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豚鼠心肌细胞分离方法及电生理特性的观察
目的:建立膜片钳实验室单个心肌细胞的分离方法和膜片钳技术平台.方法:采用酶解法分离豚鼠心室肌细胞;在膜片钳全细胞模式下记录不同基础刺激周长时的动作电位以及L-型钙电流、延迟性整流钾电流.结果:酶解法分离豚鼠心室肌可以得到90%的存活细胞;豚鼠的单个心室肌细胞静息电位为(-74.0±2.2)mV,基础刺激周长1 000 ms时复极90%的动作电位时程(APD90)为(313.2±20.72) ms;APD90和复极50%的动作电位时程(APD50)均随着基础刺激周长的延长而延长.L-型钙电流峰值电流密度为(-7.36±1.10)pA/pF,0.1 mmol/L verapamil灌流后为(-1.22±0.49 )pA/pF,100 μmol/L CdCl2灌流后内向电流消失;延迟性整流钾电流密度为(4.88±0.96)pA/pF,2 μmol/L Dofetilide灌流后降低为(3.48±0.37)pA/pF.结论:酶解法分离的豚鼠心室肌细胞可以满足膜片钳实验的要求,此膜片钳技术可作为更深入电生理研究的平台.
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膜片钳实验软件Pclamp在单位放电中的应用
应用膜片钳实验系统及其软件Pclamp 6.0,采集和分析脊髓神经元单位放电信号,并与其它方法进行对比,发现Pclamp是一种准确可靠的分析软件,可用于单位放电的记录和分析.
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适于膜片钳实验的大鼠心肌细胞分离
目的：对酶解分离大鼠心肌细胞的条件进行探索并优化。方法采用Langendorff 装置，酶解恒温灌流消化及梯度复钙等方法对大鼠心肌细胞进行分离和处理。结果当钙离子浓度为30μm、胶原酶含量0.4 g/L，分离时间为20～30 min的条件下，可分离得到大量边缘光滑、完整，横纹清晰，表面无空泡，长杆状的心肌细胞，其比例约为60%～80%，将细胞室温静置2～6 h，采取梯度复钙法对所得细胞进行复钙处理，虽有部分细胞出现收缩、死亡，但仍然可得到形态好、耐钙、静止无收缩，容易形成高阻封接、易破膜的心肌细胞，其比例约为40%～50%。结论：本实验探索出的心肌细胞分离方法过程简便，结果稳定，可用于后续膜片钳实验。
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中药研究中膜片钳技术的应用
膜片钳技术是一个应用范畴广泛、技术比较成熟的电生理技术,不仅可以用来记录离子通道的活动,与血清药物化学、分子生物学、光遗传学等结合应用目前已经非常广泛,通过膜片钳技术能够生动的观测到蛋白质分子的活动情况,深入了解离子通道的功能及细胞调控功能的物质基础.伴随中医药领域的现代化研究不断深入,借助膜片钳技术对离子通道的检测而对中药有效性和安全性进行有效的预测和筛选,将成为未来中医药领域研究中的一大趋势,本文对膜片钳技术以及中医药领域的应用进行综述.
