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RNA干扰技术新进展
20世纪90年代初,科学家在矮牵牛花中导入与花青素合成有关的查尔酮合成酶基因,原以为转基冈的牵牛花会变得更鲜艳,结果却发现一些花反而变成白色,这种现象引起人们的高度关注,之后的研究将这种过度表达内源基因而引发的基因沉默称为共阻遏.
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贯叶金丝桃查尔酮合成酶基因的生物信息学分析
目的 用生物信息学软件分析贯叶金丝桃查尔酮合成酶基因编码蛋白的多种蛋白质性质,获取该基因的相关因素.方法 利用Protparam,GOR4,ProtScale,Protfun和NetPhos软件预测和分析贯叶金丝桃查尔酮合成酶基因编码蛋白的氨基酸组成、理论等电点、结构域、活性位点、卷曲螺旋、疏水性、糖基化位点、磷酸化位点及二级结构.结果 推测贯叶金丝桃查尔酮合成酶基因编码蛋白分子式为:C1910H3056N508O565S18,理论等电点pI 6.12;并含有一个查尔酮合成酶活性位点:156 - 172( RLmMyQqGCFAGGTvLR).该蛋白含有163个α-螺旋,81个延伸链,145个无规则卷曲,1个N-糖基化位点,1个O-糖基化位点,17个磷酸化位点,包括8个丝氨酸磷酸化位点,8个苏氨酸磷酸化位点和1个酪氨酸磷酸化位点.结论 该蛋白推测是一个疏水性稳定蛋白,属于连接酶.
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粘毛黄芩CHS基因的克隆分析及其正反义植物表达载体的构建
目的:获得粘毛黄芩查尔酮合成酶(CHS)基因正反义植物表达载体,通过转化粘毛黄芩进一步探讨CHS在黄酮化合物生物合成途径上的作用机理.方法:通过RT-PCR从粘毛黄芩总RNA扩增出CHS基因目的片段,克隆至PMD18-T载体,测序并进行生物信息学分析.结果:测序证明序列正确,同时推测出CHS氨基酸序列及三维结构.克隆片段和pCAMBIA1304~+载体用Blg Ⅱ和BstE Ⅱ双酶切,然后连接CHS基因目的片段及pCAM-BIA1304~+载体大骨架片段,得到CHS正反义植物表达载体.结论:成功构建粘毛黄芩CHS基因正反义植物表达载体,并通过冻融法转化C58C1和LBA4404,为农杆菌介导的粘毛黄芩CHS基因对植物的遗传转化奠定基础.
