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使用cDNA PCR-文库技术扩增感兴趣样品的cDNA
在病理学研究中对病变组织和正常组织进行基因表达差异的分析,可能获得与疾病发生发展相关联的致病基因.
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UROC28基因cDNA的克隆及其原核表达
目的:克隆人UROC28基因cDNA并在原核细胞中表达.方法:用RT-PCR从前列腺癌PC-3细胞系中扩增UROC28基因cDNA,并克隆到载体pUC-19中.经测序证实后,用HindⅢ /EcoRI双酶切,亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,并转化E.coli DH5α菌株.取工程菌,用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE鉴定.结果:①经RT-PCR、测序和酶切鉴定,成功地克隆了人UROC28基因cDNA;②经IPTG诱导的重组质粒pGEX-4T- UROC28表达出相对分子质量(Mr)约为42 000的融合蛋白,与预期的结果相符.结论:成功克隆到人UROC28基因cDNA,并在E.coli DH5α中表达出GST- UROC28融合蛋白.
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人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆与测序
目的 探讨通过分子生物学技术克隆人铜锌超氧化物歧化酶的cDNA片段.方法 从人正常肝细胞中提取总RNA,然后对其进行反转录产生第1条cDNA链.根据GeneBank中人铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)cDNA序列(序列号AB087266)设计1对PCR引物,对反转录后产生的第1条cDNA链进行PCR扩增,获得目的 基因.结果 获得459bp预期大小的PCR产物,经琼脂糖凝胶电泳和测序验证,使用序列分析软件证明,提取的是所需要的hSOD1cDNA的片段.结论 获得的目的 片段纯度高,未降解,能满足进一步试验的需要.
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硫酸右旋糖苷对人胃癌MKN1细胞的黏附以及整合素β1表达影响的研究
目的通过观察细胞的黏附过程和整合素β1的cDNA的表达,研究硫酸右旋糖苷(DS) 抑制人胃癌MKN1细胞株的黏附过程的机制.方法用位相差显微镜对MKN1细胞在培养盘上的附着过程及形态变化进行了观察.用半定量RT-PCR法对整合素β1 的cDNA的表达水平进行了测定.结果 DS抑制了MKN1细胞在培养盘上的附着,培养48小时后仍有部分细胞处于游离状态.在DS治疗组,黏附细胞和游离细胞内整合素β1的cDNA的表达水平分别减少到非治疗细胞的74% 和38%.结论 DS对人胃癌细胞株MKN1的黏附过程的抑制与对整合素β1 cDNA表达的抑制有关.
