和iIEL增殖反应逐渐增强.联合抗原组和ESA组血清IgG抗体和小肠冲洗液sIgA升高尤为显著.同时,联合抗原组、ESA组脾淋巴细胞和iIEL增生显著高于对照组.结论 ESA单独或联合STAg滴鼻免疫小鼠均能激发弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答.两种抗原联合免疫的研究,将有助于制定更加完善的弓形虫疫苗研究策略.
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STAg联合CpG ODN滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答
目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)联合CpG寡核苷酸(CpG ODN)滴鼻免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答,探讨CpG ODN的佐剂效应.方法 将72只雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组36只.实验组以20μgSTAg联合10μg CpG ODN滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻,共免疫2次,间隔2周.于末次免疫后第1、2、3、4、5、6周每组分别随机处死6只小鼠,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA,分离脾和肠上皮内淋巴细胞(iIEL)并计数.结果 实验组小鼠血清IgG水平在末次免疫后第1周即显著高于对照组,在5周内呈持续上升趋势,至第6周m现下降.实验组小鼠小肠冲洗液sIgA水平在各个时间点均高于对照组,第2～6周差异有统计学意义.实验组小鼠脾淋巴细胞和iIEL数量均明显增生,脾淋巴细胞数量在第3周时达高峰,第2～6周显著高于对照组;iIEL数量分别在第2、4周出现2个峰值,第2、3、4周显著高于对照组.结论 STAg与CpG ODN联合滴鼻免疫BALB/c小鼠,可有效诱导黏膜部位和系统的体液免疫和细胞免疫应答,且可持续较长时间.
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STAg和CT滴鼻免疫小鼠诱导的刚地弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)属专性细胞内寄生性原虫,人群感染极为普遍,全球约20亿人感染,2001-2004 年中国人群血清阳性率高达7.88%.弓形虫感染在免疫缺陷、免疫抑制者可引起严重病变,孕期感染可经胎盘垂直传播致先天性弓形虫病.
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刚地弓形虫蛋白质组学研究进展
近10年,蛋白质组学技术广泛应用于刚地弓形虫研究中,研究结果为全面深入揭示该虫体的生命活动本质奠定了基础.目前,关于刚地弓形虫的整体蛋白质组学研究仅限于速殖子和卵囊阶段的蛋白质组学;亚蛋白质组学研究包括一些重要抗原,如可溶性速殖子抗原、糖蛋白和免疫蛋白质组学研究等;差异蛋白质组学研究着眼于阐明不同虫株或不同虫种的差异蛋白.本文综述了弓形虫蛋白质组学的研究现状,详细阐述了弓形虫整体蛋白质组学、亚蛋白质组学和差异蛋白质组学的主要研究进展.此外,本文还概述了弓形虫蛋白质组学的生物信息学平台,并对弓形虫蛋白质组学的应用前景进行了展望.
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不同佐剂的复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用
目的 比较IFN-γ和蜂胶作为佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫攻击的能力,探索两种佐剂联合应用的效果.方法 将5～6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4个组,每组15只,分别用20 μg可溶性速殖子抗原(STAg)、20 μg STAg+40 μg蜂胶、20 μg STAg+1 000 U IFN-γ或20 μg STAg+40 μg蜂胶+1 000 U IFN-γ鼻内免疫小鼠2次,间隔14 d.末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击,逐日观察小鼠存活情况.攻击后第43天处死全部存活小鼠,计算胸腺、脾指数,计数脑、肝组织速殖子.结果 STAg+IFN-γ组、STAg+蜂胶+IFN-γ组胸腺、脾指数显著高于STAg组(P<0.05);组织内速殖子虫荷显著降低(P<0.01),STAg+IFN-γ组小鼠脑、肝组织减虫率分别为57.00%和79.06%;STAg+蜂胶+IFN-γ组小鼠脑、肝减虫率分别为68.30%和79.06%.STAg+蜂胶组小鼠胸腺、脾指数有升高趋势,组织内速殖子虫荷降低,但与STAg组比较差异无统计学意义.结论 在抗弓形虫感染中,IFN-γ、蜂胶+IFN-γ的佐剂效果优于蜂胶,IFN-γ、蜂胶+IFN-γ辅助STAg显著提高小鼠胸腺、脾比重,增强机体免疫能力,有效抵抗弓形虫的感染攻击,脑、肝组织速殖子虫荷显著减少.
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弓形虫可溶性速殖子抗原和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的鼻通道细胞免疫应答
目的研究弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素(cholera toxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻通道(nasal cavity,NC)的免疫效应及持续时间.方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20μg/只)为抗原,CT(1 μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻.滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死6只小鼠.分离NC的淋巴细胞,计数并涂片,用免疫细胞化学法检测其CD4+T、CD8+T细胞亚群水平.结果小鼠免疫后,NC淋巴细胞第1周至第10周持续显著增生(P＜0.05);NC中CD4+T细胞水平第1周至第8周持续显著增高(P＜0.05),CD8+T细胞在第1、2、3周(P＜0.05)显著增高,持续至免疫后第3周,CD4+/CD8+比值无明显变化.结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导NC的免疫应答,并可持续较长时间.
