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肿瘤干细胞与骨肉瘤
肿瘤干细胞是存在于恶性肿瘤细胞中为数极少却具有无限增殖并能自我更新的肿瘤细胞.研究证实急性髓系白血病中CD34+CD38-Thy-的白血病细胞即为白血病干细胞,Wnt旁路的异常在白血病的形成中发生着重要作用.已证实实体瘤(乳腺癌、脑肿瘤、前列腺癌及鳞状上皮细胞癌)中存在具有干细胞特性的肿瘤细胞.而骨肉瘤当中存在可能起源于间充质干细胞的肿瘤干细胞.本文即重点描述肿瘤干细胞的研究新进展,及其对骨肉瘤治疗方面的意义.
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骨肉瘤干细胞起源、分离纯化及鉴定的研究进展
近年来的研究已证实骨肉瘤及其他恶性肿瘤中存在肿瘤干细胞,表明骨肉瘤干细胞在骨肉瘤的发生、发展中起着重要作用,但目前文献还未报道特异性高的标志物用于分选鉴定骨肉瘤干细胞,针对骨肉瘤干细胞治疗的临床应用还有很大的提升空间.该文就肿瘤干细胞学说及其细胞来源、骨肉瘤干细胞分离纯化及鉴定方法、免疫学表型等研究现状进行综述.
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依维莫司增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞的作用
背景:阿霉素能够抑制骨肉瘤细胞的增殖,但是阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用以及依维莫司联合阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用未见报道.目的:研究mTOR通路抑制剂依维莫司联合骨肉瘤化疗一线药物阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖及侵袭的影响.方法:用免疫磁珠分选法分离人骨肉瘤细胞株MG63中的CD133+骨肉瘤干细胞.MTT检测0,0.1,0.2,0.4 mg/L阿霉素以及0.2 mg/L阿霉素+20 μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖的影响.Transwell小室检测0.2 mg/L阿霉素和0.2 mg/L阿霉素+20 μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞侵袭的影响.Western Blot检测0.2 mg/L阿霉素和0.2 mg/L阿霉素+20 μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白表达的影响.结果与结论:①阿霉素能在一定质量浓度下抑制骨肉瘤干细胞的增殖,且依维莫司联合阿霉素较单独使用阿霉素时明显抑制骨肉瘤干细胞的增殖,说明依维莫司能够增强阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖的抑制作用;②与单独使用阿霉素比较,依维莫司联合阿霉素作用于骨肉瘤干细胞后侵袭细胞数明显减少;③依维莫司联合阿霉素显著抑制骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白的表达,提示依维莫司能够增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞增殖与侵袭的能力.
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长期低氧对骨肉瘤细胞增殖与分化的影响
目的 观察长期低氧对骨肉瘤细胞增殖、分化及骨肉瘤干细胞自我更新能力的影响.方法 采用噻吩蓝(MTT)比色法观察低氧对骨肉瘤细胞系MG63增殖的影响.后续试验分为两组:第1组为低氧处理组,将MG63细胞在低氧环境下培养1周后进行实验;第2组为常氧对照组.应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测两组骨肉瘤细胞的成骨分化基因(Runx2和OC)、胚胎干细胞标志基因Oct3/4、原癌基因c-Myc及低氧诱导因子(HIF)-1a、2a的表达.采用无血清悬浮球培养法观察并比较两组细胞肉瘤球数目和体积的差异.采用免疫组织化学染色法检测两组细胞中HIF-1a和HIF-2a蛋白的表达.结果 培养第6、9天,低氧处理组的光密度(D)值为0.128±0.020、0.700±0.060,分别显著高于常氧对照组的0.073±0.050、0.480±0.120(P值均＜0.05).低氧处理组MG63细胞骨肉瘤球的数目为(24±10.97)个,显著高于常氧对照组的(1 3±3.95)个(P＜0.05);低氧处理组MG63骨肉瘤球的体积显著大于常氧对照组.与常氧对照组比较,低氧处理组细胞的成骨标志基因Runx2和OC均显著下调(P值均＜0.05),胚胎干细胞标志基因Oct3/4和原癌基因c-Myc表达均显著上调(P值均＜0.05),HIF-2α表达显著上调(P＜0.05);免疫组织化学染色检测到MG63细胞中有HIF-1a和HIF-2a蛋白表达.结论 长期低氧可促进骨肉瘤细胞MG63的增殖,抑制其成骨分化,并促进骨肉瘤球的自我更新能力,增强其干细胞特性.HIF-2a蛋白可能在这些过程中发挥关键作用.
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木犀草素对骨肉瘤干细胞增殖的影响
目的：研究木犀草素对骨肉瘤干细胞增殖的影响。方法用免疫磁珠分选法分离人骨肉瘤细胞株 MG-63中的CD133＋骨肉瘤干细胞。 MTT法检测0、0.01、0.02、0.04 mg／mL木犀草素溶液对骨肉瘤干细胞增殖的影响。 Western blot检测木犀草素对骨肉瘤干细胞Ki67蛋白以及对骨肉瘤干细胞JAK2／STAT3信号通路的影响。结果用免疫磁珠分选法，得到比率为（87.60±5.06）％的骨肉瘤干细胞。通过MTT实验发现，与对照组比较，0.01、0.02、0.04 mg／mL木犀草素能够抑制骨肉瘤干细胞的增殖（ P＜0.05）。 Western blot实验表明，与对照组比较，木犀草素各浓度抑制骨肉瘤干细胞Ki67蛋白的表达（ P＜0.05）。与对照组比较，木犀草素各浓度组对骨肉瘤干细胞JAK2／STAT3信号通路中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达具有抑制作用（ P＜0.05）。结论木犀草素对骨肉瘤干细胞具有抑制作用。
关键词： 木犀草素 骨肉瘤干细胞 增殖 Ki67 JAK2/STAT3信号通路 -
表柔比星对人骨肉瘤干细胞分离纯化的影响
目的 探讨分离纯化人骨肉瘤干细胞的新途径.方法 体外培养人骨肉瘤U2OS细胞和人骨肉瘤干细胞,免疫荧光检测人骨肉瘤干细胞球中CD105表达.表柔比星处理人骨肉瘤干细胞球,细胞计数试剂盒(CCK-8)法测增殖活性.Western blot法检测表柔比星处理后人骨肉瘤干细胞球Nanog和Oct4蛋白表达.结果 荧光显微镜下可见,人骨肉瘤干细胞球CD105呈阳性表达.表柔比星处理后人骨肉瘤干细胞球生长受抑制.Western blot检测结果显示,2.5 mg/L表柔比星处理组Nanog蛋白和Oct4蛋白相对表达量均为高且不再增加.2.5 mg/L表柔比星为分离培养人骨肉瘤干细胞的适浓度.结论 悬浮培养联合表柔比星较传统无血清培养,能更好的分离、纯化人骨肉瘤干细胞.
