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粘毛黄芩毛状根培养体系的建立及其黄芩苷的动态合成
目的:建立粘毛黄芩毛状根培养体系,并对其生长特性和次生代谢产物的合成进行初步探索.方法:采用卸甲型根癌农杆菌Agrobacterium tumofaciens C58C1感染粘毛黄芩无菌苗的茎段,获得毛状根,并得到了优质株系;测定了毛状根的生长曲线;利用PCR对毛状根进行T-DNA转化的检测及利用HPLC进行黄芩苷含量检测.结果:PCR检测结果表明,发根农杆菌Ri质粒的rolC基因已整合入粘毛黄芩毛状根基因组中.C58C1感染粘毛黄芩无菌苗茎段8 d后,毛状根陆续在其伤口处产生,28 d时幼茎产生毛状根的外植体达81%.1/2 MS液体培养32 d后毛状根干重增加了17.42倍,总黄酮和黄芩苷含量分别增加了21.60,25.56倍.结论:粘毛黄芩毛状根离体培养的建立为进一步进行药用活性成分的工业化生产奠定了基础.
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粘毛黄芩根的化学成分研究
目的研究粘毛黄芩(Scutellaria viscidula Bge.)化学成分.方法利用各种色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定.结果分离得到8个化合物,分别鉴定为:千层纸素A(oroxylin A,Ⅰ)、汉黄芩素(wogonin,Ⅱ)、白杨素(chrysin,Ⅲ)、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮(5,7,4′-trihydroxy-8-methoxyflavone,Ⅳ)、黄芩素(baicalein,Ⅴ)、粘毛黄芩素Ⅲ(viscidulin Ⅲ,Ⅵ)、粘毛黄芩素Ⅰ(viscidulinⅠ,Ⅶ)、汉黄芩素苷(wogonoside,Ⅷ).结论化合物Ⅲ、Ⅳ为首次从该植物中分离得到.
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黄芩及其非正品的鉴别
通过来源性状、显微特征、簿层色谱这几方面对正品黄芩与其非正品进行鉴别区分.
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高效液相色谱法测定蒙药粘毛黄芩中黄芩苷的含量
目的 采用高效液相色谱法测定粘毛黄芩中黄芩苷含量.方法 色谱条件为:采用C18柱,以甲醇-1%冰醋酸的水溶液(54:46)为流动相,检测波长280 nm.结果 平均回收率98.7%,RSD为0.96%.结论 此法简便、灵敏、快速、可靠、重复性好,可用于粘毛黄芩药材的质量控制.
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黄芩及粘毛黄芩种子形态的电镜扫描比较
目的 为准确鉴别黄芩和粘毛黄芩种子提供形态学依据.方法 采用扫描电镜法对两黄芩种子种表面超微特征进行比较观察,对其进行鉴别.结果 黄芩与粘毛黄芩种子之间在种皮表面超微结构特征上具有明显差别,可用于鉴别.结论 利用扫描电镜可以有效鉴别两种黄芩种子.
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粘毛黄芩CHS基因的克隆分析及其正反义植物表达载体的构建
目的:获得粘毛黄芩查尔酮合成酶(CHS)基因正反义植物表达载体,通过转化粘毛黄芩进一步探讨CHS在黄酮化合物生物合成途径上的作用机理.方法:通过RT-PCR从粘毛黄芩总RNA扩增出CHS基因目的片段,克隆至PMD18-T载体,测序并进行生物信息学分析.结果:测序证明序列正确,同时推测出CHS氨基酸序列及三维结构.克隆片段和pCAMBIA1304~+载体用Blg Ⅱ和BstE Ⅱ双酶切,然后连接CHS基因目的片段及pCAM-BIA1304~+载体大骨架片段,得到CHS正反义植物表达载体.结论:成功构建粘毛黄芩CHS基因正反义植物表达载体,并通过冻融法转化C58C1和LBA4404,为农杆菌介导的粘毛黄芩CHS基因对植物的遗传转化奠定基础.
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黄芩、粘毛黄芩及沙滩黄芩种子的蛋白质电泳鉴别
目的 建立黄芩、粘毛黄芩和沙滩黄芩种子的蛋白质电泳图谱,将图谱作为黄芩种子及混淆品鉴定的指征.方法 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对3种黄芩种子的蛋白质电泳图谱进行分析.结果 不同产地的黄芩种子的电泳图谱基本一致,同属3种黄芩种子的蛋白质电泳图谱具有明显差异.结论 聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱可作为鉴别3种黄芩种子的指征.
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基于HPLC法的黄芩和粘毛黄芩药用活性成分相似性、多样性评价
目的：评价黄芩及粘毛黄芩中活性成分的相似性及多样性，研究不同干燥方法对两者的影响。方法在资源调查、收集的基础上，经不同干燥方法处理后，以HPLC法测定活性成分含量，并进行对比分析。结果60℃烘干提高了黄芩中的黄芩素含量，对其他成分没有显著影响；但对粘毛黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量有一定程度的降低。另外，粘毛黄芩中未检出野黄芩苷；粘毛黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量（分别为9．89％和2．27％）与黄芩（分别为10．23％和2．33％）相比无显著差异（ P＞0．05），但黄芩素和汉黄芩素的含量（分别为0．21％和0．08％）均显著低于黄芩（分别为0．40％和0．16％）（ P＜0．05）。结论不同干燥方法对活性成分有一定影响，粘毛黄芩与黄芩活性成分有差异。
