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吗啡备用根大鼠脊髓组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定
目的分离纯化吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液,以期获得某些神经营养活性物质.方法应用Sephacryl S-200 HR凝胶层析、高效液相色谱(HPLC)和组织培养等技术分离和检测神经营养活性物质.结果备用根大鼠脊髓组织提取液能够促进体外培养的鸡胚背根节(DRG)神经突起的生长;吗啡作用的大鼠脊髓组织提取液也具有同样的作用,但备用根大鼠和吗啡作用的大鼠脊髓组织提取液在促神经突起生长作用方面并没有明显的差异.吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液具有明显的神经营养活性作用.吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液的SephacrylS-200 HR凝胶层析Ⅱ峰洗脱液和Ⅳ峰洗脱液能够促进DRG神经突起的生长.经SDS-PAGE分析,Ⅱ峰洗脱液呈现1条分子量约为65kD的蛋白质主带,Ⅳ峰洗脱液的蛋白质成分较为复杂.应用HPLC对凝胶层析Ⅳ峰洗脱液作进一步的分离,发现HPLC A峰洗脱液能够促进DRG神经突起的生长.经SDS-PAGE显示,A峰洗脱液的两条蛋白质主带分子量分别为30kD和18kD.结论吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液中具有神经营养活性作用的物质可能是分子量约为65kD、30kD和18kD蛋白质.
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备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定
目的进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配(手术侧)的脊髓后角组织提取液,以获得某种神经营养活性物质. 方法用Superdex G-75 prep grade凝胶层析、高效液相色谱(HPLC)层析和细胞培养等技术分离和检测神经营养活性物质. 结果手术侧脊髓后角组织提取液经Superdex G-75 prep grade凝胶层析和HPLC层析后,得到的A峰洗脱液具有促进体外培养鸡胚背根节(DRG)分离神经元存活及其神经突起生长的神经营养活性作用.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显示,A峰洗脱液呈现一条分子量约为60 kD的蛋白质主带. 结论结合生物活性检测结果,分子量约60 kD的蛋白质可能是手术侧脊髓后角组织的神经营养活性物质.
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脑源性神经营养因子在猫备用背根节的表达变化
为探讨脑源性神经营养因子(BDNF)在备用背根节(DRG)的表达变化情况,对20 只成年雄性家猫(其中15只行单侧L6备用根手术后分别存活3、6、12天)L6 DRG行BDNF免疫组化染色.结果:①正常猫L6 DRG神经元以胞体直径32μm和44μm为分界划分出大中小三类;②正常L6 DRG内有50.87%的神经元呈BDNF阳性反应,备用根手术侧其BDNF阳性神经元数量增多,反应增强,以术后6天变化显著(76.7%).正常及术后BDNF阳性神经元均以小神经元为主.去部分背根后备用L6 DRG神经元BDNF表达的增多、增强可能参与促进其神经元 ( 尤其是小神经元)中枢支在脊髓背角的侧支出芽,并可能参与营救一些失去部分神经支配的背角神经元.
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针刺对备用DRG的NGF及其mRNA阳性大、中、小神经元数量的影响
本研究观察了NGF及其mRNA阳性神经元在DRG大、中、小神经元中的数量变化,目的在于探讨DRG各类神经元NGF变化与针刺促进脊髓可塑性的关系.对5只成年猫进行双侧备用根手术.术后当日开始针刺一侧L6脊神经后肢分布区的两组穴位即足三里和悬中、伏兔和三阴交,每天一次,每次30 mm,连续针刺7 d后处死动物.取针刺侧与非针刺侧L6的DRG制成20 μm厚冰冻纵切片.分别用NGF抗血清和NGF的cRNA探针进行免疫组织化学反应及原位杂交染色.计数两侧DRG相同面积内大(＞57 μm)、中(42～57 μm)、小(＜42 μm)型NGF及其mRNA阳性神经元的数量.结果显示:针刺侧备用DRG NGF及其mRNA阳性大、小型神经元的数量明显增加(P＜0.05),而对中型神经元数量影响不明显.结论:针刺促进脊髓可塑性可能与备用DRG大、小神经元表达NGF增多有关.
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NGF及NGF mRNA在去部分背根猫脊髓和背根节表达的变化
用成年猫单侧备用根模型(切断一侧L1～5、L7～S2节段脊髓背根,保留L6背根),用免疫组织化学和原位杂交技术,对脊髓背角Ⅱ板层、背核和L6背根节中神经生长因子的表达进行了动态观察.结果证明,部分背根去传人后:(1)脊髓各节段双侧背角I板层的神经生长因子和神经生长因子mRNA阳性神经元的数量及体积显著增高、增大;(2)手术侧背核神经生长因子和神经生长因子mRNA阳性神经元的增高强于非手术侧,但术后两时间组的手术侧之间无差异;(3)备用根背根节新出现了神经生长因子mRNA阳性神经元,且神经生长因子阳性神经元数量明显高于正常组,且随术后时间增加而递增.以上结果表明:部分背根去传人猫脊髓背角I板层及背核内神经生长因子水平提高,尤其备用根背根节神经元神经生长因子的增加,为备用背根传人纤维侧支生芽和突触重建提供了良好的条件,有助于解释脊髓初级传入纤维损伤溃变后代偿性机能恢复的机制.
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脑源性神经营养因子在部分去传入猫脊髓背角的表达
为探讨脑源性神经营养因子在部分去传入猫脊髓背角的表达状况，对成年雄性家猫切除L1～L5，L7～s2背根节、保留L6节及背根，术后分别存活3、6、12 d，对L6节段脊髓进行脑源性神经营养因子免疫组织化学反应。结果表明：正常时，阳性反应物主要分布在脊髓I、II板层的神经终末、膨体与少量神经元胞体内。术后3 d，术侧II板层阳性神经终末和膨体密度开始减少，6d减少至高峰，到第12 d时两者又均恢复到正常水平，而阳性神经元胞体的数量却无明显变化。作者认为3 d、6 d的减少主要与邻近背根节切除后，其神经纤维和膨体溃变有关；12 d时，保留的Ls背根逐渐侧支出芽，且与靶细胞再建功能联系，故脑源性神经营养因子阳性神经纤维和膨体数均趋于恢复。说明脑源性神经营养因子既参与脊髓的正常生理功能，也与其损伤后的可塑性有关。
