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黄芪活性成分QST、QT对CHOnl细胞M1受体及其偶联G-蛋白结合活性的影响
目的:观察黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶G-蛋白结合活性的影响.方法:以放射配基结合分析法检测CHOml细胞M1受体的结合特性,用[35S]GTPγS结合活性检测M1受体偶联的C-蛋白的结合活性,并计算偶联效率.结果:QST对M1受体密度、[35S]GTPγS结合活性、偶联效率有上调作用(P＜0.01),而QT无作用(P＞0.05).结论:QST对M1受体的偶联功能有上调作用.
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M1胆碱受体选择性别构激动剂的虚拟筛选和体外活性研究
目的:M1毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M1受体)在改善学习和记忆等高级认知功能障碍中起重要作用,本文利用计算机辅助药物设计和高表达各M受体亚型的CHO细胞(Chinese hamster ovary cell,中国仓鼠卵巢细胞),以期筛选获得新型M1受体选择性别构激动剂.方法:通过计算机辅助药物设计方法,对已知具有M1受体选择性作用别构激动剂与M1受体的晶体结构进行对接,确定活性对接口袋,据此进行化合物库虚拟筛选;利用高表达各M受体亚型的CHO细胞,对化合物进行体外活性检测.结果:虚拟筛选得到184个化合物,其中,体外实验显示化合物AJ-292和AG-205-6对M1受体有明显的激动效果,而对M3、M5受体则无影响.结论:综合利用虚拟筛选、结构分析以及特异性活性分析,筛选出具有M1受体高选择性激动作用的化合物AJ-292和AG-205-6,为设计开发新型的M1选择性别构激动剂奠定了基础.
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知母皂甙元对大鼠脑内总M及M1受体的影响
目的观察知母皂甙元对青年和老年大鼠脑M及M1受体的不同影响.方法以对M1受体有相对选择性的哌仑西平为非标记竞争剂,3H-QNB为非选择性标记配基,建立M和M1受体的放射配基竞争结合分析方法,观察知母皂甙元对青年大鼠和老年大鼠脑M和M1受体的影响.结果与青年大鼠相比,老年大鼠脑M及M1受体减少,知母皂甙元能上调M和M1受体;对正常青年大鼠脑M及M1受体的密度,知母皂甙元没有影响.结论知母皂甙元对下降的M及M1受体密度有明显的上调作用,但不超过正常值,对正常水平的M及M1受体密度,知母皂甙元不会造成密度过高.
关键词： 知母皂甙元 M胆碱受体 M1受体 放射配基受体竞争结合分析 -
盐酸戊乙奎醚对小鼠缺氧损伤的影响及其机制研究
目的 研究盐酸戊乙奎醚(PHC)抗小鼠缺氧损伤的作用,并初步探讨其机制.方法 采用不同缺氧模型,实验随机分为对照组、PHC 0.04 mg·kg-1组、PHC0.12 mg·kg-1、PHC 0.36 mg· kg-1组.观察小鼠的存活时间,检测脑、心组织在缺氧环境下膜脂质过氧化、O2-和·OH含量的变化.结果 PHC可延长缺氧环境下小鼠的存活时间,降低脑、心组织的膜脂质过氧化产物,降低O2-和·OH的含量.结论 PHC可增强小鼠抗缺氧能力,从而对缺氧损伤具有保护作用,可能与抑制机体缺氧时脑、心组织的膜脂过氧化、清除氧自由基等有关.
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应用放射性免疫方法建立抗早老性痴呆药的M1受体筛选模型
目的:建立M1受体筛选模型,用于抗早老性痴呆药物的筛选.方法:在人胚肾细胞上表达人源M1受体,通过检测胞内cAMP来监测受体的激动情况.使用外源性的3H-cAMP竞争胞内的cAMP结合位点.使用氯化乙酰胆碱作为阳性药来确证模型的可靠性.结果:初步建立了M1受体人胚肾细胞表达体系.使用不同浓度的氯化乙酰胆碱(10-9～10-4mol/L),胞内的cAMP 浓度有相关性变化(10.343×10-4～33.754×10-4 pmol/μl).结论:本筛选模型对M1受体激动剂有阳性反应,可用于抗早老性痴呆药物的筛选.
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毒蕈胆碱M1受体激动剂的高通量筛选模型
目的建立毒蕈碱样胆碱M1受体激动剂的高通量筛选模型,以此模型进行M1受体激动剂筛选.方法将M1受体基因质粒(M1/pCDNA3.1)与报告基因质粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC)按1∶5的比例共转染HEK293,建立了一个稳定的M1受体激动剂报告基因筛选细胞株.配体与细胞表面M1受体结合后,激活相应的信号通路,调节报告基因的表达,通过测定荧光酶素报告基因表达水平的变化,评估配体激活M1受体的生物活性.结果通过对筛选条件,如细胞数目、荧光素酶表达时间、底物浓度的优化,建立了可靠的筛选方法,并对多种抗衰老中药水提物进行了筛选,找到3种对M1受体有活性的中药.结论该系统能准确、稳定、有效地应用于M1受体激动剂的高通量筛选.
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脑慢性低灌注大鼠海马M1 受体、ADAM17水平变化及意义
17表达较B组明显下降(P均＜0.01).结论 脑慢性低灌注可损害老龄大鼠学习记忆能力,导致AD发生,其机制可能与海马组织M1受体及ADAM17的表达下降有关.
关键词： 阿尔茨海默病 脑低灌注 M1受体 解整合素-金属蛋白酶17 -
盐酸戊乙奎醚对沙土鼠短暂性脑缺血卒中指数的影响及其机制的研究
目的 研究盐酸戊乙奎醚(PHC)对沙土鼠短暂性脑缺血卒中指数的影响,并初步阐明其机制.方法 采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型,分为假手术组、缺血再灌注(模型)组、PHC 0.026、0.24 mg· kg-1组、阿托品组,观察沙土鼠短暂脑缺血再灌注6h内的神经症状并计算卒中指数;检测海马及皮质谷胱甘肽过氧化物酶(GSH - Px)及Na+,K+- ATP酶的含量;应用流式细胞仪测定海马神经元细胞内游离钙离子的浓度,放射免疫法测定血液中TXB2、6- Keto - PGF1α的含量.结果 PHC能明显降低沙土鼠短暂脑缺血卒中指数,升高海马及皮质Na+,K+- ATP酶及GSH - Px含量,同时减少海马神经元细胞内游离钙离子浓度以及血液中TXB2与6- Keto - PGF1α的比值.结论 PHC可改善沙土鼠短暂脑缺血后卒中的症状,可能与其改善能量代谢、增强清除自由基的能力、减少细胞内游离钙的浓度、降低血液中TXB2/6 - Keto - PGF1α的含量有关.
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嗅三针干预对AD大鼠学习记忆及大脑边缘叶M1受体含量的影响
目的 研究嗅三针疗法对AD模型大鼠的干预作用及其与大脑边缘叶M1受体含量的关系.方法 选取50只成年SD雄性大鼠,体重290±9 g.随机分为5组,即正常对照组、AD模型组、AD嗅神经切断组、嗅三针组、嗅三针对照组,每组各10只.首先制作模型,再运用嗅三针进行干预治疗,后运用水迷宫实验测试大鼠学习记忆能力,并采用ELISA法测定大脑边缘叶M1受体含量.结果 水迷宫试验结果显示:关于平均游泳路程和平均逃避潜伏期数据统计,AD嗅神经切断组与AD模型组相比,差异无显著性(P＞0.05);嗅三针对照组平均游泳路程和平均逃避潜伏期短于AD模型组(P＜0.05);嗅三针组平均游泳路程和平均逃避潜伏期短于嗅三针对照组(P＜0.05);嗅三针组及正常对照组均明显短于AD模型组(P＜0.01);大脑边缘叶M1受体含量比较:AD模型组与AD嗅神经切断组相比较,无显著性差异(P＞0.05);嗅三针组高于嗅三针对照组(P＜0.05);嗅三针组和正常对照组均明显高于AD模型组(P＜0.01).结论 嗅三针疗法可明显改善AD大鼠的学习记忆能力,此疗效机理与大脑边缘叶M1受体含量的升高密切相关.
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嗅三针治疗AD大鼠效应与海马M1受体表达量的相关性研究
目的 探讨嗅三针疗法对AD大鼠的疗效与海马组织胆碱能M1受体表达量的相关性.方法 选择体重介于290±10 g成年SD雄性大鼠50只.严格遵循随机原则将实验动物分为5组,各组10只,计有AD模型组、AD并嗅神经切断模型组、嗅三针组、嗅三针对照组和正常对照组.分别制作嗅神经切断大鼠模型和AD大鼠模型,实施嗅三针治疗后,采用水迷宫测试实验动物的学习记忆能力,同时利用ELISA法检测海马组织胆碱能M1受体表达量.结果 水迷宫测试验显示:6d平均游泳路程和平均逃避潜伏期比较,AD模型组明显长于嗅三针组和正常对照组(P＜0.01);AD模型组略长于嗅三针对照组(P＜0.05);嗅三针对照组略长于嗅三针组(P＜0.05);AD并嗅神经切断模型组与AD模型组相比,二者无明显差异(P＞0.05);海马组织胆碱能M1受体表达量测定:各组大鼠海马组织胆碱能M1受体表达量比较,AD模型组明显低于嗅三针组、嗅三针对照组和正常对照组(P＜0.01);嗅三针对照组略低于嗅三针组(P ＜0.05);AD并嗅神经切断模型组略低于AD模型组相比,二者无明显差异(P＞0.05).结论 嗅三针疗法可显著强化AD大鼠的学习记忆机能、并伴随海马组织胆碱能M1受体表达量水平的提升,嗅三针疗效的发挥与嗅觉传导通路有关.
