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芍药苷人工抗原的合成与鉴定
利用高碘酸钠法合成芍药苷免疫抗原PF-BSA和包被抗原PF-OVA,并通过紫外光谱检测芍药苷成功与BSA/OVA偶联.小鼠经PF-BSA免疫后,体内可产生抗芍药苷抗体,酶联免疫分析法分析证明其免疫小鼠所得抗体效价达1:12 800,半数抑制浓度为0.791 mg·L-1,且与黄芩苷等9种中药小分子交叉反应极低.芍药苷人工抗原的合成及抗体的获得为建立ELISA和研制免疫检测试剂盒奠定了基础.
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连翘苷人工抗原的合成及免疫原性鉴定
基于高特异性,高灵敏度的小分子单克隆抗体的免疫分析方法的建立,对中药小分子化合物的的研究具有重要的意义,其中,小分子人工抗原的合成是中药小分子抗体制备的关键步骤.采用高碘酸钠氧化法分别合成连翘苷免疫抗原(FRn-BSA)和包被抗原(FRn-OVA),通过紫外光谱和薄层色谱法检测到连翘苷成功与BSA/OVA偶联,小鼠经FRn-BSA免疫后,体内可产生抗连翘苷抗体,效价在1∶8 000左右,线性范围为1～100 mg·L-1.成功合成的连翘苷人工抗原,可为下一步的单克隆抗体制备以及相应免疫方法的建立奠定基础.
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人参皂苷Re人工抗原的合成及单克隆细胞株的筛选
目的 合成并鉴定人参皂苷Re(GRe)人工抗原,用于单克隆抗体的制备.方法 采用高碘酸钠氧化法合成人参皂苷Re人工免疫抗原(GRe-BSA)和人工包被原(GRe-OVA);利用薄层色谱法及紫外光谱法鉴定人参皂苷Re人工免疫抗原和人参皂苷Re人工包被原;利用人参皂苷Re人工免疫抗原多次免疫BALB/c小鼠后,通过间接ELISA法测定免疫小鼠抗血清的效价和特异性.采用PEG法诱导小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,有限稀释法进行单克隆细胞株的筛选.结果 紫外光谱和薄层色谱法检测结果表明,人参皂苷Re与BSA/OVA偶联成功;小鼠抗血清效价大于1∶60 000,竞争抑制曲线表明,血清中的抗人参皂苷Re抗体可与人参皂苷Re产生特异性结合.有限稀释法筛选出能分泌抗人参皂苷Re抗体的单克隆细胞株2F4-3H10.结论 成功合成了人参皂苷Re人工免疫抗原和人参皂苷Re人工包被原,并可诱发小鼠产生相应特异性抗体;筛选出了人参皂苷Re单克隆细胞株,可用于腹水的大量制备及免疫组化技术的建立.
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柴胡皂苷a人工抗原的合成及免疫原性鉴定
目的 合成柴胡皂苷a(SSa)免疫抗原和包被抗原,为柴胡皂苷a单克隆抗体的制备及免疫分析方法的建立奠定基础.方法 采用高碘酸钠氧化法分别合成柴胡皂苷a免疫抗原(SSa-BSA)和包被抗原(SSa-PLL);用紫外光谱和薄层色谱法鉴定人工抗原是否偶联成功,并免疫小鼠,通过ELISA方法测定血清中抗体效价,通过间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测抗体特异性.结果 薄层色谱法检测结果显示柴胡皂苷a与BSA/PLL偶联成功.小鼠经SSa-BSA免疫后,体内可产生抗柴胡皂苷a抗体,效价1:80 000以上.结论 与其他人工抗原的鉴定方法相比,薄层色谱法具有独特的优势.成功合成的柴胡皂苷a人工抗原可用于下一步的单克隆抗体制备以及相应免疫方法的建立.
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栀子苷人工抗原的合成与鉴定
目的 为建立栀子苷的免疫学分析方法,首先合成栀子苷的人工完全抗原.方法 采用高碘酸钠氧化法分别合成栀子苷免疫抗原(GEN-BSA)和包被抗原(GEN-PLL).结果 优化了栀子苷抗原的合成条件,经紫外光谱检测栀子苷成功与BSA/PLL偶联,偶联比可达到11∶1,免疫小鼠后血清抗体效价达到1∶12 800.结论 成功合成栀子苷完全抗原,可用于下一步单克隆抗体的制备.
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桔梗皂苷D人工抗原的合成及鉴定
目的:合成桔梗皂苷D(PlatycodinD,PD)的人工完全抗原,为制备桔梗皂苷D的单克隆抗体及建立相应的免疫学分析方法奠定基础.方法:采用高碘酸钠(NaIO4)氧化法分别合成桔梗皂苷D免疫抗原(PD-BSA)和包被抗原(PD-OVA).用薄层色谱法鉴定人工抗原是否偶联成功;用动物免疫法测定其抗原性;并融合后筛选阳性孔.结果:薄层色谱法显示PD与BSA/OVA偶联成功;用合成的PD-BSA免疫小鼠后可使小鼠体内产生抗PD抗体,效价在1∶8000以上;融合可得出阳性孔.结论:成功合成了PD人工免疫原和包被原,可用于下一步PD单克隆抗体的制备及建立相应免疫学分析方法.
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重楼皂苷Ⅲ人工抗原的合成、鉴定及抗血清的制备
采用高碘酸钠氧化法分别合成重楼皂苷Ⅲ的免疫抗原(POL Ⅲ-BSA)和包被抗原(POL Ⅲ-OVA).通过薄层色谱法和紫外光谱鉴定人工抗原偶联成功,并用POL Ⅲ-BSA免疫小鼠,使小鼠体内产生抗重楼皂苷Ⅲ(polyphylin Ⅲ,POL Ⅲ)的抗体,效价1∶16 000以上,线性范围为1 ng·L-1～ 100 μg· L-1,并测定了POL Ⅲ与重楼皂苷Ⅰ (POL Ⅰ)、重楼皂苷Ⅱ(POL Ⅱ)、重楼皂苷Ⅶ(POL Ⅶ)的交叉反应.实验成功合成了POL Ⅲ的人工抗原,为制备POL Ⅲ的单克隆抗体以及建立快速、便捷的免疫分析方法奠定基础.
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电鳐乙酰胆碱酯酶标记第二抗体酶联免疫吸附测定法
目的:以电鳐乙酰胆碱酯酶标记二抗,建立该酶的酶联免疫吸附方法.方法:采用改良高碘酸钠氧化法.结果:标记过程中对AChE的酶活性影响较大的因素有pH值,温度以及NaIO4浓度.AChE酶标记的羊抗小鼠IgG的效价至少高于HRP酶标记的羊抗小鼠IgG一个数量级.结论:制备的乙酰胆碱酯酶标记第二抗体在酶联免疫吸附测定法中高效地取代辣根过氧化物酶及碱性磷酸酶标记第二抗体.
关键词： 电鳐乙酰胆碱酯酶 高碘酸钠氧化法 乙酰胆碱酯酶标记二抗 -
人参皂苷Rh1人工抗原的合成及免疫原性分析
目的:合成人参皂苷Rh1(GsRh1)的人工抗原,为获得其单克隆抗体奠定基础.方法:采用高碘酸钠氧化法分别合成GsRh1免疫抗原(GsRh1-BSA)和包被抗原(GsRh1-OVA);用紫外光谱法和薄层色谱法鉴定人工抗原的合成是否成功;利用GsRh1-BSA免疫小鼠制备血清多抗;通过优化封闭液和包被原工作浓度,建立酶联免疫吸附分析法(ELISA)的佳工作条件,并检测血清中抗体效价及特异性.结果:紫外光谱和薄层色谱法鉴定结果表明,GsRh1与BSA/OVA偶联成功,免疫后小鼠血清中产生了能特异性地与GsRh1结合的抗体,效价达到1∶32000,线性范围为10～ 10000 ng·mL-1,经分析确定ELISA的佳包被浓度为1∶4000,佳封闭液为10 mg·mL-1的明胶溶液.结论:成功合成了GsRh1人工抗原,并诱发小鼠产生了抗GsRh1的抗体,可用于下一步单克隆抗体的制备.
