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低氧增加人皮肤微血管内皮细胞系迁移并促进凋亡
目的 研究低氧环境对人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)迁移、凋亡及相关因子HIF-1α、VEGF、iNOS基因及蛋白表达的影响.方法 低氧培养人微血管内皮细胞,分为常氧组(对照组)和低氧组(CoCl2模拟化学低氧).CCK-8细胞生存实验确定合适处理浓度(200 μ mol/L CoCl2),划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞技术观察细胞凋亡;用RT-PCR和 Western blot技术检测HIF-1α、VEGF、iNOS mRNA和蛋白表达.结果 与常氧组比较,低氧组细胞迁移能力增加(P<0.05),凋亡增多(P<0.05),均呈时间依赖性.低氧组HIF-1α、HIF-1β、VEGF、iNOS mRNA表达较常氧组比较均增加(P<0.05),HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白表达较常氧组比较均增加(P<0.05),具有一定时间依赖性.结论 低氧能增强人皮肤微血管内皮细胞迁移能力,并促进其细胞凋亡,其可能机制与HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白表达升高有关.
关键词： 低氧 低氧诱导因子1α 静脉性溃疡 人皮肤微血管内皮细胞 -
Rho/ROCK信号通路参与晚期糖基化终产物诱导的人皮肤微血管内皮细胞骨架结构改变
本文旨在探讨Rho信号转导通路在晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导的人皮肤微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells,HMVECs)形态及功能改变中的作用及机制.体外培养HMVECs细胞株,分别以不同浓度的AGEs修饰的人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)处理不同时间,并设立对照组进行比较.用免疫荧光染色法、激光共聚焦显微镜观察细胞骨架肌动蛋白F-actin的结构及分布:用Rho激酶(Rho kinase,ROCK)抑制剂Y-27632或H-1152预处理细胞30 min后,与前者进行对比,同时用免疫印迹法检测Rho、ROCK及其磷酸化水平的变化;用FITC荧光标记蛋白漏出法测定单层内皮细胞的通透系数(apparent permeability coefficient,PA)值.结果显示,AGEs-HSA以剂量和时间依赖的方式引起HMVECs细胞骨架蛋白F-actin结构和分布的改变,未经修饰的HSA无此作用;ROCK特异性抑制剂Y-27632和H-1152均可抑制AGEs对细胞骨架的影响.AGEs-HSA引起Rho、ROCK磷酸化水平的增加(P<0.05),但对总蛋白没有明显影响.与对照组相比,AGEs-HSA使内皮细胞的通透性升高(P<0.01),Y-27632和H-1152均能抑制这种改变(P<0.01).以上结果提示,Rho信号通路在AGEs介导的HMVECs形态和功能改变中发挥了重要作用.
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形态学观察晚期糖基化终末产物诱导微血管内皮细胞核因子κB入核及其机制
目的 观察晚期糖基化终末产物(AGE)诱导的微血管内皮细胞核因子κB核转位,探讨氧化应激和内质网应激在核因子κB核转位中可能发挥的作用.方法 用AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)与人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)在体外共同培养1h,设立对照组进行比较,用免疫荧光化学染色示核因子κB的核转位情况;应用活性氧的抑制剂谷胱甘肽(GSH)、NADPH氧化酶(NOX)抑制剂Apocynin、内皮细胞高表达的NOX亚型NOX4的siRNA和内质网应激的标志性蛋白内质网转膜蛋白激酶1α(IRE1α)的siRNA分别预处理细胞后再给予AGE-BSA刺激,观察核因子κB的核转位情况.结果 与对照组相比,AGE-BSA可诱导人皮肤微血管内皮细胞核因子κB入核；应用GSH、Apocynin、NOX4siRNA和IRE1α siRNA预处理细胞均可抑制核因子κB的入核.结论 AGE对核因子κB的移位激活可能通过细胞内的氧化应激和内质网应激途径所介导.
关键词： 晚期糖基化终末产物 人皮肤微血管内皮细胞 核因子κB 氧化应激 内质网应激 -
低氧后处理活化腺苷A2a受体抑制皮瓣微血管内皮细胞凋亡
目的:本研究致力于探求腺苷A2a在低氧后处理抗凋亡中的作用.方法:从人上睑皮肤组织中分离培养原代人皮肤微血管内皮细胞,经6h低氧培养后,置于正常氧环境培养12h;或者经过5min常氧/5min低氧,3次循环,即低氧后处理,之后再常氧培养11.5h.结果:细胞凋亡比例和细胞凋亡相关蛋白(Bax/Bcl-2和caspase-3)表达量增高,均证明低氧/复氧可引起严重的损伤(P＜0.05).低氧后处理和选择性A2a受体激动剂——CGS-21680均可降低前两者(P＜0.05).同时,低氧后处理和CGS-21680均明显活化了腺苷A2a受体(P＜0.05).数据分析显示,凋亡的增加量与A2a受体蛋白的表达增加量呈显著负相关(r2=0.8177,P＜0.0001).结论:低氧后处理通过活化皮肤微血管内皮细胞表面的A2a受体发挥抑制凋亡的作用.
关键词： 游离皮瓣 人皮肤微血管内皮细胞 凋亡 低氧后处理 腺苷A2A受体 -
肌肽对脂多糖诱导的人皮肤微血管内皮细胞氧化应激及促炎症反应的影响
目的 探讨肌肽(camosine)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人皮肤微血管内皮细胞(human dermal microvessel endothelial cells,HDMEC)氧化应激及促炎症反应的影响.方法 建立脂多糖(1μg/mL)诱导的人皮肤微血管内皮细胞损伤模型,MTT法检测其细胞活性,荧光法测定细胞内活性氧族物质(ROS),试剂盒检测一氧化氮(NO)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)、3-硝基酪氨酸(3-NT)、白介素(IL)-1β,IL-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)酶活性.结果 肌肤预孵育或与脂多糖处理对人皮肤微血管内皮细胞细胞活力无明显影响,脂多糖增加胞内ROS和胞外上清液NO水平,增加胞内MDA,8-OHDG及3-NT含量,增加促炎症因子IL-1β,IL-6及TNF-α产生,降低SOD和GSH-Px酶活性,而肌肽可以恢复脂多糖所致的上述效应.结论 肌肽对脂多糖所致的人皮肤微血管内皮细胞损伤具有保护作用.
关键词： 肌肽 脂多糖 人皮肤微血管内皮细胞 氧化应激 促炎症反应
