首页 > 文献资料
-
白细胞介素-4诱导人支气管上皮细胞ORMDL3基因表达的时效性
目的:观察白细胞介素-4 (IL-4)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)不同时间血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)的表达,探讨在细胞模型中IL-4对ORMDL3的转录和合成的影响.方法:用100ng/mL的IL-4诱导支气管上皮细胞后,分别在不同时间段(0、12、18、24、36、48h)用RT-PCR法检测ORMDL3 mRNA的表达,Western Blot法检测ORMDL3蛋白的表达.结果:正常支气管上皮细胞有微量的ORMDL3表达,IL-4诱导细胞后,ORMDL3mRNA和蛋白的表达均增加,在一定范围内呈时间依懒性,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其他各组与24h组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:IL-4能诱导ORMDL3高表达,并且在一定范围内呈时间依赖性.
关键词： 白细胞介素-4 人支气管上皮细胞 血清类黏蛋白1样蛋白3 时效 -
固本防哮饮对哮喘易感基因ORMDL3的调控作用
目的:探讨中药复方固本防哮饮对哮喘易感基因血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)蛋白表达的干预作用.方法:体内实验中,以卵蛋白(OVA)致敏小鼠为动物模型;体外实验中,以白介素-4(IL-4)和白介素-13(IL-13)刺激人胚肺成纤维细胞(MRC-5)为细胞模型,分别以固本防哮饮及其含药血清进行干预,通过肺组织病理评分评价动物造模用药前后的差异,Western Blot检测肺组织中及MRC-5细胞中ORMDL3蛋白含量的改变.结果:体内实验中,固本防哮饮能明显减轻肺组织气道炎性浸润(P＜0.05),且显著下调ORMDL3蛋白的表达(P＜0.05);体外实验中,固本防哮饮含药血清可下调MRC-5中ORMDL3蛋白表达(P＜0.05).结论:固本防哮饮改善哮喘患儿体质状态的药理机制之一可能在于调节易感基因ORMDL3蛋白的表达,从而有效减轻炎症反应,达到预防哮喘发作的目的.
关键词： 固本防哮饮 哮喘易感基因 血清类黏蛋白1样蛋白3 人胚肺成纤维细胞 -
血清类黏蛋白1样蛋白3表达与5岁以下儿童喘息的相关性分析
目的 探讨血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因表达量与5岁以下儿童喘息的相关性.方法 选取2013年8月-2014年12月在上海交通大学医学院附属仁济医院南院儿科就诊的89例5岁以下喘息患儿,依据哮喘预测指数(API)严格标准分为API+(过去1年内喘息次数≥4)组(n=42)和API-(过去1年内喘息次数1～3次)组(n=47);另设API0(5岁以下健康儿童)对照组(n=51).检测3组血清ORMDL3基因表达量,分析血清ORMDL3表达水平与API、喘息、鼻炎、总免疫球蛋白E(TIgE)、家族史、湿疹、年龄、尘螨等吸入性过敏原及牛奶等摄入性过敏原的相关性.结果 API+组患者血清ORMDL3表达水平显著高于API-和API0组.ORMDL3表达水平与API(r=0.405,P=0.000)、喘息(r =0.492,P=0.000)、湿疹(r=0.454,P=0.000)、户尘螨(r=0.298,P=0.000)、狗毛皮屑(r=0.251,P=0.000)和TIgE(r =0.170,P=0.002)存在正相关;与性别、家族史、鼻炎、年龄、屋尘螨、猫毛皮屑、树木、点青/分枝/烟曲/黑曲/交链霉及饮食因素(牛奶、鸡蛋白、牛肉、腰果、蟹、虾)不存在相关性(P＞0 05).结论 ORMDL3基因表达量与儿童API之间呈正相关,提示ORMDL3表达量与API相结合可作为诊断5岁以下儿童哮喘的诊断依据之一.
关键词： 血清类黏蛋白1样蛋白3 喘息 哮喘预测指数 5岁以下儿童 -
ORMDL3和Ets-1基因在反复喘息患儿外周血中的表达
目的 研究血清类黏蛋白1样蛋白3 (ORMDL3)和E26转录因子1(Ets-1)基因在反复喘息患儿外周血中的表达以及两者的相关性.方法 采用RT-PCR法检测非过敏性正常对照婴幼儿(A组,24例)和反复喘息患儿(B组,25例)外周血中ORMDL3和Ets-1 mRNA表达水平.结果 B组外周血ORMDL3和Ets-1 mRNA表达水平高于A组(P＜0.05);ORMDL3与Ets-1基因表达水平呈正相关(r=0.7704,P＜0.05).结论 ORMDL3和Ets-1基因的表达水平与患儿的反复喘息密切相关.
关键词： 血清类黏蛋白1样蛋白3 E26转录因子1 反复喘息 -
小鼠ORMDL3表达质粒的构建
目的 构建小鼠血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因的表达质粒,并在小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3细胞)中检测其过表达效果.方法 根据小鼠ORMDL3蛋白的编码序列设计引物,以NIH3T3细胞cDNA为模板,PCR扩增ORMDL3的编码序列,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ酶切位点之间,并测序鉴定.由脂质体介导将pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1-ORMDL3质粒分别瞬时转染NIH3T3细胞中,24 h后收取细胞,抽取细胞全蛋白,Western blot检测ORMDL3蛋白的相对表达量.结果 成功构建小鼠ORMDL3表达质粒pcDNA3.1-ORMDL3.该质粒瞬时转染至NIH3T3细胞内可有效增加ORMDL3蛋白表达2倍左右(P＜0.05).结论 成功构建小鼠ORMDL3表达质粒,为后续小鼠动物模型研究ORMDL3基因的功能及致病机制提供依据.
关键词： 血清类黏蛋白1样蛋白3 哮喘 -
Ets-1基因真核表达载体的构建及其对人ORMDL3启动子的影响
目的 探讨Ets-1基因对人血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)启动子的影响.方法 RT-PCR扩增Ets-1基因,将产物克隆至真核载体pcDNA3.1(+)内,构建含Ets-1基因的重组真核表达质粒pcDNA-Ets-1.重组质粒转染人胚肾HEK-293细胞,Westernblot检测Ets-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测Ets-1过表达后人ORMDL3启动子的活性.结果 核酸序列分析及Westernblot结果证实,构建含Ets-1基因的重组真核表达质粒pcDNA-Ets-1成功;过表达Ets-1基因能增强人ORMDL3启动子的活性.结论 成功构建了含Ets-1基因的重组真核表达质粒.Ets-1基因可促进人ORMDL3启动子的转录活性.
关键词： Ets-1 血清类黏蛋白1样蛋白3 支气管哮喘 -
反复喘息患儿外周血血清类黏蛋白1样蛋白3基因表达水平的意义
目的 探讨3岁以下反复喘息患儿外周血血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因在不同临床表型中的表达水平及其临床意义.方法 选取2010年9月至2012年9月在南京医科大学第一附属医院就诊的3岁以下反复喘息患儿25例,分为非特应性体质的喘息A组(14例)和特应性体质的喘息B组(11例);健康对照组无任何变应性疾病病史,包括药物及食物过敏、变应性鼻炎、湿疹,共24例,采用反转录PCR法检测外周血ORMDL3基因mRNA表达水平,并分析各组病例临床特点.结果 喘息A组和喘息B组ORMDL3基因表达水平高于健康对照组(t=10.29、5.73,P＜0.01),喘息B组ORMDL3基因水平高于喘息A组,差异有统计学意义(t=14.12,P＜0.01).喘息组中发病率存在性别差异,男＞女;喘息发作存在季节差异,冬季和春季高发.结论 ORMDL3基因的表达水平与＜3岁患儿的反复喘息密切相关,在特应性体质患儿更为明显,提示ORMDL3在反复喘息发病机制中起一定作用.
关键词： 血清类黏蛋白1样蛋白3 反复喘息 特应性 -
MicroRNA-34a对小鼠气道平滑肌细胞增殖和ORMDL3表达的影响
目的 探讨支气管哮喘小鼠模型中microRNA-34a(miR-34a)对气道平滑肌细胞(ASMC)增殖与血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)表达的影响.方法 以卵清蛋白(OVA)诱导复制的小鼠哮喘模型和培养的ASMC为研究对象,筛选与ORMDL3密切相关的miRNA;利用miR-34a-mimic使miR-34a过表达;用苏木精-伊红染色和MTT法探究其对ASMC增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测ORMDL3的表达变化.结果 OVA诱导下小鼠气道组织中miR-34a被抑制(P <0.05).miR-34a-mimic可减少哮喘小鼠ASMC异常增殖(P <0.05);miR-34a-mimic抑制ASMC在490nm下的光密度值和相对细胞活性(P <0.05);miR-34a-mimic下调哮喘小鼠气道组织中ORMDL3的表达,并抑制体外培养ASMC中ORMDL3的表达(P<0.05).结论 miR-34a可抑制ASMC的增殖和ORMDL 3基因表达,为今后哮喘发病机制的研究提供新的思路.
-
固本防哮饮对信号转导及转录激活因子1及哮喘易感基因ORMDL3的影响
目的 观察固本防哮饮对信号转导和转录因子1 (STAT1)及哮喘易感基因血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)的调控作用,分析其防治哮喘机制.方法 利用白介素-4诱导人支气管上皮细胞建立哮喘细胞模型,固本防哮饮含药血清对其进行干预,采用实时荧光定量-PCR(Real Time PCR)、免疫印迹法(Western blotting,WB)、免疫荧光法(IF)分别从基因、蛋白水平检测细胞中ORMDL3和STAT1的表达及亚细胞定位.结果 与正常组比较,模型组ORMDL3、STAT1 mRNA含量升高,但差异无统计学意义(P＞0.05),固本防哮饮可降低模型组细胞ORMDL3、STAT1 mRNA水平,差异无统计学意义(P＞0.05);与正常组比较,模型组OR-MDL3、STAT1蛋白表达显著增加(P＜ 0.05或P＜0.01),与模型组相比,固本防哮饮组ORMDL3及STAT1蛋白表达均显著(P＜0.05).结论 固本防哮饮对STAT1及ORMDL3的表达有一定的调控作用,可能为固本防哮饮防治哮喘的内在机制.
关键词： 固本防哮饮 哮喘 易感基因 血清类黏蛋白1样蛋白3 信号转导和转录因子1 -
ORMDL3和MMP-9在慢性支气管哮喘气道重塑中的作用机制及布地奈德的干预作用
目的 研究布地奈德(BUD)对慢性哮喘小鼠支气管上皮细胞的血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,及其对气道重塑的干预作用.方法 应用BALB/C小鼠随机分为对照组、哮喘组、BUD组,用OVA(卵清蛋白)和氢氧化铝建立哮喘小鼠模型,为进一步了解布地奈德对气道重塑的干预机制,第21天BUD组小鼠在OVA激发前30 min吸入布地奈德.12周后,用苏木精-伊红染色(HE staining)分析气道壁厚度改变,Masson染色观察气道胶原沉积,通过免疫组织化学染色法(immunohistochemistry staining),蛋白质印迹法(western blot),实时荧光定量PCR(real-time PCR)测定小鼠支气管上皮细胞ORMDL3,MMP-9的表达含量.结果 12周后,哮喘组和BUD组的气道壁厚度增加,胶原蛋白沉积,ORMDL3,MMP-9表达明显高于对照组,BUD组气道病理改变程度和ORMDL3,MMP-9的升高幅度均不及哮喘组.经相关性分析可发现,MMP-9表达增加与ORMDL3基因的表达上调具有相关性,并且二者的表达增高与气道壁厚度有明显相关性.结论 布地奈德可能通过下调ORMDL3,MMP-9基因的表达,抑制慢性哮喘气道重塑进程.
关键词： 布地奈德 血清类黏蛋白1样蛋白3 基质金属蛋白酶-9 气道重塑 慢性哮喘
